【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗肿瘤纳米制剂，特别是涉及一种脂质包覆的银纳米粒、pd-l1sirna、槲皮素（que）及石墨烯量子点纳米制剂及其在乳腺癌治疗药物制备中应用。
技术介绍
1、近年来，通过使用药物（特别是天然来源单体化合物）增强人体免疫系统对抗癌细胞的能力来治疗肿瘤疾病获得了越来越多的关注。于此同时，免疫激发过程中的程序性细胞死亡蛋白1（pd-1）处于重要位子。pd-1是一种免疫检查点分子，能够下调免疫系统功能和促进耐受，其与程序性细胞死亡配体1（pd-l1）结合可以使t细胞的增殖和活化受到抑制，最终诱导免疫逃逸，为肿瘤的治疗带来困难。阻断免疫检查点pd-1或pd-l1可以抑制肿瘤细胞的激活，从而提高免疫治疗抗肿瘤的效应。尽管pd-1/pd-l1抗体治疗在一些患者中取得了很强的抗肿瘤效果，但治疗过程中出现的免疫不良事件、肿瘤耐药等使其应用仍存在局限性。基因沉默技术可针对pd-1/pd-l1治疗发挥减毒增效作用。
2、纳米材料可以解决药物治疗过程中溶解性差、全身分布、获得性耐药等长期存在的问题，并提高诊断方法的性能，是癌症治疗和诊断的常用材料。在常见的纳米材料中，银纳米粒子是探索应用较为广泛的纳米材料之一，具有显著的物理化学特性，突出的抗菌效率，抗炎作用和抗肿瘤活性，常被用作生物材料，在制药领域和化妆品行业、抗感染治疗和伤口护理、食品和纺织业也有着广泛用途。有大量最新研究证实银纳米粒子可作为癌症治疗和替代策略中的治疗剂和诊断平台，修复和再生生物材料。银纳米粒毒性可根据其粒子大小产生不同变化，这一独特特性可使其在治疗肿瘤
3、槲皮素（que）是一种主要以糖苷的形式存在于植物中的单体成分，据报道，它具有包括抗氧化，抗癌，抗炎和抗菌在内的广泛生物作用。槲皮素在体内外的模型证明其预防、治疗作用都很强，能够引起双相剂量依赖效应。槲皮素通过抑制癌细胞增殖、诱导凋亡、pi3k/akt和丝裂原活化蛋白激酶(mapk)分子途径来抑制细胞有丝分裂过程实现其直接抗癌作用；与此同时，槲皮素可以激发肿瘤部位免疫反应，诱导免疫细胞富集于肿瘤组织，进而提高免疫系统杀伤癌细胞。但槲皮素水溶性差、体内半衰期短、肿瘤部位分布浓度低，这些性质影响了其抗肿瘤疗效。
4、如何将性质迥异的银纳米粒、pd-l1 sirna、槲皮素及石墨烯量子点（gqds）用同一纳米制剂进行装载，并使其具有靶向肿瘤组织实现定位释药，是亟需解决的技术难点。本专利技术人基于从事生物制药研究多年，拥有丰富的药物临床经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种脂质包覆银纳米粒、pd-l1 sirna、槲皮素和gqds的纳米制剂，实现靶向递药，提高药物体内稳定性，降低毒性的特性使之为肿瘤联合治疗提供更佳选择。
技术实现思路
1、本专利技术制备了一种脂质包覆银纳米粒、pd-l1 sirna、槲皮素及gqds纳米制剂。利用纳米制剂中的银纳米粒杀灭癌细胞，槲皮素作为免疫调节和增加肿瘤微环境免疫细胞浸润，pd-l1 sirna作为屏蔽和抑制癌细胞表面免疫，以及gqds示踪，实现协同治疗肿瘤的效果。
2、因此，本专利技术的目的制备一种抗肿瘤纳米制剂及制备方法，采用脂质包覆银纳米粒、pd-l1 sirna、槲皮素及gqds形成一种更安全且稳定纳米制剂，以改善应用于肿瘤治疗的基因递送过程中存在的技术瓶颈，为肿瘤联合治疗提供更佳选择。
3、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
4、一种抗肿瘤纳米制剂，所述抗肿瘤纳米制剂是由脂质包覆银纳米粒、pd-l1-sirna、槲皮素及gqds制成的纳米制剂；
5、所述纳米制剂的制备步骤为：
6、s1:在10-1000 r/min，0-10℃冰水浴条件下向1.0×10-3-30.0×10-3mol/l硼氢化钠溶液中滴加1.0×10-3-50.0×10-3mol/l柠檬酸钠溶液，二者混合溶液中缓慢滴加1.0×10-3-50.0×10-3mol/l硝酸银水溶液，搅拌反应30-60min后，即得到银纳米粒；
7、s2:将步骤s1中得到的银纳米粒在透析袋中透析，透析结束后，得到溶液a；
8、s3:向步骤s2中得到的溶液a中滴加1-1000 μmol/l pd-l1-sirna及1.0-100.0 g/l gqds悬浊液，再加入柠檬酸三钠-盐酸缓冲溶液调节ph到3.0-4.5，于37℃孵育5-120min，得到溶液b；
9、s4:将脂质、槲皮素充分溶于无水乙醇中，于50℃条件下注入溶液b中，于37℃孵育5-120 min，孵育结束后于1kd-300kd透析袋中透析除去乙醇，得到脂质包覆纳米制剂，即为抗肿瘤纳米制剂；所述纳米制剂的粒径大小为60nm～200nm。
10、在制备过程均为材料的自组装，在优选的环境条件下，可以得到符合设计要求的纳米粒子，全过程无需提供机械功来降低粒径，全过程安全可控，可实现自动化操作。此外，肿瘤组织血管的通透性较正常组织高，粒径大小为60 nm～200 nm的纳米粒子可穿过肿瘤组织血管，而不能穿过正常组织血管，因而可实现肿瘤富集同时降低正常组织中药物分布。
11、优选的，所述步骤s4中的脂质包括长循环磷脂和环肽修饰的长循环磷脂；所述脂质具体为由二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-环肽、二棕榈酰磷脂酰胆碱、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵组成，摩尔比例为1:1:10:10-10:1:1:1。
12、为达到长循环、主动靶向，同时提供足够载药能力的目的，采用二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-环肽、二棕榈酰磷脂酰胆碱、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵的组合而成的脂质。
13、优选的，所述抗肿瘤纳米制剂在乳腺癌治疗药物制备中的应用。
14、该纳米制剂具有同时装载各药效活性成分，并靶向肿瘤组织的效果。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
16、1. 在本专利技术中，在静电力和范德华力作用下，通过脂质包覆银纳米粒、pd-l1sirna、gqds、槲皮素形成粒度为60-200 nm的抗肿瘤纳米制剂；本专利技术制备工艺操作简单，可大规模生产；
17、2. 本专利技术纳米制剂是利用银纳米粒灭癌细胞，槲皮素作为免疫调节和增加肿瘤微环境免疫细胞浸润，pd-l1 sirna作为屏蔽和抑制癌细胞表面免疫，以及gqds的示踪作用，实现协同治疗，并提高药物体内稳定性。本专利技术纳米制剂还具有毒副作用小，生物相容性好，为肿瘤联合治疗提供更佳选择。
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1.一种抗肿瘤纳米制剂，其特征在于：所述抗肿瘤纳米制剂是在静电力和范德华力作用下，由脂质包覆银纳米粒、PD-L1 siRNA、槲皮素及石墨烯量子点制成的纳米制剂；所述纳米制剂的制备步骤为：
2.如权利要求1所述一种抗肿瘤纳米制剂，其特征在于：所述步骤S4中的脂质包括长循环磷脂和环肽修饰的长循环磷脂；所述脂质具体为由二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-环肽、二棕榈酰磷脂酰胆碱、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵组成，摩尔比例为1:1:10:10-10:1:1:1。
3.如权利要求1-2任一项所述抗肿瘤纳米制剂在乳腺癌治疗药物制备中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤纳米制剂，其特征在于：所述抗肿瘤纳米制剂是在静电力和范德华力作用下，由脂质包覆银纳米粒、pd-l1 sirna、槲皮素及石墨烯量子点制成的纳米制剂；所述纳米制剂的制备步骤为：
2.如权利要求1所述一种抗肿瘤纳米制剂，其特征在于：所述步骤s4中的脂质包括长循环磷脂和环肽修饰的长...
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