【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于检测髓系肿瘤csf3r t618i突变的试剂盒及其专用引物与探针。
技术介绍
1、csf3r基因编码的细胞因子集落刺激因子3跨膜受体，是一种控制粒细胞的产生、分化和功能的细胞因子；接受由jak和src激酶家族介导的配体信号的刺激进而激活下游stat、pi3k和mapk信号通路的级联反应。csf3r基因的胚系功能失活性变异可引起先天性重度中性粒细胞减少；功能激活性的体细胞突变可引起不依赖配体的受体二聚化，引起信号传导的异常。在髓系肿瘤中，csf3r基因的体细胞突变可见于慢性中性粒细胞白血病(chronic neutrophilic leukemia，cnl)、不典型慢性粒细胞白血病(atypical chronicmyeloid leukemia，acml)和急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，aml)，在上述髓系肿瘤的诊断和鉴别诊断及靶向治疗中具有重要价值。
2、csf3r基因的体细胞突变形式主要包括外显子14的近膜突变(如t615a和t618i等)以及外显子17的截短突变(如d771fs、s783fs、y752*和w791*等)。其中csf3rt618i热点突变为csf3r基因在髓系肿瘤中最常见的激活型体细胞突变的形式，美国国立卫生研究院国家癌症研究所及美国儿童肿瘤学组协作开展的target aml研究在787例儿童aml中发现了19例csf3r突变患者，其中最常见的突变为t618i(11/19，57.9％)。相似的，一项来自中国的研究在101例伴ceb
3、目前用于csf3r t618i突变检测的方法主要有传统的sanger测序法和二代测序。sanger测序法灵敏度较差且不能定量；二代测序具有高通量、高灵敏度、可相对定量等优点，但其费用相对昂贵，实验操作及后续数据分析均相对复杂，适用于没有明确候选基因的病例的筛查，不适用于csf3r t618i突变这样单一基因且位点明确的基因突变的筛查及持续定量的跟踪检测。因此，目前亟需建立一种兼具高灵敏度、高特异度、可定量、可便捷操作且相对经济的检测方法来满足临床或科研工作中对csf3rt618i热点突变的检测。
4、美国abi公司的taqman-mgb探针(minor groove binder probe，taqman-mgb探针)是带有一个小沟结合物基团的寡核苷酸探针，其工作原理与taqman探针相同，但与传统的taqman探针相比具有以下优点：mgb增加了探针的tm值，因此探针可以更短，尤其适用于富含a/t序列，可提高匹配模板与非匹配模板之间的tm值差异，可进行更多重的pcr；提高信噪比，实验结果更精确，分辨率更高；实验步骤简单；稳定性及可重复性也大大提高。然而，目前尚没有专门用于检测基因组dna上的csf3r t618i热点突变的合适的引物和特异性的taqman-mgb荧光探针。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种用于检测基因组dna上的csf3r t618i热点突变的引物和taqman-mgb荧光探针。
2、为了实现上述目的，本专利技术首先提供了用于检测csf3r t618i突变的成套试剂。
3、本专利技术提供的用于检测csf3r t618i突变的成套试剂包括csf3r t618wt-fp、csf3r t618wt-rp、csf3r t618wt-mgb-probe和csf3r t618i-mgb-probe；
4、所述csf3r t618wt-fp为seq id no.1所示的单链dna分子；
5、所述csf3r t618wt-rp为seq id no.2所示的单链dna分子；
6、所述csf3r t618wt-mgb-probe为seq id no.3所示的单链dna分子；
7、所述csf3r t618i-mgb-probe为seq id no.4所示的单链dna分子。
8、上述成套试剂中，所述csf3r t618wt-mgb-probe和所述csf3rt618i-mgb-probe的5’端标记有发光颜色不同的报告荧光基团，3’端标记有不发光的淬灭基团和二氢环化吲哚卟啉-三肽。
9、进一步的，所述报告荧光基团可为fam或hex或vic，所述不发光的淬灭基团可为nfq。
10、再进一步的，所述csf3r t618wt-mgb-probe的5’端标记vic荧光基团。
11、所述csf3r t618i-mgb-probe的5’端标记fam荧光基团。
12、更进一步的，所述csf3r t618wt-fp、所述csf3r t618wt-rp、所述csf3rt618wt-mgb-probe和所述csf3r t618i-mgb-probe的摩尔比可为20:20:9:3。
13、为了实现上述目的，本专利技术又提供了上述成套试剂的新用途。
14、本专利技术提供了上述成套试剂在如下1)-10)任一种中的应用：
15、1)检测或辅助检测csf3r t618i突变；
16、2)制备检测或辅助检测csf3r t618i突变的产品；
17、3)检测或辅助检测待测者基因组dna是否发生csf3r t618i突变；
18、4)检测或辅助检测待测者基因组dna是否发生csf3r t618i突变的产品；
19、5)诊断或辅助诊断髓系肿瘤；
20、6)制备诊断或辅助诊断髓系肿瘤的产品；
21、7)筛查或辅助筛查髓系肿瘤患者；
22、8)制备筛查或辅助筛查髓系肿瘤患者的产品；
23、9)监测或辅助监测髓系肿瘤患者的治疗效果或治疗反应；
24、10)制备监测或辅助监测髓系肿瘤患者的治疗效果或治疗反应的产品。
25、为了实现上述目的，本专利技术还提供了用于检测csf3r t618i突变的试剂盒。
26、本专利技术提供的用于检测csf3r t618i突变试剂盒包括上述成套试剂。
27、进一步的，所述试剂盒中还包括阳性对照、野生型对照和阴性对照。
28、更进一步的，所述阳性对照为csf3r t618i突变阳性患者骨髓单个核细胞的基因组dna。
29、所述野生型对照为正常人骨髓单个核细胞的基因组dna。
30、所述阴性对照为不含dna的pcr扩增体系。
31、上述试剂盒在如下1)-10)任一种中的应用也属于本专利技术的保护范围：
32、1)检测或辅助检测csf3本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于检测CSF3R T618I突变的成套试剂，所述成套试剂包括CSF3R T618wt-FP、CSF3RT618wt-RP、CSF3R T618wt-MGB-Probe和CSF3R T618I-MGB-Probe；
2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述CSF3R T618wt-MGB-Probe和所述CSF3R T618I-MGB-Probe的5’端标记有发光颜色不同的报告荧光基团，3’端标记有不发光的淬灭基团和二氢环化吲哚卟啉-三肽。
3.根据权利要求2所述的成套试剂，其特征在于：所述CSF3R T618wt-MGB-Probe的5’端标记VIC荧光基团；
4.根据权利要求1-3任一所述的成套试剂，其特征在于：所述CSF3R T618wt-FP、所述CSF3R T618wt-RP、所述CSF3R T618wt-MGB-Probe和所述CSF3RT618I-MGB-Probe的摩尔比为20:20:9:3。
5.权利要求1-4任一所述的成套试剂在如下1)-10)任一种中的应用：
6.用于检测CSF3R T
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括阳性对照、野生型对照和阴性对照。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为CSF3R T618I突变阳性患者细胞的基因组DNA；
9.权利要求6-8任一所述的试剂盒在如下1)-10)任一种中的应用：
10.根据权利要求5或9所述的应用，其特征在于：所述髓系肿瘤包括慢性中性粒细胞白血病、不典型慢性粒细胞白血病和急性髓系白血病。
...【技术特征摘要】
1.用于检测csf3r t618i突变的成套试剂，所述成套试剂包括csf3r t618wt-fp、csf3rt618wt-rp、csf3r t618wt-mgb-probe和csf3r t618i-mgb-probe；
2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述csf3r t618wt-mgb-probe和所述csf3r t618i-mgb-probe的5’端标记有发光颜色不同的报告荧光基团，3’端标记有不发光的淬灭基团和二氢环化吲哚卟啉-三肽。
3.根据权利要求2所述的成套试剂，其特征在于：所述csf3r t618wt-mgb-probe的5’端标记vic荧光基团；
4.根据权利要求1-3任一所述的成套试剂，其特征在于：所述csf3r t618wt-fp、所述csf3r t618wt-rp、所述csf...
【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，黄晓军，廖明玥，周亚兰，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。