对制造技术

本发明专利技术包括工程化大范围核酸酶，其识别和切割人

【技术实现步骤摘要】
对PCSK9基因中的识别序列具有特异性的工程化大范围核酸酶
[0001]本申请是申请日为
2018
年4月
20
日和专利技术名称为“对
PCSK9
基因中的识别序列具有特异性的工程化大范围核酸酶”的
201880038349.0
号中国专利技术专利申请的分案申请
。


[0002]本专利技术涉及分子生物学和重组核酸

。
特别地，本专利技术涉及对
PCSK9
基因内的识别序列具有特异性的工程化大范围核酸酶
。
这种工程化大范围核酸酶可用于治疗心血管疾病和高胆固醇血症
(
包括常染色体显性家族性高胆固醇血症
)
的方法中
。
[0003]通过
EFS
‑
WEB
作为文本文件提交的序列表的引用
[0004]本申请包含序列表，其已经通过
EFS
‑
Web
以
ASCII
格式提交，并且将其全部内容本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种工程化大范围核酸酶，其识别和切割
PCSK9
基因内的识别序列，其中所述工程化大范围核酸酶包含第一亚基和第二亚基，其中所述第一亚基结合所述识别序列的第一识别半位点并包含第一超变
(HVR1)
区，并且其中所述第二亚基结合所述识别序列的第二识别半位点并包含第二超变
(HVR2)
区
。2.
如权利要求1的工程化大范围核酸酶，其中所述识别序列包含
SEQ ID NO:4。3.
如权利要求1或权利要求2的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR1
区包含与对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
24
‑
79
的氨基酸序列具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列
。4.
如权利要求1‑3中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR1
区包含对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一项的残基
24、26、28、30、32、33、38、40、42、44、46、68、70、75
和
77
的残基
。5.
如权利要求1‑4中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR1
区进一步包含对应于
SEQ ID NO:8
的残基
48、50、71
和
73
的残基
。6.
如权利要求1‑5中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR1
区包含
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
24
‑
79。7.
如权利要求1‑6中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR2
区包含与对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
215
‑
270
的氨基酸序列具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列
。8.
如权利要求1‑7中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR2
区包含对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
215、217、219、221、223、224、229、231、233、235、237、259、261、266
和
268
的残基
。9.
如权利要求7或权利要求8的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR2
区进一步包含对应于
SEQ ID NO:12
的残基
258
的残基
。10.
如权利要求1‑9中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述
HVR2
区包含
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
215
‑
270。11.
如权利要求1‑
10
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述第一亚基包含与
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基7‑
153
具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述第二亚基包含与
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
198
‑
344
具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列
。12.
如权利要求1‑
11
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述第一亚基包含对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
80
的残基
。13.
如权利要求1‑
12
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述第二亚基包含对应于
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
271
的残基
。14.
如权利要求1‑
13
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述第一亚基包含
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基7‑
153。15.
如权利要求1‑
14
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述第二亚基包含
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的残基
198
‑
344。16.
如权利要求1‑
15
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述工程化大范围核酸酶包含接头，其中所述接头共价连接所述第一亚基和所述第二亚基
。17.
如权利要求1‑
16
中任一项的工程化大范围核酸酶，其中所述工程化大范围核酸酶
包含
SEQ ID NO:6
‑
14
中任一个的氨基酸序列
。18.
一种多核苷酸，其包含编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶的核酸序列
。19.
如权利要求
18
的多核苷酸，其中所述多核苷酸是
mRNA。20.
如权利要求
19
的多核苷酸，其中所述
mRNA
是编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶和至少一种另外的多肽的多顺反子
mRNA。21.
一种重组
DNA
构建体，其包含编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶的核酸序列
。22.
如权利要求
21
的重组
DNA
构建体，其中所述重组
DNA
构建体包含含有启动子及编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶和至少一种另外的多肽的多顺反子核酸序列的盒，其中所述启动子驱动所述多顺反子核酸序列的表达以在靶细胞中产生多顺反子
mRNA。23.
如权利要求
21
的重组
DNA
构建体，其中所述重组
DNA
构建体编码病毒载体，所述病毒载体包含编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶的所述核酸序列
。24.
如权利要求
23
的重组
DNA
构建体，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体
、
腺病毒载体
、
慢病毒载体或重组腺相关病毒
(AAV)
载体
。25.
如权利要求
23
或权利要求
24
所述的重组
DNA
构建体，其中所述病毒载体是重组
AAV
载体
。26.
一种病毒载体，其包含编码权利要求1‑
17
中任一项的所述工程化大范围核酸酶的核酸序列
。27.
如权利要求
26
的病毒载体，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体
、
腺病毒载体
、
慢病毒载体或
AAV
载体
。28.
如权利要求
26
或
27
所述的病毒载体，其中所述病毒载体是重组
AAV
载体
。29.
如权利要求
26

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：精密生物科学公司，
类型：发明
国别省市：