包含经修饰的人制造技术

本申请涉及包含经修饰的人

【技术实现步骤摘要】
包含经修饰的人T细胞受体
α
恒定区基因的经遗传修饰的细胞
[0001]本申请是申请号为
201680069576.0
的专利技术名称为“包含经修饰的人
T
细胞受体
α
恒定区基因的经遗传修饰的细胞”的中国专利申请的分案申请，原申请是
2016
年
10
月
05
日提交的
PCT
国际申请
PCT/US2016/055492
于
2018
年
05
月
28
日进入中国国家阶段的申请
。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求
2016
年2月
19
日提交的题为“Genetically
‑
Modified Cells Comprising a Modified Human T Cell Receptor Alpha Constant Region Gene”的美国临时申请第<br/>62/297本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
经遗传修饰的细胞，其基因组中包含经修饰的人
T
细胞受体
(TCR)
α
恒定区基因，其中所述经修饰的人
TCR
α
恒定区基因从5’
至3’
包含：
(a)
所述人
TCR
α
恒定区基因的5’
区；
(b)
外源多核苷酸；和
(c)
所述人
TCR
α
恒定区基因的3’
区；其中所述经遗传修饰的细胞是经遗传修饰的人
T
细胞或经遗传修饰的来源于人
T
细胞的细胞，并且其中当与未经修饰的对照细胞相比时，所述经遗传修饰的细胞具有降低的内源性
TCR
的细胞表面表达
。2.
权利要求1所述的经遗传修饰的细胞，其中所述外源多核苷酸包含编码嵌合抗原受体的核酸序列，其中所述嵌合抗原受体包含细胞外配体结合结构域和一个或更多个细胞内信号转导结构域
。3.
权利要求2所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体包含与
SEQ ID NO:112
具有至少
80
％序列同一性的细胞外配体结合结构域，其中所述细胞外配体结合结构域与
CD19
结合
。4.
权利要求2至3中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体包含与
SEQ ID NO:113
具有至少
80
％序列同一性的细胞内细胞质信号转导结构域
。5.
权利要求2至4中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体包含与
SEQ ID NO:114
具有至少
80
％序列同一性的细胞内共刺激信号转导结构域
。6.
权利要求2至5中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体还包含信号肽
。7.
权利要求6所述的经遗传修饰的细胞，其中所述信号肽与
SEQ ID NO:115
具有至少
80
％的序列同一性
。8.
权利要求2至7中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体还包含铰链结构域
。9.
权利要求8所述的经遗传修饰的细胞，其中所述铰链结构域与
SEQ ID NO:116
具有至少
80
％的序列同一性
。10.
权利要求2至9中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域
。11.
权利要求
10
所述的经遗传修饰的细胞，其中所述跨膜结构域与
SEQ ID NO:117
具有至少
80
％的序列同一性
。12.
权利要求2至
11
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述嵌合抗原受体与
SEQ ID NO:111
具有至少
80
％的序列同一性
。13.
权利要求1至
12
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述外源多核苷酸包含驱动所述外源多核苷酸表达的启动子序列
。14.
权利要求
13
所述的经遗传修饰的细胞，其中所述启动子序列与
SEQ ID NO:118
具有至少
80
％的序列同一性
。15.
权利要求1至
14
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中所述外源多核苷酸与
SEQ ID NO:119
具有至少
80
％的序列同一性
。16.
权利要求1至
15
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中在包含
SEQ ID NO:3
的识
别序列内的位置处将所述外源多核苷酸插入到所述
TCR
α
恒定区基因中
。17.
权利要求
16
所述的经遗传修饰的细胞，其中所述经修饰的人
TCR
α
恒定区基因包含与
SEQ ID NO:120
具有至少
80
％序列同一性的核酸序列
。18.
权利要求1至
15
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中在包含
SEQ ID NO:4
的识别序列内的位置处将所述外源多核苷酸插入到所述
TCR
α
恒定区基因中
。19.
权利要求
18
所述的经遗传修饰的细胞，其中所述经修饰的人
TCR
α
恒定区基因包含与
SEQ ID NO:121
具有至少
80
％序列同一性的核酸序列
。20.
权利要求1至
15
中任一项所述的经遗传修饰的细胞，其中在包含
SEQ ID NO:5
的识别序列内的位置处将所述外源多核苷酸插入到所述
TCR
α
恒定区基因中
。21.
权利要求
21
所述的经遗传修饰的细胞，其中所述经修饰的人
TCR
α
恒定区基因包含与
SEQ ID NO:122
具有至少
80
％序列同一性的核酸序列
。22.
用于产生包含经修饰的人
TCR
α
恒定区基因的经遗传修饰的细胞的方法，所述方法包括：
(a)
向细胞中引入：
(i)
编码经改造核酸酶的第一核酸序列；或
(ii)
经改造核酸酶蛋白；其中所述经改造核酸酶在所述人
TCR
α
恒定区基因内的识别序列处产生切割位点；以及
(b)
将包含外源多核苷酸的第二核酸序列引入到所述细胞中；其中所述细胞是人
T
细胞或来源于人
T
细胞；并且其中在所述切割位点处将所述外源多核苷酸的序列插入到所述人
TCR
α
恒定区基因中；并且进一步地其中当与未经修饰的对照细胞相比时，所述经遗传修饰的细胞具有降低的内源性
TCR
的细胞表面表达
。23.
权利要求
22
所述的方法，其中所述第二核酸序列从5’
至3’
包含：
(a)
与所述切割位点侧翼的5’
上游序列同源的5’
同源臂；
(b)
所述外源多核苷酸；和
(c)
与所述切割位点侧翼的3’
下游序列同源的3’
同源臂；其中通过同源重组在所述切割位点处将所述外源多核苷酸的序列插入到所述人
TCR
α
恒定区基因中
。24.
权利要求
22
或权利要求
23
所述的方法，其中所述外源多核苷酸包含编码嵌合抗原受体的核酸序列，其中所述嵌合抗原受体包含细胞外配体结合结构域和一个或更多个细胞内信号转导结构域
。25.
权利要求
22
至
24
中任一项所述的方法，其中所述外源多核苷酸包含驱动所述外源多核苷酸表达的第一启动子序列
。26.
权利要求
22
至
25
中任一项所述的方法，其中通过使所述细胞与包含所述第二核酸序列的重组腺相关病毒
(AAV)
载体接触，将至少所述第二核酸序列引入到所述细胞中
。27.
权利要求
26
所述的方法，其中所述第二核酸还包含位于所述5’
同源臂的5’
上游或位于所述3’
同源臂的3’
下游的第二启动子序列
。28.
权利要求
26
或权利要求
27
所述的方法，其中所述重组
AAV
载体是自身互补
AAV
载体
。29.
权利要求
26
至
28
中任一项所述的方法，其中所述重组
AAV
载体具有
AAV2
或
AAV6
的血清型
。
30.
权利要求
22
至
29
中任一项所述的方法，其中所述经改造核酸酶是重组大范围核酸酶
、
重组锌指核酸酶
(ZFN)、
重组转录激活因子样效应物核酸酶
(TALEN)、CRISPR/Cas
核酸酶
、
或
megaTAL
核酸酶
。31.
权利要求
22
至
30
中任一项所述的方法，其中所述经改造核酸酶是重组大范围核酸酶
。32.
权利要求
31
所述的方法，其中所述重组大范围核酸酶识别并切割野生型人
TCR
α
恒定区
(SEQ ID NO:1)
的第
93
至
208
位残基内的识别序列，其中所述重组大范围核酸酶包含第一亚基和第二亚基，其中所述第一亚基与所述识别序列的第一识别半位点结合并包含第一高变
(HVR1)
区，并且其中所述第二亚基与所述识别序列的第二识别半位点结合并包含第二高变
(HVR2)
区
。33.
权利要求
32
所述的方法，其中所述人
TCR
α
恒定区基因内的所述识别序列包含
SEQ ID NO:3。34.
权利要求
33
所述的方法，其中所述第一亚基包含与
SEQ ID NO:8
至
18
中的任一个的第
198
至
344
位残基或
SEQ ID NO:19
至
27
中的任一个的第7至
153
位残基具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述第二亚基包含与
SEQ ID NO:8
至
18
中的任一个的第7至
153
位残基或
SEQ ID NO:19
至
27
中的任一个的第
198
至
344
位残基具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列
。35.
权利要求
33
或权利要求
34
所述的方法，其中所述
HVR1
区在对应于如下的位置处包含
Y
：
(a)SEQ ID NO:8
至
18
中的任一个的第
215
位；或
(b)SEQ ID NO:19
至
27
中的任一个的第
24
位
。36.
权利要求
33
至
35
中任一项所述的方法，其中所述
HVR1
区包含
SEQ ID NO:8
至
18
中的任一个的第
215
至
270
位残基或
SEQ ID NO:19
至
27
中的任一个的第
24
至
79
位残基
。37.
权利要求
33
至
36
中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：德里克，
申请(专利权)人：精密生物科学公司，
类型：发明
国别省市：