一种含三苯胺基团的快速荧光增强剂制造技术

本发明专利技术属于荧光增强试剂领域、荧光显微成像检测领域，具体公开了一种含三苯胺基团的快速荧光增强剂：４－Ｎ，Ｎ－二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺（ＴＢＡ－ＳＣＭ）。本发明专利技术所述荧光增强剂具有快速荧光增强特性，在室温下可快速与任一含氨基的检测物作用获得荧光增强信号，可对食品中氨基甲酸酯类农药样品实现实时检测；由于所述荧光增强剂的分子量小，具有很好的细胞穿透力，还可快速与细胞内氨基酸分子键合，获得荧光增强信号从而完成分子识别，有望在医疗临床分析获得应用；同时，该荧光增强剂制备化工工艺简单，产率较高，易于产业化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于荧光增强试剂领域、荧光显微成像检测领域，具体涉及一种含三苯胺的发光小分子，所述发光小分子可与含氨基的化合物快速键合，使含氨基的化合物立刻发 出明亮的蓝光，具有快速荧光增强效应。
技术介绍
20世纪80年代以来，由于一系列食品原料的化学污染导致的食源性疾病呈上升 趋势，食品安全问题为全世界所关注。如氨基甲酸酯类农药为乙胆碱酯酶的抑制剂，后者在 神经传导中起着重要的作用，缓解神经的高度兴奋，以确保神经脉冲的有效传送。当氨基甲 酸酯类农药在农业生产中的大量使用，不可避免导致瓜果、蔬菜残留氨基甲酸酯类农药，对 人类健康将造成较大危害。目前，氨基甲酸酯类农药残留检测多采用薄层色谱法、气相色谱法、搞笑液相色谱 法等，例如，色谱分析法气象色谱、高效液相色谱、气_质联用或液_质联用；生物检测法 乙酰胆碱酯酶抑制法、植物水解酶与植物酶抑制技术测定；生物传感器法电流乙酰胆碱 酯酶生物传感器法；免疫分析法酶联免疫测定法；化学计量学分析法(李志伟.梁丹.张 建夫.华中农业大学学报.2008 (27)，691 695)。这些方法的检测限低、灵敏度高，已有相 关的技术标准可供参考，但由于需要昂贵的设备、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、 成本高、时间长，因此不能满足快速简便的现场检测要求，现场的食品快速检测方法要求 ①实验准备简化，使用的试剂较少，配制好的试剂保存期长；②样品前处理简单，对操作人 员要求低；③分析方法简单、准确和快速。王忠东等人发表的文章公开了一种用于检测氨基甲酸酯类农药残留的荧光系统， 该系统由激发荧光和传输荧光的光学系统与探测荧光和处理荧光信号的电子系统组成；采 用单光源、双光路结构，能够对测量信号和参考信号同时进行处理；采用所设计的筒式光纤 探头激发并探测荧光，设计了相应的信号处理电路，实现了计算机管理(参见王忠东.王 玉田.李艳春.光学技术.2005 (31))。该方案主要对检测系统进行了设计，从而使氨基甲 酸酯类农药的检测准确。若在激光激发下的“双光子荧光”发生的区域可限制在λ3(λ为入射光波长)量 级的空间体积内，将使得发色团的激发更具有高度的空间选择性，将进一步提高检测的灵 敏度和选择性，但目前未见氨基甲基酯类化合物的双光子荧光实时监测的报道。技术方案本专利技术的目的是提供一种含三苯胺基团的快速荧光增强剂。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是一种含三苯胺基团的快速荧光增强 剂，4-Ν，Ν- 二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)，呈“D-π -Α”结构特征，其中三苯胺基 为电子给体“D”，琥珀酰胺基为电子受体“Α”，羧基为“ π-桥”，其化学式为<image>image see original document page 4</image>上述荧光增强剂的制备方法包括以下步骤(1)合成4-N，N- 二苯基氨基苯甲酸使用高锰酸钾氧化4-N，N- 二苯基氨基苯甲 醛，然后使用盐酸调节体系PH至酸性，冷却静置析出晶体，抽滤洗涤干燥得到4-N，N- 二苯 基氨基苯甲酸；(2)取等摩尔的4-N，N-二苯基氨基苯甲酸和二环己基碳二亚胺溶于二氯甲烷中， 再加入N-羟基琥珀酰胺，室温反应至少18h，过滤，将滤液进行柱层析分离，浓缩得到淡黄 色粉末，即4-N，N- 二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)。上述技术方案中，所述荧光增强剂是以三苯胺基团为“电子给体”、琥珀酰胺为“电 子受体”、羧基为“桥”的不对称分子；可与含氨基的有机分子(发光或不发光)瞬时通过酰 胺键键合，使结合后产生的产物在硅胶版上呈现明亮的蓝光，因此，可以应用于含有氨基的 化合物的荧光检测中，例如，实时检测氨基甲基酯类化合物。因此，本专利技术同时要求保护所述荧光增强剂在实时监测含有氨基的化合物中的应 用，以及在检测氨基甲基酯类化合物的应用。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点1.本专利技术所述4-N，N-二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)，具有快速荧光增 强效应特性，可快速与检测物中的氨基反应形成酰胺键，从而完成识别分子荧光信号的检 测，可对食品中氨基甲酸酯类农药样品实现实时检测；2.本专利技术所述4-N，N_ 二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)分子量小(386)， 具有很好的细胞穿透力，可快速与检测物中的氨基反应形成酰胺键，从而完成识别分子荧 光信号的检测，有望在医疗临床分析获得应用；3.本专利技术所述4-N，N-二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)，制备化工工艺简 单，产率较高，易于产业化。附图说明附图1、实施例二中TBA-SCM与检测物(分别记为p0、pl、p2和p3)结合前后荧光 变化；附图2、实施例二在不同时间下TBA-SCM对检测物p3的快速荧光增强谱图；附图3、实施例二中加入20μ L的TBA-SCM溶液于p0 (a)和p3 (b)溶液中，10秒中 后观测到pO-TBA和p3-TBA的荧光寿命变化；附图4、实施例三中pO-TBA和p3-TBA的双光子荧光增强光谱图(对照实验曲线见 x-TBA-SCM曲线，χ为摩尔配比的倍数)；附图5、实施例四中TBA-SCM与不同浓度的氨基甲酸甲酯结合前后荧光变化；附图6、实施例一中4-N，N- 二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)结构式；附图7、实施例二中TBA-SCM与p0化学键合过程。具体实施例方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述实施例一4-N, N- 二苯基氨基苯甲酸合成在三口烧瓶中加入2. 0g4_N，N- 二苯基氨基苯甲 醛，加入四氢呋喃使其溶解，加入预先配制好的KMnO4溶液，反应24h后，抽滤，在滤液中加 入适量HCl溶液后，与冰箱内放置过夜。取出后抽滤，将滤渣烘干即得到白色三苯胺酸粉 末，产率为 80%，纯度为 98% 以上。Mp 199-2010C . IR(KBr) :v，cnT1 1316 (C-N)，1670 (C =0) ,2647，2528 (COOH) · 1H WR(CDCl3;400MHz;Me4Si) δ , ppm 6. 981，7. 002 (d，2H，J = 8. 4Ηζ)，7· 156-7. 173(m，5H)，7· 311-7. 349 (m，5Η)，7· 915,7. 895(d，2H，J = 8. OHz)。4-N, N- 二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺(TBA-SCM)合 成在单口烧瓶中依次加入 等摩尔的4-N，N- 二苯基氨基苯甲酸和二环己基碳二亚胺于IOmLCH2Cl2中，使其溶解，再加 入l.Og N-羟基琥珀酰胺，室温反应24h后，过滤，将滤液进行柱层析分离，弄缩得到淡黄 色粉末，产率约为 70%。IR(KBr) :v,cm_1 1263 (C-N)，1349 (N-0)，1609 (C = 0)，2924 (CH2)， 3453 (COON) ο 1H NMR (CDCl3, 300MHz，Me4Si) δ , ppm 7. 931、7. 901 (d，J = 9Hz，2H，ArH)， 7. 371,7. 345,7. 319 (t，J = 7. 8Hz, 4H, ArH), 7. 178-7. 151(m，6H)，6· 9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含三苯胺基团的快速荧光增强剂，其特征在于，所述含三苯胺基团的快速荧光增强剂为４－Ｎ，Ｎ－二苯基氨基苯甲酸琥珀酰亚胺，呈“Ｄ－π－Ａ”结构特征，其中三苯胺基为电子给体“Ｄ”，琥珀酰胺基为电子受体“Ａ”，羧基为“π－桥”，其化学式为：　　＊＊＊。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王筱梅，张唯舟，
申请(专利权)人：苏州科技学院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]