一种白颖苔草组织培养的方法技术

本发明专利技术属于组织培养领域，具体提供了一种组织培养白颖苔草的方法，所述方法包括如下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种白颖苔草组织培养的方法


[0001]本专利技术属于组织培养领域，具体涉及一种白颖苔草组织培养的方法
。

技术介绍

[0002]白颖苔草
(Carexrigescens(Franch)V.Krecz)
是莎草科苔草属的一种多年生植物，广泛分布于中国北部的辽宁
、
河北
、
河南
、
山东和内蒙古
。
白颖苔草对冷
、
荫
、
干旱和高温等非生物胁迫具有很强的耐受性
。
它可以适应各种土壤条件，常用作城市景观和体育场建设草坪草
。
[0003]由于苔草长期适应了固有的生殖对策，其营养繁殖已占主导，用种子繁殖几乎退化
。
种子的深休眠
、
低萌发率较为普遍，这使得该属植物的开发利用和种子扩大繁殖受到严重制约
。
因此，本专利技术旨在建立高效的再生体系，为白颖苔草离体快繁提供思路，并为转基因工程奠定基础
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种组织培养白颖苔草的方法及其培养基配方，解决了当前对于白颖苔草的组织培养技术中，诱导率不高
、
生芽困难
、
资源消耗量大而且浪费严重的问题
。
[0005]本专利技术首先提供一种组织培养白颖苔草的方法，所述方法包括如下步骤：
[0006]S1、
以白颖苔草种子为外植体，消毒；
[0007]S2、
以诱导培养基进行诱导培养和增殖培养；
[0008]所述诱导培养基为以
MS
固体培养基为基础培养基，添加
2,4
‑
D、6
‑
BA、NAA
和蔗糖，获得的固体培养基，所述诱导培养基中
2,4
‑
D
浓度为
2mg/L、6
‑
BA
浓度为
1mg/L、NAA
的浓度为
1mg/L、
蔗糖的浓度为
30g/L
；
[0009]S3、
以分化培养基进行丛生芽诱导；
[0010]所述分化培养基为以
MS
固体培养基为基础培养基，添加6‑
BA、NAA
和蔗糖，获得的固体培养基，所述分化培养基中6‑
BA
浓度为
1mg/L、NAA
的浓度为
1mg/L、
蔗糖的浓度为
30g/L。
[0011]上述方法中，所述诱导培养基和分化培养基的
pH
值可为
5.9
‑
6.0。
[0012]本专利技术的组织培养白颖苔草的方法还包括如下步骤：
[0013]S4、
以生根培养基进行生根培养；
[0014]所述生根培养基为以
1/2MS
固体培养基为基础培养基，添加蔗糖，获得的固体培养基，所述生根培养基中蔗糖的浓度为
30g/L。
[0015]上述方法中，所述生根培养基的
pH
值可为
5.9
‑
6.0。
[0016]本专利技术的组织培养白颖苔草的方法还包括炼苗移栽的步骤
。
[0017]上述方法中，所述增殖培养为继代增殖两至三次，每代的培养时间为
25
天
。
[0018]上述方法中，所述诱导培养和增殖培养在黑暗条件下进行
。
[0019]上述方法中，所述丛生芽诱导的光照条件为每天
24
小时中
16
小时光照，其余时间黑暗，光照强度为
600Lx。
[0020]上述方法中，所述生根培养的光照条件为每天
24
小时中
16
小时光照，其余时间黑暗，光照强度为
600Lx。
[0021]上述方法中，所述培养在温度为
25
±
1℃
的环境中进行
。
[0022]上述方法中，所述固体培养基含有凝固剂，所述丛生芽分化培养基用的凝固剂为凝胶，浓度为
3g/L
，所述诱导培养基
、
继代培养基
、
生根培养基用的凝固剂均为琼脂，浓度为
6g/L。
[0023]本专利技术还提供上述方法在白颖苔草种植中的应用
。
[0024]本专利技术还提供上述方法在白颖苔草育种中的应用
。
[0025]本专利技术以成熟胚作为外植体，专利技术人经过大量长期实践操作，发现只有成熟胚作为外植体才能实现白颖苔草较高诱导率的保证由于白颖苔草种子有种皮包被且包于果囊，内生菌多，极易污染，如何防止外植体污染是以后繁殖的关键步骤，因此，专利技术人采用
20
％浓度
NaClO
溶液进行消毒处理
40min
，大大降低了外植体污染的概率
。
[0026]白颖苔草再生体系的相关研究未见报道，专利技术人采用适时调整培养基中的激素浓度促进愈伤组织发育，并根据当前生长程度适当调整激素浓度或改用同效激素
。
[0027]本专利技术培养过程速度快，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，能较好地保持白颖苔草的遗传稳定性
。
附图说明
[0028]图1为本专利技术实施例1诱导产生的愈伤组织照片
。
[0029]图2为本专利技术实施例1分化产生的芽的照片
。
[0030]图3为本专利技术实施例1生根产生的根的照片
。
[0031]图4为本专利技术实施例1产生的生根苗的照片
。
[0032]图5为本专利技术实施例1移苗成活的组培苗
。
[0033]图6为实施例
1、
实施例
4、
实施例5和实施例6的长菌率统计结果，其中，
**
代表显著性分析结果为
P<0.01。
[0034]图7为实施例
1、
实施例
7、
实施例8的诱导率统计结果，其中，
**
代表显著性分析结果为
P<0.01。
[0035]图8为实施例
1、
实施例
9、
实施例
10
的生芽率统计结果，其中，
**
代表显著性分析结果为
P<0.01。
具体实施方式
[0036]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围
。
以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种组织培养白颖苔草的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、
以白颖苔草种子为外植体，消毒；
S2、
以诱导培养基进行诱导培养和增殖培养；所述诱导培养基为以
MS
固体培养基为基础培养基，添加
2,4
‑
D、6
‑
BA、NAA
和蔗糖，获得的固体培养基，所述诱导培养基中
2,4
‑
D
浓度为
2mg/L、6
‑
BA
浓度为
1mg/L、NAA
的浓度为
1mg/L、
蔗糖的浓度为
30g/L
；
S3、
以分化培养基进行丛生芽诱导；所述分化培养基为以
MS
固体培养基为基础培养基，添加6‑
BA、NAA
和蔗糖，获得的固体培养基，所述分化培养基中6‑
BA
浓度为
1mg/L、NAA
的浓度为
1mg/L、
蔗糖的浓度为
30g/L。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：
S4、
以生根培养基进行生根培养；所述生根培养基为向
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙彦，王潞雨，李跃，胡倩楠，李茂娜，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：