【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗猪ifn-γ单克隆抗体和应用。
技术介绍
1、γ干扰素(interferon gamma，ifn-γ)是目前已知ii型干扰素的唯一成员。其主要由cd8+t细胞、th1 cd4+t细胞和自然杀伤细胞(nk)在多种刺激下分泌，在固有免疫和抗原特异性免疫中发挥着包括抑制th2细胞分化、刺激th1细胞增殖、促进巨噬细胞活化、诱导mhc i/mhc ii表达等多种功能，从而实现抗病毒、免疫调节、调控细胞增殖分化等多样广泛的生物学作用。因为其在细胞免疫中所发挥的重要作用，通常可用ifn-γ的表达水平来评估机体的细胞免疫水平。
2、目前猪ifn-γ的定量检测试剂普遍存在操作步骤繁琐、批间差异性大、方法不够稳定以及不同基质间存在干扰等问题，导致在实践生产中不能及时、有效地评估免疫猪只的疫苗保护水平。因此开发一种快速、便捷、高灵敏性和高特异性的检测方法对临床样本中猪ifn-γ水平的检测和细胞免疫水平的评估具有重要意义。
3、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,elisa)是目前应用最广泛、最便捷的抗原抗体反应检测方法之一。该实验方法操作简单，单次样本处理数大、可重复性高，灵敏性和特异性好，检测结果也更为可靠、客观。目前牛ifn-γelisa检测方法已经广泛地应用于临床牛结核病的检测，展现出elisa良好的检测效果和应用前景。因此，通过建立一种猪ifn-γelisa检测方法，对临床样品ifn-γ水平和细胞免疫水平进行评估
4、然而目前缺乏高亲和力、强特异性的抗猪ifn-γ的单克隆抗体，这无疑成为阻碍检测猪ifn-γelisa最大问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种能稳定分泌抗猪ifn-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分泌的抗猪ifn-γ单克隆抗体能够特异性识别猪ifn-γ蛋白，且具有良好的亲和力。
2、本专利技术提供了一种分泌抗猪ifn-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为cctcc no:c202473。
3、本专利技术提供了一种由所述杂交瘤细胞株分泌得到的抗猪ifn-γ单克隆抗体。
4、本专利技术提供了一种抗猪ifn-γ的抗体组合物，包括所述抗猪ifn-γ单克隆抗体和抗猪ifn-γ的多克隆抗体；
5、所述抗猪ifn-γ单克隆抗体和抗猪ifn-γ的多克隆抗体的质量比为(1～2)：10。
6、优选的，所述抗猪ifn-γ单克隆抗体和抗猪ifn-γ的多克隆抗体的质量比为1.5:10。
7、优选的，所述抗猪ifn-γ的多克隆抗体的制备方法，将猪ifn-γ蛋白作为免疫原进行多点免疫家兔，采集免疫后家兔的血液，分离血清，纯化血清中兔抗猪ifn-γ多克隆抗体。
8、优选的，所述免疫包括首次免疫1次、加强免疫3次和采血前免疫；
9、用猪ifn-γ蛋白和弗氏完全佐剂混合乳化制备的蛋白疫苗进行首次免疫；
10、用猪ifn-γ蛋白和弗氏不完全佐剂混合乳化制备的蛋白疫苗进行加强免疫和采血前免疫；
11、所述首次免疫和第一次加强免疫的间隔时间为3周；
12、相邻两次加强免疫的间隔时间为2周；
13、所述采血前免疫和最后一次加强免疫的间隔时间为7周；
14、所述首次免疫或加强免疫的免疫剂量为1mg猪ifn-γ蛋白/只家兔/次；
15、所述采血前免疫的免疫剂量为500μg猪ifn-γ蛋白/只。
16、本专利技术提供了所述抗猪ifn-γ单克隆抗体或所述抗猪ifn-γ的抗体组合物在制备检测猪ifn-γ的试剂盒中的应用。
17、优选的，所述检测猪ifn-γ的试剂盒包括基于以下至少一种技术制备：
18、免疫层析技术、酶联免疫技术、免疫印迹技术和化学发光免疫检测技术。
19、本专利技术提供了一种猪ifn-γelisa检测试剂盒，包被有上述方案中所述抗猪ifn-γ的多克隆抗体的酶标板和酶标上述方案中所述抗猪ifn-γ的单克隆抗体。
20、优选的，所述抗猪ifn-γ的多克隆抗体的包被浓度为2～20μg/ml；
21、所述试剂盒还包括pbst洗液。
22、本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株及其分泌得到的抗猪ifn-γ单克隆抗体(6e8-5g5)。本专利技术通过体外构建表达的猪ifn-γ蛋白作为免疫原进行小鼠免疫，经过细胞融合和筛选、杂交瘤细胞亚克隆及筛选纯化等，获得了稳定表达抗猪ifn-γ抗体的鼠杂交瘤细胞株。实验表明，所述抗猪ifn-γ单克隆抗体能够以高亲和力结合猪ifn-γ，且不与其他的细胞因子结合，体现出了良好的特异性。利用间接elisa法检测杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的水平，本专利技术保护的杂交瘤细胞株具有较高的p/n值，同时本专利技术保护的单克隆抗体在腹水纯化为60pg/ml时仍能够检测到与猪ifn-γ蛋白的结合能力，亲和力优于同批筛选的其他单克隆抗体。因此，本专利技术提供的杂交瘤细胞株及其分泌得到的抗猪ifn-γ单克隆抗体(6e8-5g5)为建立一种快速、高灵敏性和特异性的猪ifn-γelisa检测方法具有重要意义。
23、本专利技术提供了一种猪ifn-γelisa检测试剂盒，包被有上述方案中所述抗猪ifn-γ的多克隆抗体的酶标板和酶标上述方案中所述抗猪ifn-γ的单克隆抗体。本专利技术通过双抗夹心elisa方法可以特异性地检测培养基样本中的猪ifn-γ的含量，非特异性的结合率低，结果可靠，且具有较高的亲和力，是理想的猪ifn-γ蛋白含量的检测试剂，为t细胞、nk细胞等功能性评估提供了一种良好有效的检测工具。利用本专利技术提供的抗体进行猪ifn-γ的检测具有操作简单便捷、成本低、单次处理样本量大、灵敏性特异性好、准确度和精确度高等优势。
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1.一种分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为CCTCCNO:C202473。
2.一种由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌得到的抗猪IFN-γ单克隆抗体。
3.一种抗猪IFN-γ的抗体组合物，其特征在于，包括权利要求2所述抗猪IFN-γ单克隆抗体和抗猪IFN-γ的多克隆抗体；
4.根据权利要求3所述抗猪IFN-γ的抗体组合物，其特征在于，所述抗猪IFN-γ单克隆抗体和抗猪IFN-γ的多克隆抗体的质量比为1.5:10。
5.根据权利要求3或4所述抗猪IFN-γ的抗体组合物，其特征在于，所述抗猪IFN-γ的多克隆抗体的制备方法，将猪IFN-γ蛋白作为免疫原进行多点免疫家兔，采集免疫后家兔的血液，分离血清，纯化血清中兔抗猪IFN-γ多克隆抗体。
6.根据权利要求5所述抗猪IFN-γ的抗体组合物，其特征在于，所述免疫包括首次免疫1次、加强免疫3次和采血前免疫；
7.权利要求2所述抗猪IFN-γ单克隆抗体或权利要求3～6中任意一项所述抗猪IFN-γ的抗体组合物在制备检测猪IFN-γ的试剂盒中的
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述检测猪IFN-γ的试剂盒包括基于以下至少一种技术制备：
9.一种猪IFN-γELISA检测试剂盒，其特征在于，包被有权利要求3～6中所述抗猪IFN-γ的多克隆抗体的酶标板和酶标权利要求3～6中所述抗猪IFN-γ的单克隆抗体。
10.根据权利要求9所述猪IFN-γELISA检测试剂盒，其特征在于，所述抗猪IFN-γ的多克隆抗体的包被浓度为2～20μg/mL；
...【技术特征摘要】
1.一种分泌抗猪ifn-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为cctccno:c202473。
2.一种由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌得到的抗猪ifn-γ单克隆抗体。
3.一种抗猪ifn-γ的抗体组合物，其特征在于，包括权利要求2所述抗猪ifn-γ单克隆抗体和抗猪ifn-γ的多克隆抗体；
4.根据权利要求3所述抗猪ifn-γ的抗体组合物，其特征在于，所述抗猪ifn-γ单克隆抗体和抗猪ifn-γ的多克隆抗体的质量比为1.5:10。
5.根据权利要求3或4所述抗猪ifn-γ的抗体组合物，其特征在于，所述抗猪ifn-γ的多克隆抗体的制备方法，将猪ifn-γ蛋白作为免疫原进行多点免疫家兔，采集免疫后家兔的血液，分离血清，纯化血清中兔抗猪ifn-γ多克隆抗体。...
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