基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法技术

本发明专利技术为一种基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法

【技术实现步骤摘要】
基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法


[0001]本专利技术涉及药用植物器官培养
，更具体地说，涉及一种基于三七不定根获得人参稀有皂基的方法
。

技术介绍

[0002]三七
(Panax notoginseng)
属于五加科人参属的多年生草本药用植物，以根入药，为我国传统名贵大宗药材，主要分布于我国云南等地区
。
三七的主要活性成分为三七总皂苷，其含量和种类直接关系到三七的药理活性
。
三七皂苷具有抑制自由基损伤
、
抗炎
、
降血脂
、
抑制细胞过度自噬
、
降低心肌耗氧量等药理作用
。
近年来，随着大健康产业发展以及人们对“回归自然”理念的深入认识，在亚洲乃至世界范围内，三七在医药
、
功能食品和化妆品等领域的应用越来越广泛
。
由于三七生长周期较长，从种植到收获入药大约需要5‑7年，加上连作障碍
、
根腐病及重金属和农药残留等突出问题，需要新的替代途径生产三七原材料满足市场的极大需求
。
[0003]研究表明，利用植物细胞和器官的离体培养物可以作为生产天然产物的原材料，代替野生或栽培的药用植物资源
。
近几年来，通过细胞或不定根工业化培养技术生产天然产物的探索越来越多
。
例如细胞培养的紫草
、
青蒿
、
茜草
、
红豆杉等，不定根培养的紫锥菊
、
颠茄
、
贯叶连翘等，以及毛状根培养的金铁锁
、
蛇根草
、
丹参等等，它们可以合成生物碱
、
类黄酮
、
皂苷等多种具有药用价值的天然产物
。
[0004]其中，不定根或毛状根遗传和生理生化代谢更稳定，生长速度更快，可以合成更多种类的化合物，因此，不定根或毛状根培养比细胞或愈伤组织培养方式具有更大的优势
。
现代研究发现人参稀有皂苷与三七中富含的大量皂苷相比具有更高的生物活性，但它在三七中含量极低，从植株中提取分离且获取相对困难且远远不能满足药物使用和开发的需求
。
将三七中常见的含量较高的人参皂苷转化为人参稀有皂苷是提高其药理活性和生物利用率的关键
。
人参皂苷
Rb1是三七中含量较高的皂苷成分，通过各种方式对其糖基进行修饰和转化，从而获得药理活性更高的人参稀有皂苷
C
‑
K、Rg3等，为制备人参稀有皂苷提供了新的思路
。
[0005]目前，主要采用热处理法
、
化学处理法
、
微生物及酶转化法
、Smith
降解法改变人参皂苷的化学结构，转化成稀有皂苷，但仍存在反应剧烈，并存在酸碱残留
、
副产物较多
、
后期分离实验难度大及对环境具有污染等缺点
。
迄今为止，尚未发现在三七不定根培养过程中提高稀有皂苷转化率的研究
。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在解决三七不定根培养过程中提高稀有皂苷转化率的问题，通过人参内生菌与茉莉酸甲酯联合使用以提高稀有皂苷产量
。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种基于三七不定根获得人参稀有皂苷的培养基，包括：以
MS
为基础培养基，添加5‑
7mg/L IBA、0.2
‑
0.6mg/L NAA、0.1
‑
0.3mg/L KT、3
％蔗
糖
、50
‑
150
μ
mol/L
乙酸钠
。(
乙酸钠培养基
)
[0008]一种基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法，包括如下步骤：
[0009]S1、
人参内生菌活化：将人参内生菌菌块纯化后接种至
PDA
培养基中活化5‑
8d
，将活化获得的菌丝接种
PDB
培养基中培养5‑
8d
，得到人参内生菌菌液；所述
PDA
培养基为马铃薯浸出粉8‑
12g/L、
葡萄糖
10
‑
15g/L、
琼脂8‑
10g/L
，其余为水；所述
PDB
培养基为马铃薯浸出粉8‑
12g/L、
葡萄糖
10
‑
15g/L
，其余为水；
[0010]S2、
三七不定根的诱导与增殖：将三七植株的根部脱毒后接种至诱导培养基中培养，将诱导得到的不定根接种在固体增殖培养基继代培养后，再接种至
100
‑
150mL
液体增殖培养基培养；所述诱导培养基为添加3‑
5mg/L IBA、0.01
‑
0.03mg/L NAA、0.6
％琼脂
、3
％蔗糖的
MS
培养基；所述液体增殖培养基为添加5‑
7mg/L IBA、0.2
‑
0.6mg/L NAA、0.1
‑
0.3mg/L KT、3
％蔗糖的
MS
培养基；所述固体增殖培养基为所述液体增殖培养基中添加
0.4
％琼脂；
[0011]S3、
三七不定根生物反应器培养：将步骤
S2
液体增殖培养基培养获得的三七不定根接种至乙酸钠培养基在生物反应器中进行培养；所述乙酸钠培养基为添加5‑
7mg/L IBA、0.2
‑
0.6mg/L NAA、0.1
‑
0.3mg/L KT、50
‑
150
μ
mol/L
乙酸钠
、3
％蔗糖的
MS
培养基；
[0012]S4、
提高不定根的人参稀有皂苷转化率：分别吸取步骤
S1
所得人参内生菌菌液和浓度为
180
‑
220
μ
mol/L
茉莉酸甲酯加入生物反应器中继续培养
10
‑
15d
，得到含有稀有皂苷的三七不定根
。
[0013]优选方式下，步骤
S1
所述人参内生菌为翘孢霉属真菌
Emericella sp.bp
‑
19。
[0014]优选方式下，步骤
S1
中，所述
PDA
培养基的培养条件为
26
‑
28℃
黑暗条件下倒置培养；所述
PDB
培养基的培养条本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、
人参内生菌活化：将人参内生菌菌块纯化后接种至
PDA
培养基中活化5‑
8d
，将活化获得的菌丝接种
PDB
培养基中培养5‑
8d
，得到人参内生菌菌液；所述
PDA
培养基为马铃薯浸出粉8‑
12g/L、
葡萄糖
10
‑
15g/L、
琼脂8‑
10g/L
，其余为水；所述
PDB
培养基为马铃薯浸出粉8‑
12g/L、
葡萄糖
10
‑
15g/L
，其余为水；
S2、
三七不定根的诱导与增殖：将三七植株的根部脱毒后接种至诱导培养基中培养，将诱导得到的不定根接种在固体增殖培养基继代培养后，再接种至
100
‑
150mL
液体增殖培养基培养；所述诱导培养基为添加3‑
5mg/L IBA、0.01
‑
0.03mg/L NAA、0.6
％琼脂
、3
％蔗糖的
MS
培养基；所述液体增殖培养基为添加5‑
7mg/L IBA、0.2
‑
0.6mg/L NAA、0.1
‑
0.3mg/L KT、3
％蔗糖的
MS
培养基；所述固体增殖培养基为所述液体增殖培养基中添加
0.4
％琼脂；
S3、
三七不定根生物反应器培养：将步骤
S2
液体增殖培养基培养获得的三七不定根接种至乙酸钠培养基在生物反应器中进行培养；所述乙酸钠培养基为添加5‑
7mg/L IBA、0.2
‑
0.6mg/L NAA、0.1
‑
0.3mg/L KT、50
‑
150
μ
mol/L
乙酸钠
、3
％蔗糖的
MS
培养基；
S4、
提高不定根的人参稀有皂苷转化率：分别吸取步骤
S1
所得人参内生菌菌液和浓度为
180
‑
220
μ
mol/L
茉莉酸甲酯加入生物反应器中继续培养
10
‑
15d
，得到含有稀有皂苷的三七不定根
。2.
根据权利要求1所述基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法，其特征在于，步骤
S1
所述人参内生菌为翘孢霉属真菌
Emericella sp.bp
‑
19。3.
根据权利要求1所述基于三七不定根获得人参稀有皂苷的方法，其特征在于，步骤
S1
中，所述
PDA
培养基的培养条件为
26
‑
2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宗申，温馨，刘长斌，刘蕾，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：