具有启动子活性的核酸及其用途制造技术

本申请涉及遗传学

【技术实现步骤摘要】
具有启动子活性的核酸及其用途


[0001]本申请涉及遗传学
、
基因疗法和分子生物学领域
。
更具体地，本专利技术涉及具有启动子活性的核酸
(
变体
)、
基于其的表达盒和载体
、
用于生产靶产物或表达载体的宿主细胞
。

技术介绍

[0002]启动子是一种
DNA
元件，其促进与启动子可操作地连接的多核苷酸的转录
。
启动子也可以是启动子
/
增强子元件的一部分
。
尽管启动子和增强子元件之间的物理边界并不总是清楚的，启动子通常是指核酸分子上的位点，
RNA
聚合酶和
/
或任何相关因子结合到该位点，并且在该位点启动转录
。
增强子在时间上以及空间上增强启动子活性
。
已知许多启动子在广泛的细胞类型中具有转录活性
。
启动子可以分为两类，组成型发挥功能的启动子和通过诱导或去阻抑来调节的启动子
。
这两类都适用于蛋白质表达
。
用于在真核细胞中
(
并且特别是在哺乳动物细胞中
)
高水平生产多肽的启动子应该是强的，并且优选在广泛的细胞类型中是有活性的
。
能够在许多细胞类型中驱动表达的强组成型启动子是本领域公知的，并因此在此不必详细描述它们
。
[0003]启动子和
/
或增强子的实例是衍生自逆转录病毒
LTR、
巨细胞病毒
(CMV)(
例如
CMV
启动子
/
增强子
)、
猿猴病毒
40(SV40)(
例如
SV40
启动子
/
增强子
)、
腺病毒
(
例如腺病毒主要晚期启动子
(AdMLP))、CAG
启动子以及强哺乳动物启动子
(
例如
TTR
启动子或
EF1
‑
α
启动子
)
的启动子和
/
或增强子
。
[0004]根据亚型，
CMV
启动子的长度为
589
‑
1650bp(Changyu Zheng ET ALL.,All Human EF1
α
Promoters Are Not Equal
：
Markedly Affect Gene Expression in Constructs from Different Sources,Int J Med Sci.2014
；
11(5):404
‑
408,doi:10.7150/ijms.8033)。CAG
启动子
(CMV
早期增强子
/
鸡
β
肌动蛋白
)
的长度为
868bp(Nieuwenhuis,B.,Haenzi,B.,Hilton,S.
等人
.Optimization of adeno
‑
associated viral vector
‑
mediated transduction of the corticospinal tract:comparison of four promoters.Gene Ther.2021
；
28:56
–
74,https://doi.org/10.1038/s41434
‑
020
‑
0169
‑
1)。
[0005]所有上述启动子的长度都超过
588bp。
表达盒中长度超过
588bp
的启动子不是使用多种表达载体表达大转基因的最佳选择
。
[0006]因此，需要产生短启动子
。
[0007]许多启动子
(
包括
CMV
启动子
)
不是组织特异性的，即，它们不提供治疗性转基因在某些器官的细胞中的选择性表达，当用于产生基因疗法产物时，这个事实是这些启动子的明显缺点
。
[0008]因此，需要产生组织特异性启动子，其提供治疗性转基因在某些器官的细胞中的选择性表达
。

技术实现思路

[0009]本专利技术的作者惊奇地发现具有选自
SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14
或
15
的核苷酸序列的核酸具有启动子活性
。
具有
SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14
或
15
的核苷酸序列的启动子的长度在
123
‑
252bp
的范围内
。
此外，本专利技术的作者惊奇地发现具有
SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14
或
15
的核苷酸序列的启动子在肝细胞来源的细胞中具有组织特异性启动子活性
。
[0010]定义和一般方法
[0011]除非本文另有定义，否则与本专利技术结合使用的所有技术和科学术语将具有与本领域技术人员通常理解的相同的含义
。
[0012]此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数术语，并且复数术语应包括单数术语
。
通常，本文所述的细胞培养
、
分子生物学
、
免疫学
、
微生物学
、
遗传学
、
分析化学
、
有机合成化学
、
医学和药物化学以及蛋白质和核酸的杂交和化学的本分类和方法是本领域技术人员公知的并且广泛用于本领域
。
酶反应和纯化方法根据制造商的指导方针进行，如本领域常见的，或如本文所述
。
[0013]如本说明书和所附权利要求书中所用，除非上下文另有规定，否则词语“包括
(include)”和“包含
(comprise)”或其变体
(
例如“包括
(includes)”、“包括
(including)”、“包含
(comprises)”或“包含
(comprising)”)
将被理解为暗示包括所述的整体或整体组，但不排除任何其它整体或整体组
。
[0014]核酸分子
[0015]术语“核酸”、“核酸序列
(nuclei本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
具有启动子活性的核酸，其包含选自
SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14
或
15
的核苷酸序列
。2.
表达盒，其包含根据权利要求1所述的核酸分子和可操作地连接的转基因
。3.
根据权利要求2所述的表达盒，其中所述转基因编码蛋白质或小抑制性核酸
。4.
根据权利要求3所述的表达盒，其中所述转基因编码选自因子
VIII
或其功能变体
、
因子
IX
或其功能变体
、SMN1
蛋白
(
存活运动神经元蛋白
)、SARS
‑
cov2
的
RBD
‑
S
多肽或治疗性抗体的蛋白质
。5.
表达载体，其包含根据权利要求1所述的核酸或根据权利要求2‑4中任一项所述的表达盒
。6.
根据权利要求5所述的表达载体，其是质粒
、AAV、
慢病毒或腺病毒
。7.
根据权利要求6所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：拜奥卡德联合股份公司，
类型：发明
国别省市：