【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物技术和医学领域，特别涉及与gd2(神经节苷脂gd2)特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。本专利技术进一步涉及编码所述抗体的核酸，表达载体，宿主细胞及其生产方法，用于产生根据本专利技术的抗体的方法，包含根据本专利技术的抗体的药物组合物，包含根据本专利技术的抗体和其它治疗活性化合物的药物组合物，用于治疗由gd2介导的疾病或病症的方法，抗体或其药物组合物用于治疗由gd2介导的疾病或病症的用途，以及抗体和其它治疗活性化合物用于治疗由gd2介导的疾病或病症的用途。
技术介绍
1、gd2是被证明为用于癌症免疫治疗的有效靶抗原的首个神经节苷脂。
2、神经节苷脂由鞘糖脂和唾液酸(n-乙酰神经氨酸、neu5ac或nana)组成，其为九碳单糖。神经节苷脂命名法基于nana残基的数目和位置。首先将单糖加入神经酰胺中，以形成乳糖神经酰胺，然后加入nana残基，以形成神经节苷脂。每种糖都由特定的糖基转移酶结合。gd2具有两个nana(a-2,8唾液酸和a-2,3唾液酸)，并且通过经由gm2/gd2合酶(b1,4-n-乙酰半乳糖胺基转移酶)添加gal-nac而衍生自前体gd3。末端五寡糖构成最特异性的抗体针对其的gd2的特异性表位。负责制备gd2的这种关键酶gm2/gd2合酶已成功地用作骨髓中的最低限度残留的神经母细胞瘤的分子标记物，对患者存活具有重大预后影响。如关于神经节苷脂的合成途径中所述的，可以明确地限定gd2的表位邻域。例如，gd3和gd1b是抗gd2抗体识别的最常见的交叉反应的神经节苷脂。在末端唾液酸上具有9-o
3、gd2在神经干细胞、间充质干细胞(msc)和外周交感肾上腺素能祖细胞上表达，并且它涉及神经分化和增殖。虽然多唾液酸在神经元发育中的作用已得到广泛研究，但神经节苷脂，且具体而言gd2的确切功能仍是未知的。在出生后，gd2的表达仅限于cns，占优势地在神经元细胞体和msc中，以及以低水平在周围神经和皮肤黑素细胞中。gd2被认为在神经组织的维持和修复中发挥作用，所述神经组织通过调控补体激活和后续炎症而经历不断的进行性退行性变化，尽管确切的免疫机制仍不清楚。应该注意的是，gd2(+)msc具有分化成多重克隆包括神经元的潜力(maya suzuki等人，disialoganglioside gd2 as atherapeutic target for human diseases，expert opinion on therapeutic targets，2015，第15卷，第349-362页，pmid:25604432，doi:10.1517/14728222.2014.986459)。
4、gd2在各种胚胎癌(神经母细胞瘤、脑瘤、视网膜母细胞瘤、尤文氏肉瘤、横纹肌肉瘤)、骨肿瘤(骨肉瘤、尤文氏肉瘤)、软组织肉瘤(平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤)、肺癌、黑色素瘤和乳腺癌中是超表达的。
5、肿瘤单克隆抗体(mab)已证实了临床功效，因此成为用于癌症免疫治疗的重要方法。由于其在正常组织中的有限表达，在神经母细胞瘤细胞上表达的二唾液酸神经节苷脂gd2是用于mab疗法的极佳候选物。
6、国际申请wo2005070967a2公开了针对gd2的抗体。
7、迄今为止，全世界仅存在2种针对gd2的抗体被批准用于治疗用途(地努妥昔单抗(dinutuximab)和那昔妥单抗(naxitamab))。与上文结合，存在产生与gd2特异性结合的新型拮抗性抗体的需要。
技术实现思路
1、本组专利技术的作者已开发出与gd2特异性结合，并且在可变结构域中还具有至少80％的人源化程度的抗体。主题抗体具有高热稳定性。
2、在一个方面，本专利技术涉及与gd2(神经节苷脂gd2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
3、(a)重链可变结构域，其包含：
4、(i)具有选自以下的氨基酸序列的cdr1：ghnmn(seq id no:1)或gknmn(seq idno:2)，
5、(ii)具有氨基酸序列aidpfyggtsynqkfkg(seq id no:3)的cdr2，
6、(iii)具有选自以下氨基酸序列的cdr3：gmiy(seq id no:4)、gmfy(seq id no:5)、gmyy(seq id no:6)或gmly(seq id no:7)；和
7、(b)轻链可变结构域，其包含：
8、(i)具有选自以下的氨基酸序列的cdr1：rssrslvhrngntylh(seq id no:8)或rssqnlvhrngntylh(seq id no:9)，
9、(ii)具有选自以下的氨基酸序列的cdr2：kvsnrfg(seq id no:10)或kvnnrfs(seqid no:11)，
10、(iii)具有选自以下的氨基酸序列的cdr3：gqsthvpplt(seq id no:12)或sqsthvppls(seq id no:13)。
11、在本专利技术的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
12、(i)具有氨基酸序列qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgssft(seq id no:42)的fr1，
13、(ii)具有氨基酸序列wvrqnigqglewmg(seq id no:43)的fr2，
14、(iii)具有氨基酸序列rvtltvdksistaymelsrlrsddtavyycvs(seq id no:44)的fr3，和
15、(iv)具有氨基酸序列wgqgtlvtvss(seq id no:45)的fr4。
16、在本专利技术的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
17、(i)具有氨基酸序列divmtqtplslsvtpgeraslsc(seq id no:46)的fr1，
18、(ii)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
2.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
3.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
4.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中
5.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
6.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
7.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
9.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，
10.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
11.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
12.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
13.根据权利要求14的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
14.根据权利要求1-13中任一项的分离的单克隆抗体，其中与GD2特异性结合的抗体是全长IgG抗体。
15.根据权利要求14的分离的单克隆抗体，其中所述全长IgG抗体属于人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
16.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其中与Fc片段的天然序列相比，所述抗体包含在Fc片段中的YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和/或K322A突变。
17.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37。
18.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:41。
19.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
20.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
21.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
22.根据权利要求21的分离的核酸，其中所述核酸是DNA。
23.一种表达载体，包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
24.一种用于获得宿主细胞以获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括通过根据权利要求23的表达载体的细胞转化。
25.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，其包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
26.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在足以产生所述抗体的条件下，在生长培养基中培养根据权利要求25的宿主细胞，必要时，随后分离和纯化所得到的抗体。
27.一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
28.根据权利要求27的药物组合物，用于治疗由GD2介导的疾病或病症。
29.根据权利要求28的药物组合物，其中由GD2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与gd2(神经节苷脂gd2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
2.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
3.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
4.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中
5.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
6.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
7.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含与seq id no:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含选自seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16或seq id no:17的氨基酸序列。
9.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含与seq id no:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含选自seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20或seq id no:21的氨基酸序列。
11.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
12.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
13.根据权利要求14的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
14.根据权利要求1-13中任一项的分离的单克隆抗体，其中与gd2特异性结合的抗体是全长igg抗体。
15.根据权利要求14的分离的单克隆抗体，其中所述全长igg抗体属于人igg1、igg2、igg3或igg4同种型。
16.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其中与fc片段的天然序列相比，所述抗体包含在fc片段中的yte突变(m252y、s254t、t256e)和/或k322a突变。
17.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的重链：seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq idno:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37。
18.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的轻链：seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40或seq id no:41。
19.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
20.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
21.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
22.根据权利要求21的分离的核酸，其中所述核酸是dna。
23.一种表达载体，包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
24.一种用于获得宿主细胞以获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括通过根据权利要求23的表达载体的细胞转化。
25.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，其包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
26.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在足以产生所述抗体的条件下，在生长培养基中培养根据权利要求25的宿主细胞，必要时，随后分离和纯化所得到的抗体。
27.一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
28.根据权利要求27的药物组合物，用于治疗由gd2介导的疾病或病症。
29.根据权利要求28的药物组合物，其中由gd2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、b细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
30.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段和至少一种其它治疗活性化合物。
31.根据权利要求30的药物组合物，用于治疗由gd2介导的疾病或病症。
32.根据权利要求31的药物组合物，其中由gd2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、b细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·A·亚吉耶夫，Y·S·切尔尼赫，D·A·康丁斯卡亚，V·E·希吉纳，D·K·萨哈罗娃，M·A·格雷芬斯坦，A·K·斯托亚罗娃，V·V·索洛维耶夫，P·A·雅科夫列夫，D·V·莫洛佐夫，
申请(专利权)人：拜奥卡德联合股份公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。