一种靶向制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向

【技术实现步骤摘要】
一种靶向MLP编码基因的茶小绿叶蝉防治试剂


[0001]本专利技术涉及农业生物
，具体涉及一种靶向
MLP
编码基因的茶小绿叶蝉防治试剂
。

技术介绍

[0002]昆虫粘样蛋白
(mucin
‑
like protein
，
MLP)
的成员最初被从粉纹夜蛾
Trichoplusia ni
的围食膜鉴定出来，由于氨基酸序列组成与人类黏蛋白
MUC2
相似而被命名
。
该蛋白属于高分子量糖蛋白，具有高度
O
‑
联糖基化位点形成粘蛋白结构域
(mucin domain
，
MD)
，该结构域的序列中苏氨酸
、
丝氨酸和脯氨酸的残基比例比较高，且通常含有相同或高度相似的串联重复序列
。
[0003]MLP
通常可分为分泌型和膜结合型两类，其在特殊的序列和重复区的数量在不同类型粘蛋白和同源的粘蛋白的不同位置呈多样化
。
分泌型粘蛋白是粘液的重要组成部分，在各种组织
、
粘膜的表面形成一层凝胶状物质，可以有效防止有害物质的入侵，其还参与胞内信号传导，被包装成分泌物进入囊泡中
。
膜结合型粘蛋白的羧基末端有一个能连接到质膜的跨膜结构域，促进两者的结合以及信号传导和蛋白质的稳定
。
[0004]昆虫同样含有分泌型粘蛋白
(
围食膜相关
)
和膜结合型粘蛋白
(
微绒毛相关
)。
粘蛋白的高度
O
‑
联糖基化可以增强蛋白质应对水解酶降解的稳定性，对细胞和组织的正常发育
、
生长和分化至关重要，同时保护细胞免受寄主
、
细菌
、
病毒的侵染
。
可见，
MLP
在昆虫取食
、
互作和抵抗病菌入侵中也可能具有一定的功能
。
[0005]目前对于昆虫
MLP
家族的鉴定大多为分泌型且集中在不含保护性角质层的器官，如唾液腺，中肠，马氏管等
。
中肠的研究较多集中于鳞翅目和双翅目等，如小菜蛾
Plutella xylostella、
甜菜夜蛾
Spodoptera exigua、
蓓带夜蛾
Mamestra configurata、
粉纹夜蛾
Trichoplusia ni、
棉铃虫
Helicoverpa armigera、
埃及伊蚊
Aedes aegypti
等
。
上述研究表明，肠道上皮中的
MLP
会被粉纹夜蛾颗粒体病毒
(Trichoplusia ni granulosis virus,TnGV)
或粘质沙雷氏菌
(Serratia marcescens)
等分泌的
Enhancin
蛋白消化，导致围食膜被破坏，促进虫媒病毒等的感染
。
唾液腺的相关研究显示，
MLP
是唾液腺分泌物的重要组成部分
。
如黑腹果蝇
Drosophila melanogaster
在变态过程中从唾液腺中分泌出果蝇胶涂遍全身，用来保护果蝇蛹免受外界环境的影响从而提高存活率，该物质被鉴定属于分泌型
MLP。MLP
被认为是褐飞虱
Nilaparvata lugens
和灰飞虱
Laodelphax striatellus
唾液鞘的重要组成，帮助其在水稻上进行取食，且与植物防御反应相关
。Miao
等在白背飞虱
Sogatella furcifera
水状唾液中发现
MLP
且在唾液腺中特异性表达，猜测其与植物诱导防御反应相关
。
综上所述，
MLP
可能是粘液重要组成
(
胶装唾液
)
，也参与昆虫中肠防御或植物诱导防御等过程，因此昆虫
MLP
的鉴定可为害虫生物防治潜在的新靶标的研究提供前提和基础
。
[0006]茶小绿叶蝉
Empocsca flavescens
，隶属于半翅目叶蝉科昆虫，是我国茶园发生最普遍
、
危害最严重的害虫之一
。
该害虫具有个体较小，种群密度较大，繁殖能力强，极难防治等特点
。
探寻茶小绿叶蝉新型防治靶标和途径，从而有效延缓茶小绿叶蝉抗药性的发展是
茶树防控一直面临的长期问题
。
目前，茶小绿叶蝉的
MLP
尚未鉴定，也未见文献报道，在
GenBank
数据库中也未找到相关基因片段，对
MLP
的研究尚属空白
。
[0007]因此，找到茶小绿叶蝉的
MLP
编码基因，并基于
RNAi
技术研究相关基因在其生长发育中的作用，有望找到一种新型的茶小绿叶蝉绿色防控方法
。

技术实现思路

[0008]为解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向
MLP
编码基因的茶小绿叶蝉防治试剂，根据茶小绿叶蝉转录组数据库筛选
EfMLP
基因的序列片段，找到4条
EfMLP
序列，经克隆
、
鉴定及序列分析，分析了
EfMLP1
‑4基因在不同发育阶段
、5
龄若虫不同组织的表达水平差异性，并通过
RNAi
技术研究了
EfMLP1
‑4基因在生长发育中的作用，以期为利用
MLP
开发叶蝉绿色防控新技术提供科学依据，针对
EfMLP2
和
EfMLP4
设计并筛选获得
dsRNA
组合，可用于制备茶小绿叶蝉的绿色防控试剂，有效降低茶小绿叶蝉的存活率
。
[0009]一方面，本专利技术提供了一种
EfMLP
基因或其编码蛋白作为靶标在用于制备茶小绿叶蝉防治试剂的用途，所述
EfMLP
基因包括
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
中的任意一种或多种；所述
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
分别具有如
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.4
所示的核苷酸序列
。
[0010]本专利技术通过提取茶小绿叶蝉的总
RNA
，并合成
cDNA
，测得茶小绿叶蝉的转录组数本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
EfMLP
基因或其编码蛋白作为靶标在用于制备茶小绿叶蝉防治试剂的用途，其特征在于，所述
EfMLP
基因包括
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
中的任意一种或多种；所述
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
分别具有如
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.4
所示的核苷酸序列
。2.
如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述
EfMLP
基因包括
EfMLP2
和
/
或
EfMLP4。3.
一种茶小绿叶蝉防治试剂，其特征在于，包括由
EfMLP
基因转录而来的
dsRNA
，所述
EfMLP
基因包括
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
中的任意一种或多种；所述
EfMLP1、EfMLP2、EfMLP3、EfMLP4
分别具有如
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.4
所示的核苷酸序列
。4.
如权利要求3所述的试剂，其特征在于，包括由
EfMLP2
和
/
或
EfMLP4
转录而来的
dsRNA。5.
如权利要求4所述的试剂，其特征在于，包括
dsEfMLP2
‑
1、dsEfMLP2
‑
2、dsEfMLP2
‑3中的一种或多种，和
/
或
dsEfMLP4
‑
1、dsEfMLP4
‑
2、dsEfMLP4
‑3中的一种或多种；所述
dsEfMLP2
‑
1、ds...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘铖，魏可欣，夏露霞，何雪怡，钮羽群，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：