干涉制造技术

本发明专利技术涉及核酸技术领域，特别是涉及一种能够特异性识别并介导下调内源性

【技术实现步骤摘要】
干涉TCR基因表达的siRNAs核酸分子、包含核酸分子的表达载体和细胞及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别是涉及一种干涉
TCR
基因表达的
siRNAs
核酸分子
、
包含核酸分子的表达载体和细胞及其应用
。

技术介绍

[0002]siRNA(small interfering RNA)
，是一种外源的长
20
到
25
个核苷酸的双链
RNA
分子，能够触发细胞内
RNA
干扰
(RNAi)
或
RNA
沉默途径
。siRNA
能够识别与其序列互补的
mRNA
序列并介导
RNAaseIII
将其切割，引发靶
mRNA
的降解，从而沉默靶基因的表达
。
通过慢病毒载体转导的
siRNA
序列能够整合在宿主细胞基因组中，作为宿主细胞基因组的一部分稳定遗传并持续表达
siRNA
功能分子，从而在不改变靶基因序列的情况下，持续沉默基因表达
。
[0003]TCR
‑
T(TCR
‑
engineered T cells)
疗法，是通过将特异性识别肿瘤细胞的
TCR
转导
T
细胞，使其在
T
细胞内持续表达并重定向
T<br/>细胞识别和杀伤肿瘤细胞的能力
。
但是淋巴
T
细胞基因转导的治疗性
TCR
在细胞内的组装会受到内源性
TCR
的影响，形成不同来源
α
和
β
链杂合二聚体，这些杂合
TCR
的形成，不仅降低了治疗性
TCR
的组装效率，还可能导致潜在的脱靶毒性
。
[0004]现阶段，通过两种策略提高转基因
TCR
正确组配效率：转基因
TCR
α
和
β
链之间引入人工二硫键，以及将
TCR
α
和
β
链的人源保守区序列替换为鼠源序列
。
然而，现有技术中的两种策略改造的转基因
TCR
转导
T
细胞后仍然存在较高水平的错配率，而纯合转基因
TCR
阳性率极低
。
目前现有技术中还没有太好的解决方案
。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种干涉
TCR
基因表达的
siRNAs
核酸分子
、
包含核酸分子的表达载体和细胞及其应用，从而有效解决现有技术改造的转基因
TCR
转导
T
细胞后错配率高，纯合转基因
TCR
阳性率极低的技术问题
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的一个方面，公开了一种干涉
TCR
基因表达的
siRNA
核酸分子，所述
siRNAs
核酸分子包含
TRAC
‑
siRNA
和
TRBC
‑
siRNA
，所述
TRAC
‑
siRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO1
所示，或
TRAC
‑
siRNA
序列对应
shRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO2
所示；
TRBC
‑
siRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO3
所示，或
TRBC
‑
siRNA
序列对应
shRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO4
所示
。
[0007]进一步的，所述
siRNAs
核酸分子能够同时识别人源淋巴
T
细胞
TRAC、TRBC1
和
TRBC2
基因转录的
mRNA。
[0008]进一步的，所述
TRAC
‑
siRNA
能够特异性识别
TRAC
基因转录的
mRNA
，
TRBC
‑
siRNA
特异性识别
TRBC(
包括
TRBC1
和
TRBC2)
基因转录的
mRNA
，并介导对应
mRNA
降解
。
[0009]进一步的，所述
siRNAs
核酸分子用于提高治疗性外源
TCR
在淋巴
T
细胞表面的纯合表达，增强
TCR
‑
T
细胞活性
。
[0010]本专利技术的另一个方面，提供了一种包含
siRNAs
核酸分子的表达载体
。
[0011]进一步的，所述表达载体为病毒载体
。
[0012]进一步的，所述表达载体为慢病毒载体
。
[0013]进一步的，所述表达载体还包括治疗性
TCR
核酸序列，所述治疗性
TCR
核酸序列与
siRNAs
核酸分子串联表达
。
[0014]本专利技术的另一个方面，还提供了一种分离宿主细胞，所述分离宿主细胞包含上述表达载体，或所述分离宿主细胞染色体中整合有外源
siRNAs
核酸分子
。
[0015]进一步的，本专利技术还提供了一种被包含治疗性
TCR
核酸序列表达载体转导的细胞
。
[0016]本专利技术相比现有技术的有益效果：
(1)
本申请所述
siRNAs
核酸分子能有效下调内源性
TCR
的低表达，从而降低其与转基因
TCR
竞争
CD3
分子的能力；
(2)
提高了转基因
TCR
的正确组配效率以及纯合转基因
TCR
在
T
细胞表面的数量；
(3)
降低了
TCR
α
和
β
链杂合二聚体的组装率
。(4)siRNAs
适用所有候选
TCR
在
T
细胞中的转基因表达以及杀伤肿瘤活性的提高
。
附图说明
[0017]图1：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
siRNAs
核酸分子，其特征在于：所述
siRNAs
核酸分子包含
TRAC
‑
siRNA
和
TRBC
‑
siRNA
，所述
TRAC
‑
siRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO1
所示，或
TRAC
‑
siRNA
序列对应
shRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO2
所示；
TRBC
‑
siRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO3
所示，或
TRBC
‑
siRNA
序列对应
shRNA
核酸序列如序列表
SEQ ID NO4
所示
。2.
根据权利要求1所述的
siRNAs
核酸分子，其特征在于：所述
siRNAs
核酸分子能够同时识别人源淋巴
T
细胞
TRAC、TRBC1
和
TRBC2
基因转录的
mRNA。3.
根据权利要求1所述的
siRNAs
核酸分子，其特征在于：所述
TRAC
‑
siRNA
特异性识别
TRAC
基因转录的
mRNA

【专利技术属性】
技术研发人员：王建超，马瑞仙，王李风，陈静，吴昊，聂苏秦，
申请(专利权)人：西安九州医学中心有限公司，
类型：发明
国别省市：