一种多潜能干细胞复苏培养基及增强多潜能干细胞复苏效率的方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种多潜能干细胞复苏培养基及增强多潜能干细胞复苏效率的方法

【技术实现步骤摘要】
一种多潜能干细胞复苏培养基及增强多潜能干细胞复苏效率的方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种多潜能干细胞复苏培养基及增强多潜能干细胞复苏效率的方法
。

技术介绍

[0002]多能干细胞具有多潜能性，能够自我更新和无限增殖，可以发育成为所有类型的体细胞的干细胞
。
胚胎干细胞
(embryonic stem cell
，
ESC)
是从囊胚内细胞团分离得到的，是研究最多的多能干细胞，
ESC
被用来做药物筛选和病理模型的构建，也有用来模拟特定发育的过程
。
诱导多潜能干细胞
(induced pluripotent stem cells
，
iPSCs)
是人为地利用外源因子将体细胞转化成具有多能性的细胞，其功能近乎等价于
ESC。
据此，
iPSCs
可以被用来生成所有类型的细胞，加上几乎无限的增殖能力，利用
iPSCs
定向分化成各种目的细胞
(
造血干细胞
、
内皮细胞
、
心肌细胞等
)
可以满足各种特定的需求
。iPSCs
等多潜能干细胞被认为是干细胞治疗，药物研发和疾病模型领域中革命性的细胞资源
。
[0003]然而，人源多潜能干细胞的培养一直受困于三个重要的技术问题，其一是传代过程中的应激压力，其二是较低的克隆形成率，其三是冻存细胞的低复苏效率
。
目前，对于冻存的多能干细胞的复苏效率低的问题，已经有了一些解决的方案
。
这些方案的思路包括对要冻存的细胞在收集前进行预处理，优化冻存液的配方，优化复苏液的配方，在复苏后培养基内添加特定的物质
。
由于其生长方式的特殊性，高效地冻存和复苏多潜能干细胞的一个重要挑战在于在不影响细胞的多能性的前提下尽可能提高细胞的复苏效率
。
根据现有相关研究，除了
Y
‑
27632
的添加不会引起功能干细胞的多能性指标的改变具有大量的文献支持以外，尽管其它方法也可以显著提高复苏效率，其添加物对多能干细胞的影响并未得到广泛的验证，同时需要付出额外的成本
。
虽然单独使用
Y
‑
27632
可有效增强多能干细胞的复苏效率，但仍然具有可改进的空间
。
[0004]因此，需要提供一种针对上述现有技术不足的改进技术方案
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种多潜能干细胞复苏培养基及增强多潜能干细胞复苏效率的方法，以有助于改善多潜能干细胞的复苏效率
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种多潜能干细胞复苏培养基，所述复苏培养基的组分包括条件培养基和
Y
‑
27632
；所述条件培养基为所述多潜能干细胞传代前的培养液除去固形物后所得的液体；所述复苏培养基用于对复苏得到的多潜能干细胞进行培养
。
[0007]优选地，所述条件培养基采用包括下述步骤的方法制备得到：
(1)
在所述多潜能干细胞传代的前一天，更换培养基；
(2)
继续培养8‑
24h
；
(3)
收集培养基上清，除去培养基上清中的固形物，即得所述条件培养基
。
[0008]优选地，步骤
(3)
中，采用
0.22
μ
m
滤膜过滤以除去培养基上清中的固形物
。
[0009]优选地，所述复苏培养基的组分还包括
mTeSR1
完全培养基；所述复苏培养基中，所述条件培养基的体积分数为
20
％
‑
80
％；所述
Y
‑
27632
的浓度为
10
μ
M。
[0010]优选地，所述复苏培养基中，所述条件培养基与
mTeSR1
完全培养基的体积比为
1:2
‑
2:1。
[0011]本专利技术还提供了一种增强多潜能干细胞复苏效率的方法，其采用下述技术方案：一种增强多潜能干细胞复苏效率的方法，采用如上所述的复苏培养基对复苏后的多潜能干细胞进行培养
。
[0012]优选地，包括下述步骤：
(1)
采用所述复苏培养基对复苏后的所述多潜能干细胞进行培养；
(2)
培养一天后，更换为新鲜的完全培养基继续培养
。
[0013]优选地，步骤
(2)
中，所述继续培养的过程中，每天更换一次培养基
。
[0014]优选地，所述复苏后的多潜能干细胞通过对冻存的细胞团或冻存的单细胞进行复苏处理得到；所述细胞团和
/
或单细胞的冻存液为
20
％
DMSO+80
％
mTeSR1
完全培养基
。
[0015]优选地，所述复苏的方法包括下述步骤：
A.
将冻存的多潜能干细胞从液氮中取出后，
37℃
水浴复苏；
B.
将经步骤
A
处理所得细胞转移至离心管中，滴加
mTeSR1
完全培养基，离心，弃上清后加入
mTeSR1
完全培养基，使所述多潜能干细胞重悬，得到细胞悬液
。
[0016]有益效果：
[0017]本专利技术的多潜能干细胞复苏培养基在不引入其它未被广泛验证的可用于多能干细胞维持性培养的试剂
、
亦未使用异于常规的细胞冻存与复苏程序的情况下，有助于提高多潜能干细胞的复苏效率
(
相对于复苏时单独添加
Y
‑
27632)
；此外，本专利技术的多潜能干细胞复苏培养基天然规避了改变多能干细胞的多能性指标的风险；本专利技术的多潜能干细胞复苏培养基的成本低
。
[0018]本专利技术的增强多潜能干细胞复苏效率的方法的复苏效率高，复苏培养得到的细胞具有正常的多潜能干细胞形态，碱性磷酸酶阳性，且细胞克隆尺寸更大
(
相对于复苏时单独添加
Y
‑
27632
的同时间点
)。
附图说明
[0019]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定
。
其中：
[0020]图1为本专利技术一种实施例提供的增强多潜能干细胞复苏效率的方法的流程图；
[0021]图2为本专利技术一种实施例提供的采用增强多潜能干细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种多潜能干细胞复苏培养基，其特征在于，所述复苏培养基的组分包括条件培养基和
Y
‑
27632
；所述条件培养基为所述多潜能干细胞传代前的培养液除去固形物后所得的液体；所述复苏培养基用于对复苏得到的多潜能干细胞进行培养
。2.
根据权利要求1所述的多潜能干细胞复苏培养基，其特征在于，所述条件培养基采用包括下述步骤的方法制备得到：
(1)
在所述多潜能干细胞传代的前一天，更换培养基；
(2)
继续培养8‑
24h
；
(3)
收集培养基上清，除去培养基上清中的固形物，即得所述条件培养基
。3.
根据权利要求2所述的多潜能干细胞复苏培养基，其特征在于，步骤
(3)
中，采用
0.22
μ
m
滤膜过滤以除去培养基上清中的固形物
。4.
根据权利要求1所述的多潜能干细胞复苏培养基，其特征在于，所述复苏培养基的组分还包括
mTeSR1
完全培养基；所述复苏培养基中，所述条件培养基的体积分数为
20
％
‑
80
％；所述
Y
‑
27632
的浓度为
10
μ
M。5.
根据权利要求4所述的多潜能干细胞复苏培养基，其特征在于，所述复苏培养基中，所述条件培养基与
mTeSR1
完全培养基的体积比为
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄莹之，李水平，方攀峰，韦俊，袁春，
申请(专利权)人：宁波希诺赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：