一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物技术领域，具体涉及一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合及其应用。本发明专利技术的鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合包括HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因。该标志物组合可用于鉴定体外培养的DP细胞。志物组合可用于鉴定体外培养的DP细胞。志物组合可用于鉴定体外培养的DP细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物
，具体涉及一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合及其应用。

技术介绍

[0002]正常的毛囊(Hair Follicle，HF)不断经历生长期，退化期和休止期。毛乳头细胞(dermal papilla cells，DPCs)被认为是一种独特的间充质干细胞，具有自体干细胞治疗的潜力，位于毛囊底端的毛球部，被真皮鞘和毛母质细胞包绕。
[0003]DPCs作为HF的信号中心，在调节毛发生长、形成和循环中发挥重要作用。体外分离毛乳头细胞时，由于毛乳头的解剖位置特别，同时生物学特征明显，因此毫无杂质的毛乳头的提取十分困难，污染风险高，导致其后的生长的细胞纯度会被影响，存在较多杂细胞。因此，对于体外培养的DP细胞进行鉴定对于其后的应用研究至关重要。
[0004]目前，体内组织DP细胞的鉴定方法比较成熟。细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，易发生分化现象减弱、形态功能趋于单一化、发生转化获得不死性种种转变。虽然体外细胞与机体细胞存有差异，但并未失去研究的意义。离体细胞仍带有全套的二倍体基因。细胞在培养中的表现，只不过是相应基因关闭与开启引起的现象，这并非是绝对缺陷。恰恰相反，在培养的细胞中某些特定功能的丧失，可为这类基因的表达与调控提供线索。但目前对于体外培养DP细胞，没有成熟的鉴定方法用于有效鉴别，因此迫切需要开发一种能够准确且快速鉴定DPCs的方法以支持体外DPCs应用前的鉴定。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合及其应用，以解决或改善DP细胞体外鉴定的问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合，所述标志物包括HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因。
[0007]本专利技术还提供了一种如上所述的鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合的应用，其采用下述技术方案：如上所述的标志物组合在从毛囊组织中体外分离培养DP细胞中的应用。
[0008]本专利技术还提供了一种体外培养的DP细胞鉴定试剂，其采用下述技术方案：一种体外培养的DP细胞鉴定试剂，所述试剂包括用于检测HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因中的至少一种的引物。
[0009]本专利技术的DP细胞鉴定试剂的优选方案中，用于检测HES1基因的引物为：
[0010]HES1
‑
F：5
’‑
CAAGCTGGAGAAGGCGGACA
‑3’
；
[0011]HES1
‑
R：5
’‑
TCGGTACTTCCCCAGCACACT
‑3’
；
[0012]用于检测TINAGL1基因的引物为：
[0013]TINAGL1
‑
F：5
’‑
GGCCAGAGAGATACCGCCGG
‑3’
；
[0014]TINAGL1
‑
R：5
’‑
ATGCGGAAGTGGCCCCTCTC
‑3’
；
[0015]用于检测IL1B基因的引物为：
[0016]IL1B
‑
F：5
’‑
CCGCGTCAGTTGTTGTGGCC
‑3’
；
[0017]IL1B
‑
R：5
’‑
AGTCCCGGAGCGTGCAGTTC
‑3’
。
[0018]本专利技术还提供了一种DP细胞鉴定试剂盒，其采用下述技术方案：一种DP细胞鉴定试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的试剂。
[0019]本专利技术还提供了一种DP细胞鉴定方法，其采用下述技术方案：一种DP细胞鉴定方法，通过检测HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因中相对于管家基因的表达水平，判断体外培养的细胞是否为DP细胞。
[0020]本专利技术的DP细胞鉴定方法的优选方案中，所述HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因中的至少一种的表达水平采用real
‑
time RT
‑
PCR检测得到。
[0021]本专利技术的DP细胞鉴定方法的优选方案中，判断体外培养DP细胞的依据为
△
Ct值；DP细胞的
△
Ct值满足下述标准：HES1基因的
△
Ct值≤11.8、TINAGL1基因的
△
Ct值≤11.2和IL1B基因的
△
Ct值≤4.4；所述
△
Ct值按照下述方法计算得到：待测基因的Ct值
‑
管家基因的Ct值；所述管家基因为GAPDH基因。
[0022]本专利技术的DP细胞鉴定方法的优选方案中，检测GAPDH基因的引物为：
[0023]GAPDH
‑
F:5
’‑
AGCCACATCGCTCAGACACC
‑3’
；
[0024]GAPDH
‑
R:5
’‑
GTACTCAGCGCCAGCATCG
‑3’
。
[0025]有益效果：
[0026]专利技术人通过试验首次发现了可以用于鉴定DP细胞的生物标志物HES1、TINAGL1和IL1B基因，试验验证通过检测HES1、TINAGL1和IL1B基因的相对表达水平可以实现体外培养的DP细胞的鉴定。
[0027]本专利技术的DP细胞鉴定方法简单易行、成本低，通过开发和研制DP细胞的鉴定产品，可以方便快速、准确、大批量地鉴定体外培养的DP细胞，对临床治疗等应用具有重要意义，填补了现有技术中相关内容的空白。
附图说明
[0028]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。其中：
[0029]图1为本专利技术实施例提供的原代分离的DP细胞和低纯度DP细胞的细胞形态显微镜图；其中，图1A(0.1mm)和1B(100μm)为原代分离的DP细胞形态图；图1C(0.1mm)和1D(100μm)为原代分离的低纯度DP细胞形态图；
[0030]图2为原代分离得到的DP细胞和低纯度DP细胞的碱性磷酸酶(ALP)免疫荧光实验结果对比图；从上到下依次为GFP荧光照片；核染的DAPI荧光照片；前两者叠加后的荧光照片；
[0031]图3为筛选出的DP细胞鉴定特征基因的RNA seq结果图；
[0032]图4为扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；其中，
②
为IL1B基因PCR产物电泳图、
③
为TINAGL1基因PCR产物电泳图、
⑤
为HES1基因P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定体外培养的DP细胞的标志物组合，其特征在于，所述标志物包括HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因。2.如权利要求1所述的标志物组合在从毛囊组织中体外分离培养DP细胞中的应用。3.一种体外培养的DP细胞鉴定试剂，其特征在于，所述试剂包括用于检测HES1基因、TINAGL1基因和IL1B基因中的至少一种的引物。4.根据权利要求3所述的DP细胞鉴定试剂，其特征在于，用于检测HES1基因的引物为：HES1
‑
F：5
’‑
CAAGCTGGAGAAGGCGGACA
‑3’
；HES1
‑
R：5
’‑
TCGGTACTTCCCCAGCACACT
‑3’
；用于检测TINAGL1基因的引物为：TINAGL1
‑
F：5
’‑
GGCCAGAGAGATACCGCCGG
‑3’
；TINAGL1
‑
R：5
’‑
ATGCGGAAGTGGCCCCTCTC
‑3’
；用于检测IL1B基因的引物为：IL1B
‑
F：5
’‑
CCGCGTCAGTTGTTGTGGCC
‑3’
；IL1B
‑
R：5
’‑
AGTCCCGGAGCGTGCAGTTC
‑3’

【专利技术属性】
技术研发人员：黄莹之，刘辉，潘娜，王子明，
申请(专利权)人：宁波希诺赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：