一种干细胞冻存液及其冻存方法和复苏方法技术

本发明专利技术属于细胞冻存技术领域，具体涉及一种干细胞冻存液及其冻存方法和复苏方法。本发明专利技术的干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞冻存液及其冻存方法和复苏方法


[0001]本专利技术属于细胞冻存
，具体涉及一种干细胞冻存液及其冻存方法和复苏方法。

技术介绍

[0002]目前市场上的干细胞冻存液质量参差不齐，其关键在于干细胞的活性控制难度大，现有的干细胞冻存液使用过程中干细胞易出现黏附、聚集成团，稳定性差的问题，从而影响了现有干细胞复苏后的效果与活率，除此之外，商品化冻存液的价格较高，不便于大规模冻存。
[0003]因此，需要提供一种针对上述现有技术不足的改进技术方案。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种干细胞冻存液及其冻存方法和复苏方法，以便于解决或改善下述中的至少一项问题：商品化冻存液价格高、冻存效果差。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种干细胞冻存液，
[0006]所述干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5
‑
20％、谷胱甘肽注射液0.1
‑
3％、羟乙基淀粉氯化钠注射液5
‑
20％、氨甲环酸注射液0.5
‑
2％、人血白蛋白注射液8
‑
25％、维生素C注射液0.5
‑
3％和右旋糖酐注射液20
‑
35％，余量为10％葡萄糖注射液；其中，所述谷胱甘肽注射液中，谷胱甘肽的浓度为0.6％；所述羟乙基淀粉氯化钠注射液中，羟乙基淀粉的浓度为0.06g/mL，氯化钠的浓度为0.009g/mL；所述氨甲环酸注射液中，氨甲环酸的浓度为0.1g/mL；所述人血白蛋白注射液中，人血白蛋白的浓度为20％；所述维生素C注射液中，维生素C的浓度为0.1g/mL；所述右旋糖酐注射液中，右旋糖酐的浓度为6％。
[0007]优选地，所述干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5
‑
8％、谷胱甘肽注射液0.5
‑
1％、羟乙基淀粉氯化钠注射液10
‑
20％、氨甲环酸注射液0.5
‑
1％、人血白蛋白注射液15％、维生素C注射液1.5％和右旋糖酐注射液25
‑
30％，余量为10％葡萄糖注射液。
[0008]优选地，所述干细胞冻存液用于间充质干细胞和毛囊DP细胞的冻存。
[0009]本专利技术还提供了一种干细胞冻存方法，其采用下述技术方案：一种干细胞冻存方法，采用如上所述的干细胞冻存液对干细胞进行直接冻存；所述直接冻存包括下述步骤：将所述干细胞与所述干细胞冻存液混匀，并放在程序降温盒后，置于
‑
80℃环境中保存，以1℃/min的降温速率进行降温。
[0010]优选地，采用如上所述的干细胞冻存液对干细胞进行程序降温冻存；所述程序降温冻存包括下述步骤：A.4℃平衡；B.以1℃/min的降温速率降温至
‑
4℃；C.以25℃/min的降温速率降温至
‑
40℃；D.以10℃/min的升温速率升温至
‑
12℃；E.以1℃/min的降温速率降温至
‑
40℃；F.以10℃/min的降温速率降温至
‑
90℃；G.置于
‑
80℃环境中保存。
[0011]优选地，步骤A中，所述干细胞与所述干细胞冻存液混匀后，所述干细胞的浓度为
(1.5
‑
10)
×
106cells/mL。
[0012]本专利技术还提供了一种干细胞复苏方法，其采用下述技术方案：一种干细胞复苏方法，将采用如上所述的干细胞冻存液冻存后的干细胞从
‑
80℃环境中取出后，置于37℃水浴中复苏；或，置于常温条件下融化复苏。
[0013]优选地，所述常温为20
‑
30℃，所述常温条件下融化复苏的时间为5
‑
20min。
[0014]有益效果：
[0015]本专利技术的干细胞冻存液具有成本低廉、冻存效果好、效率高和粘度低、易于实现冻存液和干细胞的分离等优点。
[0016]采用本专利技术的干细胞冻存液对干细胞进行冻存时，无需经过程序降温，也可保持较高的活率(复苏后细胞活率可达80％以上)，冻存步骤快捷方便。
[0017]本专利技术的干细胞冻存液不含动物血清(无动物源)，无内毒素且成本低廉，有效期长。
[0018]采用本专利技术的干细胞冻存液对干细胞进行冻存，复苏后细胞的存活率较高，且后续培养时干细胞具有较高的分泌能力，复苏步骤简单快捷。
[0019]采用本专利技术的干细胞冻存液对干细胞进行冻存，冻存后的干细胞可在常温下化融复苏，无需水浴加热，且复苏后细胞的存活率高。
[0020]采用常温复苏的方式对冻存的干细胞进行复苏，使得可以在B级洁净区(干细胞制剂的使用或生产过程中，需要在B级洁净区对复苏后的干细胞进行操作)实现干细胞的复苏；相对于现有技术中常用的水浴复苏，可有效减少操作的繁琐程度(B级洁净区无法放水浴锅，采用现有技术中常用的水浴复苏方法对干细胞进行复苏时，需要在C级洁净区进行，之后再传递到B级洁净区，操作繁琐)，同时常温复苏减少了水浴复苏可能产生的污染情况。
附图说明
[0021]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。其中：
[0022]图1为分别采用实施例1
‑
5、对比例1
‑
2和对照组的冻存液对脐带间充质干细胞进行冻存并对复苏后的细胞活率、回收率、贴壁率和有效贴壁率的测定结果图；
[0023]图2为采用本专利技术实施例2的干细胞冻存液对脐带间充质干细胞进行冻存并复苏后，细胞的流式检测结果图。
具体实施方式
[0024]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]下面将结合实施例来详细说明本专利技术。需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0026]本专利技术针对目前干细胞冻存液存在的问题，提供一种干细胞冻存液，本专利技术实施例的干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5
‑
20％(例如，5％、10％、15％或20％)、谷胱甘肽注射液0.1
‑
3％(例如，0.1％、0.5％、1％、2％或3％)、羟乙基淀粉氯化钠
注射液5
‑
20％(例如，5％、10％、15％或20％)、氨甲环酸注射液0.5
‑
2％(例如，0.5％、1％、1.5％或2％)、人血白蛋白注射液8
‑
25％(例如，8％、12％、16％、20％或25％)、维生素C注射液0.5
‑
3％(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干细胞冻存液，其特征在于，所述干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5
‑
20％、谷胱甘肽注射液0.1
‑
3％、羟乙基淀粉氯化钠注射液5
‑
20％、氨甲环酸注射液0.5
‑
2％、人血白蛋白注射液8
‑
25％、维生素C注射液0.5
‑
3％和右旋糖酐注射液20
‑
35％，余量为10％葡萄糖注射液；其中，所述谷胱甘肽注射液中，谷胱甘肽的浓度为0.6％；所述羟乙基淀粉氯化钠注射液中，羟乙基淀粉的浓度为0.06g/mL，氯化钠的浓度为0.009g/mL；所述氨甲环酸注射液中，氨甲环酸的浓度为0.1g/mL；所述人血白蛋白注射液中，人血白蛋白的浓度为20％；所述维生素C注射液中，维生素C的浓度为0.1g/mL；所述右旋糖酐注射液中，右旋糖酐的浓度为6％。2.根据权利要求1所述的干细胞冻存液，其特征在于，所述干细胞冻存液包括下述体积百分比的组分：二甲基亚砜5
‑
8％、谷胱甘肽注射液0.5
‑
1％、羟乙基淀粉氯化钠注射液10
‑
20％、氨甲环酸注射液0.5
‑
1％、人血白蛋白注射液15％、维生素C注射液1.5％和右旋糖酐注射液25
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30％，余量为10％葡萄糖注射液。3.根据权利要求1或2所述的干细胞冻存液，其特征在于，所述干细胞冻存液用于间充质干细胞和毛囊DP细胞的冻存。4.一种干细胞冻存方法，其特征在于，采用如权利要求1
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄莹之，范晓聪，刘辉，林洁，梅寒，禹雨，
申请(专利权)人：宁波希诺赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：