【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】获得诱导多能干细胞的方法
[0001]序列表
[0002]本申请包含序列表,所述序列表已经以
ASCII
格式电子递交并且通过引用整体并入本文
。
所述
ASCII
副本创建于
2022
年3月
23
日,名为
025450_WO014_SL.txt
,大小为
62,969
字节
。
[0003]专利技术背景
[0004]细胞疗法为治疗多种疾病和病症提供了巨大的希望
。
在细胞疗法中,自体或同种异体细胞被移植到患者体内,以替换或修复可能由多种医疗病症引起的有缺陷或受损的组织或细胞,所述医疗病症包括遗传性病症
、
癌症
、
神经系统疾病
、
心脏病或眼睛相关的问题
。
多能干细胞对于细胞治疗特别有用,包括从体细胞产生的多能干细胞
。K.Takahashi
和
S.Yamanaka
的开创性工作表明,用表达四种重编程转录因子
Oct3/4、Klf4、Sox2
和
c
‑
Myc
的逆转录病毒载体转导的小鼠成纤维细胞可诱导多能干细胞
(Cell(2006)126:663
‑
76)。
然而,逆转录病毒载体能够导致所述宿主基因组中的插入突变,因此它们不是临床环境中使用的理想载体
。
[0005]因此,已经尝试基于 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
从造血谱系的起始细胞中获得诱导多能干细胞
(iPSC)
群体的方法,所述方法包括
:
将编码
BCL
‑
xL
和选自
OCT
家族蛋白
、KLF
家族蛋白
、MYC
家族蛋白
、SOX
家族蛋白
、LIN28
蛋白
、NANOG
蛋白和
p53
显性负性蛋白的一个或更多个额外重编程因子的甲病毒
RNA
表达构建体引入所述起始细胞,和培养所述起始细胞以允许
BCL
‑
xL
和所述一个或更多个额外重编程因子的表达,从而诱导所述起始细胞及其后代重编程为
iPSC。2.
权利要求1所述的方法,其中所述起始细胞是人来源的造血干细胞
、
红系祖细胞
、
淋巴系祖细胞
、
外周血单核细胞
、T
淋巴细胞
、B
淋巴细胞
、
巨噬细胞
、
单核细胞
、
中性粒细胞
、
嗜酸性粒细胞或树突状细胞
。3.
权利要求2所述的方法,其中所述起始细胞是通过在促红细胞生成素
、
干细胞因子和
IL
‑3的存在下培养外周血单核细胞
(PBMC)
获得的红系祖细胞,任选地培养5至
10
天或6至7天
。4.
权利要求3所述的方法,其中所述
PBMC
在
0.5
‑
5IU/ml
促红细胞生成素
、50
‑
200ng/ml
干细胞因子和1‑
10ng/ml IL
‑3的存在下进行培养
。5.
权利要求1‑5中任一项所述的方法,其中所述
RNA
表达构建体通过电穿孔被引入到所述起始细胞
。6.
权利要求5所述的方法,所述方法包括在电穿孔之前使所述起始细胞与
B18R
蛋白接触
。7.
从权利要求1‑6中任一项所述的方法获得的诱导多能干细胞群体
(iPSC)。8.
从造血谱系的起始细胞获得的诱导多能干细胞
(iPSC)
群体,所述起始细胞转染了编码
BCL
‑
xL
和选自
Oct
家族蛋白
、KLF
家族蛋白
、Myc
家族蛋白
、SOX
家族蛋白
、LIN28
蛋白
、NANOG
蛋白和
p53
显性负性蛋白的一个或更多个额外重编程因子的甲病毒
RNA
表达构建体
。9.
权利要求8所述的
iPSC
,其中所述起始细胞是人来源的造血干细胞
、
红系祖细胞
、
淋巴系祖细胞
、
外周血单核细胞
、T
淋巴细胞
、B
淋巴细胞
、
巨噬细胞
、
单核细胞
、
中性粒细胞
、
嗜酸性粒细胞或树突状细胞
。10.
权利要求9所述的
iPSC
,其中所述起始细胞是通过在
EPO、SCF
和
IL
‑3的存在下培养外周血单核细胞
(PBMC)
获得的红系祖细胞,任选地培养5至
10
天或6至7天
。11.
甲病毒
RNA
表达构建体,其编码
BCL
‑
xL
和选自
OCT
家族蛋白
、KLF
家族蛋白
、MYC
家族蛋白
、SOX
家族蛋白
、LIN28
蛋白
、NANOG
蛋白和
p53
显性负性蛋白的一个或更多个额外重编程因子
。12.DNA
载体,其包含权利要求
11
所述的甲病毒
RNA
表达构建体的编码序列
。13.
宿主细胞,其包含权利要求
11
所述的甲病毒
RNA
表达构建体或权利要求
12
所述的
DNA
载体,任选地,其中所述宿主细胞是人细胞
。14.
权利要求1‑6中任一项所述的方法
、
权利要求7‑
10
中任一项所述的
iPSC、
权利要求
11
所述的甲病毒
RNA
表达构建体
、
权利要求
12
所述的
DNA
载体
、
或权利要求
13
所述的宿主细胞,其中所述甲病毒
RNA
表达构建体是自我复制的并且包含
nsP1、nsP2、nsP3
和
nsP4
基因
。15.
前述权利要求中任一项所述的方法
、iPSC、
甲病毒
RNA
表达构建体
、DNA
载体或宿主细胞,其中所述甲病毒
RNA
表达构建体是委内瑞拉马脑炎病毒
(VEEV)RNA
表达构建体,且包含
VEEV nsP1、nsP2、nsP3
和
nsP4
基因,
任选地,其中所述
VEEV RNA
表达构建体包含来自野生型
VEEV
基因组的一个或多个相应区域的一个或更多个
、
任选地两个或更多个
、
三个或更多个
、
四个或更多个
、
五个或更多个
、
或六个或更多个突变
。16.
前述权利要求中任一项所述的方法
、iPSC、
甲病毒
RNA
表达构建体
、DNA
载体或宿主细胞,其中所述
OCT
家族蛋白是
OCT4
,任选地是人
OCT4
,所述
KLF
家族蛋白是
KLF4
,任选地是人
KLF4
,所述
SOX
...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。