通过SIRP-α衔接体的先天免疫细胞沉默制造技术

本发明专利技术提供了当与具有未修饰的SIRPα衔接功能的亲本细胞相相比较时具有增加的信号调节蛋白α(SIRPα)衔接功能的细胞(SIRPα衔接体细胞)，其在被移植到受试者中时抵抗先天免疫。所述SIRPα衔接体细胞缺乏完整的CD47胞质信号传导功能。在一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为低免疫性细胞。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为经分化的体细胞。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为低免疫性多能(HIP)细胞。在进一步的实施方案中，所述HIP细胞是O血型的(HIPO)，猕猴因子(Rh)阴性的(HIP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过SIRP
‑
α
衔接体的先天免疫细胞沉默
[0001]I.相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.
§
119(e)要求对于2020年12月7日提交的美国临时申请号63/122,465的优先权，所述临时申请通过提及而以其整体合并入本文。
[0003]II.专利

[0004]本专利技术提供了当与具有未修饰的SIRPα衔接(engagement)功能的亲本细胞相相比较时具有增加的信号调节蛋白α(SIRPα；Signal Regulatory Protein Alpha)衔接功能的细胞(SIRPα衔接体(engager)细胞)，其在被移植到受试者中时抵抗先天免疫。在一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为低免疫性细胞。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为经分化的体细胞。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为低免疫性多能(HIP)细胞。在进一步的实施方案中，所述HIP细胞是O血型的(HIPO)，猕猴因子(Rh)阴性的(HIP
‑
)，或者O血型和Rh
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的(HIPO
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)。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞衍生或分化自HIP、HIP
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或HIPO
‑
细胞。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞包含抗体Fc受体以针对抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)进行保护。
[0005]III.专利技术背景
[0006]天然杀伤细胞或NK细胞是对于先天免疫系统来说关键性的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞所起的作用与细胞毒性T细胞在脊椎动物适应性免疫应答中的那种类似。NK细胞提供了对于受病毒感染的细胞和癌症细胞的快速应答。典型地，NK细胞通过下调主要组织相容性复合体(MHC)的靶细胞而变成是激活的，因为MHC是一个主要的抑制性NK细胞信号。NK细胞激活触发细胞因子释放，从而导致裂解或凋亡。NK细胞是独特的，因为它们可以识别受应激的细胞，因为它们上调其他刺激性NK细胞信号并且不需要事先暴露于某些细胞表位。这使得它们是非常快速的应答者。它们也可以快速地对于负载有抗体的细胞作出应答，因为游离抗体Fc的结合是强的刺激性NK细胞信号。NK细胞不需要大的激活来杀伤丢失I类MHC的“自我”标志物而不是一些细胞因子暴露例如IL
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2或IL
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15的细胞。该作用是尤其重要的，因为已经下调或丢失MHC I标志物的有害细胞无法被其他免疫细胞例如T淋巴细胞检测和破坏。
[0007]NK细胞是从生成B和T淋巴细胞的共同的淋巴祖细胞分化出的大的颗粒淋巴细胞。它们在骨髓、淋巴结、脾脏、扁桃体和胸腺中分化和成熟，然后它们从那里进入循环。
[0008]SIRPα是信号调节蛋白(SIRP)家族的成员并且也属于免疫球蛋白超家族。SIRP家族成员是已知在受体酪氨酸激酶偶联的信号传导过程的负调节中所牵涉的受体型跨膜糖蛋白。SIRPα可以被酪氨酸激酶磷酸化。磷酸酪氨酸残基募集包含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶(PTP)并且充当其底物。SIRPα参与由各种生长因子受体介导的信号转导。
[0009]CD47是关于SIRPα的配体。CD47是可以横跨肿瘤类型广泛地过表达的“自我标志物(marker
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of
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self)”蛋白。它作为用于癌症免疫疗法的新的强有力的巨噬细胞免疫检查点而出现。在肿瘤细胞中的CD47发送“不要吃我”信号，其抑制巨噬细胞吞噬作用。这为CD47抑制剂提供了机会和挑战，作为用于血液学癌症和实体肿瘤的单一疗法和联合治疗。这些试剂中的一些目前处于临床试验中。
[0010]CD47的胞质信号传导可以由通过其细胞内结构域(ICD)来介导，虽然迄今还很少鉴定到与CD47胞质尾区直接相互作用的蛋白质(Lamy L.,J Biol Chem.278:23915
‑
21(2003)；Wu A.L.,Mol Cell.4:619
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25(1999))。遍在蛋白相关性早老作用蛋白(ubiquilin)
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1(一种此类结合伙伴)结合Gβγ并且由此将异三聚体G蛋白系缚至CD47(N'Diaye E.N,.J Cell Biol.163:1157
‑
65(2003))。在该情景下，遍在蛋白相关性早老作用蛋白
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1抑制由Gi
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偶联的受体CXCR4传导信号的趋化作用(Sick E.,Glia.59:308
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19(2011))。上述文献通过提及而以其整体合并入本文。
[0011]人原代NK细胞显示出在刺激后表达SIRPα并且与CD47相结合。这降低了其对于表达CD47的细胞的杀伤效力(参见PCT/US20/39220，其通过提及而以其整体合并入本文)。
[0012]自体的诱导型多能干细胞(iPSC)在理论上构成用于基于患者特异性细胞的器官修复策略的无限细胞源。然而，它们的生成具有技术和制备挑战，并且是一个在概念上阻止任何急性治疗样式的漫长过程。基于同种异体的iPSC的疗法或基于胚胎干细胞的疗法从制备角度来说是更容易的，并且允许生成经充分筛选的、经标准化的、高质量的细胞产品。因为多能干细胞可以分化为三个胚层中的任何细胞类型，因此干细胞疗法的潜在应用是广范围的。分化可以离体或在体内进行，通过移植将会在植入位点的器官环境中继续分化和成熟的祖细胞。离体分化允许研究者或临床医生紧密地监测操作程序并且确保在移植之前生成恰当的细胞群体。然而，由于其同种异体来源，此类细胞产品可能经历排斥。
[0013]IV.专利技术概述
[0014]本专利技术提供了当与具有未修饰的SIRPα衔接功能的亲本细胞相相比较时具有增加的信号调节蛋白α(SIRPα)衔接功能的细胞(SIRPα衔接体细胞)，其在被移植到受试者中时抵抗先天免疫。在一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞为低免疫性多能(HIP)细胞。在进一步的实施方案中，所述HIP细胞是O血型的(HIPO)，猕猴因子(Rh)阴性的(HIP
‑
)，或者O血型和Rh
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的(HIPO
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)。在另一些实施方案中，所述SIRPα衔接体细胞衍生或分化自HIP、HIP
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或HIPO
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细胞。
[0015]因此，本专利技术提供了SIRP
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α衔接体细胞，其包含与在免疫细胞上的信号调节蛋白α(SIRPα)这种蛋白质相衔接的在细胞表面上的衔接体分子，其中所述衔接阻止所述衔接体细胞被所述免疫细胞杀伤，其中所述细胞表面分子缺乏有功能的CD47细胞内结构域。
[0016]在本专利技术的一些方面，所述衔接体分子为蛋白质。在另一些方面，所述蛋白质为融合蛋白。在另一些方面，所述融合蛋白包含CD47细胞外结构域(ECD)。在另一些方面，所述CD47 ECD与SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.SIRP
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α衔接体细胞，其包含与在免疫细胞上的信号调节蛋白α(SIRPα)这种蛋白质相衔接的在细胞表面上的衔接体分子，其中所述衔接阻止所述衔接体细胞被所述免疫细胞杀伤，其中所述细胞表面分子缺乏有功能的CD47细胞内结构域。2.权利要求1的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子为蛋白质。3.权利要求2的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述蛋白质为融合蛋白。4.权利要求3的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述融合蛋白包含CD47细胞外结构域(ECD)。5.权利要求4的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述CD47 ECD与SEQ ID NO:3具有至少90％序列同一性。6.权利要求5的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述CD47 ECD包含SEQ ID NO:3的所述序列。7.权利要求1
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5中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子包含免疫球蛋白超家族结构域。8.权利要求7的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述免疫球蛋白超家族结构域与SEQ ID NO:4具有至少90％序列同一性。9.权利要求7的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述免疫球蛋白超家族结构域包含SEQ ID NO:4的序列。10.权利要求1
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3中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子包含与SIRPα相结合的抗体Fab或单链可变片段(scFV)。11.权利要求10的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述Fab或scFV以通过其解离常数(Kd)而测量的亲和力与SIRPα相结合，其中所述Kd在大约10
‑7和10
‑
13
M之间。12.权利要求1
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3中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子包含一个或多个与SIRPα相结合的抗体互补性决定区(CDR)。13.权利要求12的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR与SEQ ID NO:5至12中任一个具有至少90％序列同一性。14.权利要求12的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR包含SEQ ID NO:5至12中任一个的序列。15.权利要求12的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR与SEQ ID NO:5具有至少90％序列同一性。16.权利要求12的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR包含SEQ ID NO:5的序列。17.权利要求12的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR与SEQ ID NO:9具有至少90％序列同一性。18.权利要求12的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述一个或多个CDR包含SEQ ID NO:9的序列。19.权利要求1
‑
18中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子为包含异源跨膜结构域(TMD)的融合蛋白。20.权利要求19的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述TMD包含单个α螺旋、多个α螺旋或卷起的β片层。21.权利要求19的SIRP
‑
α衔接体细胞，其中所述异源TMD选自由下列各项组成的组：CD85f、CD349、CD284、CD261、CD172b、CD277、CD186、CD156c、CD304、CD254、CD263、CD267、
CD337、CD170、CD283、CD133、CD327、CD205、CD232、CD282、CD16b、CD85i、CD85a、CD85c、CD275、CD108、CD358、CD335、CD218b、CD355、CD336、CD160、CD25、CD4、CD8a、CD235a、CD233、CD230、CD90、CD74、CD3d、CD340、CD236、CD61、CD18、CD54、CD29、CD1a、CD5、CD220、CD2、CD66e、CD51、CD141、CD115、CD42b、CD221、CD271、CD55、CD243、CD98、CD10、CD41、CD14、CD45、CD228、CD16a、CD49e、CD126、CD63、CD48、CD7、CD140b、CD3g、CD117、CD28、CD8b、CD37、CD11b、CD107a、CD331、CD222、CD20、CD79a、CD64、CD32、CD143、CD324、CD42c、CD107b、CD56、CD102、CD49d、CD66a、CD142、CD59、CD62L、CD121a、CD122、CD13、CD155、CD119、CD19、CD116、CD46、CD1e、CD1d、CD227、CD44、CD62P、CD104、CD43、CD140a、CD31、CD152、CD326、CD62E、CD36、CD127、CD49b、CD105、CD35、CD223、CD138、CD325、CD58、CD106、CD53、CD120a、CD224、CD21、CD33、CD22、CD120b、CD11a、CD11c、CD363、CD73、CD88、CD204、CD332、CD9、CD203a、CD334、CD333、CD206、CD49f、CD238、CD252、CD89、CD124、CD181、CD182、CD24、CD95、CD40、CD49c、CD159a、CD159c、CD314、CD27、CD123、CD26、CD82、CD121b、CD34、CD38、CD30、CD1b、CD1c、CD154、CD6、CD52、CD132、CD32、CD66b、CD171、CD191、CD197、CD185、CD131、CD50、CD70、CD153、CD144、CD80、CD362、CD68、CD361、CD147、CD309、CD135、CD292、CD103、CD130、CD42d、CD66d、CD66c、CD96、CD110、CD79b、CD200、CD192、CD231、CD86、CD212、CD118、CD146、CD134、CD158a、CD158b1、CD158b2、CD158e、CD158k、CD158j、CD158i、CD178、CD295、CD151、CD97、CD183、CD39、CD239、CD193、CD194、CD195、CD196、CDw198、CDw199、CD296、CD298、CD49a、CD322、CD85g、CD184、CD172a、CD156a、CD339、CD156b、CD213a1、CD129、CD83、CD125、CD241、CD269、CD202b、CD87、CD164、CD136、CD137、CD249、CD69、CD91、CDw210b、CD167a、CD300c、CD47、CD157、CD317、CD148、CD161、CD215、CD150、CD11d、CD218a、CD210、CD166、CD162、CD213a2、CD242、CD158g、CD158h、CD279、CD111、CD281、CD226、CD234、CD167b、CD300e、CD276、CD305、CD300g、CD300d、CD109、CD272、CD163、CD302、CD158f1、CD85h、CD85d、CD177、CD158z、CD158f2、CD85j、CD300f、CD92、CD351、CD112、CD100、CD270、CD101、CD297、CD316、CD352、CD217、CD307b、CD307a、CD307c、CD307d、CD307e、CD114、CD180、CD158d、CD273、CD290、CD244、CD169、CD299、CD318、CD360、CD229、CD248、CD354、CD320、CD93、CD319、CD113、CD163b、CD289、CD288、CD329、CD274、CD353、CD172g、CD315、CD280、CD264、CD300a、CD312、CD84、CD344、CD350、CD246、CD201、CD338、CD208、CD257、CD328、CD286、CD357、CD294、CD321、CD265、CD278、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、CD51、CD41、CD29、CD18、CD61、CD104和PDGF。22.权利要求19的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述TMD包含与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性的序列。23.权利要求19的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述TMD包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:27的序列。24.权利要求1
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23中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子不具有细胞内结构域(ICD)。25.权利要求1
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23中任一项的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子具有来自CD16、CD32、CD64、CD8、CD3、CD28或CD137的细胞内结构域。26.权利要求1的SIRP
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α衔接体细胞，其中所述衔接体分子包含ICD，所述ICD包含由于在SEQ ID NO:15序列中的一个或多个突变而产生的无功能的CD47 ICD。
27.权利要求1的SIRP
...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：