一种抗菌肽的无细胞合成体系制造技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽的无细胞合成体系

【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽的无细胞合成体系、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种抗菌肽的无细胞合成体系
、
试剂盒及其应用
。

技术介绍

[0002]抗菌肽是一种具有杀菌和抗病毒特性的蛋白质分子，在制作抗菌剂
、
药物和保健品等方面具有广泛的应用前景
。
[0003]抗菌肽的合成主要依赖于化学合成法和天然产物法提取
。
化学合成法适合于合成较小的抗菌肽，但仍存在有毒中间副产物
、
合成效率低
、
抗菌肽的活性差
、
合成成本高等问题
。
相关技术中多通过天然产物提取法来生产抗菌肽
(
如乳酸链球菌的乳酸链球菌素
Nisin
等
)
，这种方法具有产量高
、
纯化成本低等优势，但是生产得到的抗菌肽往往存在抗菌活性弱
、
抗菌活性单一等问题
。
并且，长链抗菌肽具有广谱性好
、
抑菌效率高的优势，但是难以用传统的化学和生物技术进行大量制备，限制了其工业化应用
。
[0004]因此，需要提供一种合成效率高
、
安全性高
、
成本低的抗菌肽生产方法，且生产的抗菌肽稳定性好
、
活性高
。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一
。<br/>为此，本专利技术提出一种抗菌肽的无细胞合成体系，合成效率高
、
安全性高
、
成本低，且合成的抗菌肽稳定性好
、
活性高
。
[0006]本专利技术还提供一种试剂盒
。
[0007]本专利技术还提供一种抗菌肽的生产方法
。
[0008]本专利技术还提供上述无细胞合成体系或试剂盒在生产抗菌肽中的应用
。
[0009]根据本专利技术的第一方面实施例的一种抗菌肽的无细胞合成体系，包括：细胞提取物
、
核糖核苷酸混合物
、
氨基酸混合物
、
缓冲剂
、
盐离子
、
能量物质
、RNA
聚合酶
、
模板；
[0010]所述模板用于编码所述抗菌肽；
[0011]所述盐离子包括镁离子
。
[0012]根据本专利技术实施例的无细胞合成体系，至少具有如下有益效果：
[0013]实施例的无细胞合成体系合成效率高
、
安全性高
、
成本低
。
相比于化学合成法或天然产物提取法，该无细胞合成体系合成的抗菌肽的抗菌性能够提高
30
％～
60
％，稳定性能够提高
80
％～
160
％
。
该无细胞合成体系在抗菌肽
(
尤其是长链抗菌肽
)
的生产上具有很好的应用前景
。
[0014]根据本专利技术的一些实施例，所述细胞提取物包括大肠杆菌提取物
、
枯草芽孢杆菌
、
酵母提取物中的至少一种
。
[0015]根据本专利技术的一些实施例，所述无细胞合成体系中，所述细胞提取物的浓度为
30w/v
％～
70w/v
％
。
进一步可以为
40w/v
％～
60w/v
％
。
例如：可以为
40w/v
％
、42w/v
％
、44w/
v
％
、46w/v
％
、48w/v
％
、50w/v
％
、52w/v
％
、54w/v
％
、56w/v
％
、58w/v
％或
60w/v
％
。
[0016]根据本专利技术的一些实施例，所述核糖核苷酸混合物为合成
RNA
的底物
。
[0017]根据本专利技术的一些实施例，所述无细胞合成体系中，所述核糖核苷酸混合物的浓度为
1mM
～
3mM。
例如：可以为
1mM、1.3mM、1.5mM、1.7mM、2mM、2.2mM、2.5mM、2.7mM
或
3mM。
[0018]根据本专利技术的一些实施例，所述氨基酸混合物为合成所述抗菌肽的底物
。
所述氨基酸混合物包括天然氨基酸和非天然氨基酸中的至少一种
。
[0019]根据本专利技术的一些实施例，所述天然氨基酸包括丙氨酸
、
缬氨酸
、
亮氨酸
、
异亮氨酸
、
苯丙氨酸
、
色氨酸
、
丝氨酸
、
酪氨酸
、
半胱氨酸
、
甲硫氨酸
、
天冬酰胺
、
谷氨酰胺
、
苏氨酸
、
天冬氨酸
、
谷氨酸
、
赖氨酸
、
精氨酸
、
组氨酸
、
甘氨酸和脯氨酸中的至少一种
。
[0020]根据本专利技术的一些实施例，所述无细胞合成体系中，所述氨基酸混合物中各氨基酸的浓度为
0.05mM
～
0.3mM。
进一步可以为
0.05mM
～
0.2mM。
例如：可以为
0.05mM、0.07mM、0.1mM、0.12mM、0.14mM、0.16mM、0.18mM
或
0.2mM。
[0021]根据本专利技术的一些实施例，所述缓冲剂包括4‑
羟乙基哌嗪乙磺酸
(HEPES)、
三羟甲基氨基甲烷
(Tris)、
磷酸盐
(PBS)
中的至少一种
。
[0022]根据本专利技术的一些实施例，所述无细胞合成体系的
pH
为
7.0
～
8.5。
例如：可以为
7.0、7.2、7.5、7.8、8.0、8.2
或
8.5。
[0023]根据本专利技术的一些实施例，所述无细胞合成体系中，所述缓冲剂的浓度为
10mM
～
50mM。
进一步可以为
10mM
～
30mM。
例如：可以为
10mM、12mM、14mM、16mM、18mM、20mM、22mM、24mM、26本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗菌肽的无细胞合成体系，其特征在于，包括：细胞提取物
、
核糖核苷酸混合物
、
氨基酸混合物
、
缓冲剂
、
盐离子
、
能量物质
、RNA
聚合酶
、
模板；所述模板可用于编码所述抗菌肽；所述盐离子包括镁离子
。2.
根据权利要求1所述的无细胞合成体系，其特征在于，所述无细胞合成体系还可以包括
(1)
～
(3)
中的至少一种；
(1)
乙酸乙酯；
(2)
酰基化酶；
(3)
编码酰基化酶的
DNA
分子
。3.
根据权利要求2所述的无细胞合成体系，其特征在于，所述无细胞合成体系中，若有，所述乙酸乙酯的浓度为
0v/v
％～
0.1v/v
％；以及任选地，若有，所述酰基化酶的浓度为
10mg/L
～
100mg/L
；以及任选地，若有，所述编码酰基化酶的
DNA
分子的浓度为
0.1
～
1mg/L。4.
根据权利要求1所述的无细胞合成体系，其特征在于，所述无细胞合成体系中，所述细胞提取物包括大肠杆菌提取物
、
枯草芽孢杆菌
、
酵母提取物中的至少一种；和
/
或所述缓冲剂包括4‑
羟乙基哌嗪乙磺酸
(HEPES)、
三羟甲基氨基甲烷
(Tris)、
磷酸盐
(PBS)
中的至少一种；和
/
或所述镁离子的来源包括醋酸镁
、
氯化镁
、
磷酸镁
、
硫酸镁
、
柠檬酸镁
、
硝酸镁
、
草酸镁中的至少一种；和
/
或所述能量物质包括糖类物质
。5.
根据权利要求1所述的无细胞合成体系，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志乾，刘丽花，江翱，吴奕瑞，吴嵩，许波，陈西朋，何茜，何景涛，
申请(专利权)人：态创生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：