一种质粒载体体系及制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体涉及一种质粒载体体系及

【技术实现步骤摘要】
一种质粒载体体系及MS2噬菌体类似颗粒的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及质粒载体及噬菌体类似颗粒的制备方法
。

技术介绍

[0002]MS2
噬菌体类似颗粒
(MS2
‑
VLP)
是一种由
180
个拷贝的单个外壳蛋白
(CP)
和一个成熟蛋白自组装而成的二十面体的病毒样颗粒
。
成熟酶蛋白和衣壳蛋白能与外源
ssRNA
中包装序列
(
特定茎环结构
)
相互作用，自发包装形成不具有侵染活性的病毒颗粒
MS2
‑
VLP。MS2
‑
VLP
应用广泛，这些颗粒能够模拟
ssRNA
病毒，在疫苗
、
药物传递系统和免疫活性多肽显示系统或纳米机器等多个领域，可以作为分子检测
、
过程控制以及定量分析的参照物
。
[0003]但
MS2
‑
VLP
纯化步骤比较繁琐沉淀，往往需要沉淀，过滤，或超高速离心
。
为简化
MS2
‑
VLP
的纯化步骤，之前有研究报道在
MS2
噬菌体
CP
蛋白的融合
His Tag
纯化标签，或在
CP
蛋白二聚体之间融合
His Tag
纯化标签，利用离子亲和层析方法一步法可得到比较纯的
MS2
‑
VLP。
本专利技术基于
MS2
‑
VLP
的另一成分成熟蛋白，也就是在成熟蛋白的氨基端融合纯化标签，以此简化
MS2
‑
VLP
的纯化步骤
。

技术实现思路

[0004]本专利技术开发一种质粒载体体系，通过该质粒载体体系可生产成熟蛋白包含纯化标签的
MS2
‑
VLP
，便于快速简洁纯化
MS2
‑
VLP。
[0005]本专利技术提供的质粒载体体系的特征在于：该质粒载体体系含有至少一个质粒载体，该质粒体系含有
MS2
噬菌体
CP
基因
、
包装序列
、
重组成熟蛋白基因，所述重组成熟蛋白基因包含成熟蛋白基因和纯化标签，所述成熟蛋白基因编码的蛋白如
SEQ ID NO.1
所示，所述成熟蛋白的氨基端包含纯化标签
。
[0006]具体的，所述
MS2
噬菌体
CP
基因编码的蛋白序列至少包含如
SEQ ID NO.2
所示的序列，其5’
端有启动子
。
[0007]具体的，所述包装序列如
SEQ ID NO.3
，
SEQ ID NO.4
所示
。
[0008]具体的，重组成熟蛋白的纯化标签为8×
His
标签，如
SEQ ID NO.5
所示
。
[0009]具体的，成熟蛋白基因与纯化标签间含有
Linker
序列，所述
Linker
序列的长度超过5个氨基酸
。
[0010]优选的，上述
Linker
序列长度为8‑
10
个氨基酸，以甘氨酸和丝氨酸为主要成分
。
[0011]本专利技术还提供
MS2
噬菌体类似颗粒的制备方法，具体步骤如下：
[0012](1)
采用本专利技术提供的质粒载体体系转入宿主中表达；
[0013](2)
离心诱导表达后的菌液，得到菌体，破碎菌体，释放宿主内蛋白，离心取沉淀获得上清；
[0014](3)
利用纯化标签，采用离子亲和层析方法纯化得到
MS2
噬菌体样颗粒
。
[0015]有益效果：
[0016]通过本专利技术提供的质粒载体体系可以成功制备
MS2
噬菌体类似颗粒，并可利用纯化标签快速纯化出来，可应用于
MS2
噬菌体亚单位疫苗的制备
。
附图说明
[0017]图1为本专利技术一具体实施例中重组成熟蛋白示意图；
[0018]图2为
pcdfbad
‑
3A8His
生产的
MS2
‑
VLP
透射电镜图；
[0019]图3为
pcdfbad
‑
3A8His
生产的
MS2
‑
VLP
的
SDS
‑
PAGE
图
。
[0020]图4为
pcdfbad
‑
3A
‑
P1
和
pET
‑
MS
‑
P2
生产的
MS2
‑
VLP
透射电镜图；
[0021]图5为
pcdfbad
‑
3A
‑
P1
和
pET
‑
MS
‑
P2
生产的
MS2
‑
VLP
透射电镜图；
具体实施方式
[0022]为使本专利技术的目的
、
特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明
。
在下面的描述中阐述具体细节以便于充分理解本专利技术，本领域技术人员可以在不违背本专利技术构思的情况下做类似改进，因此本专利技术的保护范围不受下面公开的具体实施例的限制
。
[0023]具体实施例中采用的材料来源：
pET
系列质粒
(
购自
Invitregen
公司
)。
载体设计由云舟生物公司完成，基因序列合成由专利技术人自行设计并委托上海生物生工有限公司合成
。
所有的试剂如
IPTG
和
Bl21(DE3)
，
LB
培养基
、
感受态细胞购自
Takara
大连生物有限公司
。
[0024]实例1：单质粒体系生产和纯化
MS2
‑
VLP。
[0025](
一
)
单质粒体系将
MS2
噬菌体2个
CP
基因的融合
、
含有包装序列
、
重组成熟蛋白基因
。
设计并合成载体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种质粒载体体系，其特征在于：该质粒载体体系含有至少一个质粒载体，该质粒体系含有
MS2
噬菌体
CP
基因
、
包装序列
、
重组成熟蛋白基因；所述重组成熟蛋白基因包含成熟蛋白基因和纯化标签，所述成熟蛋白基因编码的蛋白如
SEQ ID NO.1
所示，所述成熟蛋白的氨基端包含纯化标签
。2.
如权利要求1所述的质粒载体体系，其特征在于：所述质粒载体体系含单质粒，序列如
SEQ ID NO.6
所示
。3.
如权利要求1所述的质粒载体体系，其特征在于：所述质粒载体体系含两个质粒，序列如
SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8
所示
。4.
如权利要求1所述的质粒载体体系，其特征在于：所述
MS2
噬菌体
CP
基因编码的蛋白序列至少包含如
SEQ ID NO.2
所示的序列，其5’
端有启动子
。5.
如权利要求1所述的质粒载体体系，其特征在于：所述包装序列如
SEQ ID NO.3
，
SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳永长，郭毅，罗琳艺，火兴军，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：