【技术实现步骤摘要】
一种基于人工蛋白质笼的光响应可逆蛋白组装体系及其构建方法
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于人工蛋白质笼的光响应可逆蛋白组装体系及其在胞外与胞内环境中的构建方法
。
技术介绍
[0002]蛋白质是生命活动的载体和功能的执行者，自然界细胞通过蛋白质与蛋白质或蛋白质与其他生物分子之间的动态偶联来形成具有一定结构及功能的细胞微结构，如细胞区室
、
多酶复合物以及细胞器等等，从而划分细胞功能，调节代谢活动，维持细胞秩序，对细胞各项生命活动进行精准的调控
。
[0003]受自然的启发，人们尝试开发出各种各样的人工蛋白质组装体系，用以搭载抗原抗体
、
荧光探针
、
多酶分子等等，以实现不同的功能
。
例如：
Wei Kang
等人
(Kang,W.,Ma,T.,Liu,M.et al.Modular enzyme assembly for enhanced cascade biocatalysis and metabolic flux.Nat Commun,2019,10,4248.)
利用量子点作为支架，通过金属亲和力高效组装维生素
K12
合成途径中的顺序酶，从而使相关的反应速率提高了一倍左右；专利
CN202210785290.X
公开了一种在细胞工厂中利用蛋白质笼组装参与级联反应的多酶分子以构建人工细胞器的方法；专利
CN2022109940
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种基于人工蛋白质笼的光响应可逆蛋白组装体系的构建方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
(1)
将包含有来源于大肠杆菌
SsrA
短肽序列的
LOV2
结构域的基因片段与蛋白质笼
Mi3
亚基的基因片段通过柔性连接序列进行连接，得到可表达
LOV2
‑
Mi3
的重组基因片段，插入到质粒载体中，构建可表达
Mi3
Opto
蛋白质笼的质粒，转化入宿主细胞中，培养并诱导表达，分离纯化获得蛋白质笼
Mi3
Opto
；
(2)
将
SspB
结构域的基因片段与目的蛋白的基因片段通过柔性连接序列进行连接，得到可表达带有
SspB
结构域的目的蛋白分子的重组基因片段，插入到质粒载体中，构建可表达带有
SspB
结构域的目的蛋白分子的质粒，转化入宿主细胞中，培养并诱导表达，分离纯化获得带有
SspB
结构域的目的蛋白分子；
(3)
将步骤
(1)
得到的蛋白质笼
Mi3
Opto
与步骤
(2)
得到的带有
SspB
结构域的目的蛋白分子混合均匀，在蓝光下照射一段时间，通过尺寸排阻色谱
(SEC)
分离获得光响应可逆蛋白组装体系
。2.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤
(1)
中所述包含有来源于大肠杆菌
SsrA
短肽序列的
LOV2
结构域位于蛋白质笼
Mi3
亚基序列的
N
末端，所述蛋白质笼
Mi3
亚基的氨基酸序列为
SEQ ID NO:1
中第
165
‑
369
位，包含有来源于大肠杆菌
SsrA
短肽序列的
LOV2
结构域的氨基酸序列为
SEQ ID NO:1
中第5‑
152
位；所述的柔性连接序列编码的氨基酸序列为
(GGS)
n
或
(GGGGS)
n
，
n
＝1‑
10。3.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤
(1)
中所述的宿主细胞包括大肠杆菌
、
酵母菌和动物细胞；所述的质粒载体为带有
T7
启动子的载体，所述蛋白质笼
Mi3
Opto
的基因插入在质粒载体的
T7
启动子之后
。4.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤
(2)
中所述目的蛋白包括荧光蛋白
mCherry
和
MBP
，其中荧光蛋白
mCherry
的氨基酸序列为
SEQ ID NO:2
中第
21
‑
255
位，
MBP
氨基酸序列为
SEQ ID NO:3
中第
21
‑
386
位；所述
SspB
结构域能够特异性结合包含来源于大肠杆菌
...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛闯，马骁，康巍，刘春雪，
申请(专利权)人：大连理工大学宁波研究院，
类型：发明
国别省市：
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