一种纳米微球免疫比浊法检测α１－微球蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种测定血清中的α１－微球蛋白的试剂盒。所要解决的技术问题是提供的试剂应具有样本无需稀释、操作简单、准确度高、重复性好，适用于各种类型的全自动生化分析仪的特点。技术方案是：一种纳米微球免疫比浊法检测α１－微球蛋白的试剂盒，包括：ａ、试剂Ｒ１：缓冲液、稳定剂、电解质、表面活性剂以及适量防腐剂；ｂ、试剂Ｒ２：缓冲液、抗人α１－ＭＧ抗体多克隆抗体和纳米微球、适量防腐剂；ｃ、参考校准品：缓冲液、稳定剂、适量防腐剂以及根据浓度需要确定量的重组α１－微球蛋白纯品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于测定血清成份的试剂盒，特别是测定血清中的α 1-微球蛋 白(al-MG)的试剂盒，可广泛应用在医学及生物化学

技术介绍
α ρ-微球蛋白(a fMG)主要在肝脏和淋巴细胞组织中合成，广泛分布于体液及 淋巴细胞膜表面的一种糖蛋白，分子质量27KD，在血液中Ci1-微球蛋白有游离和与IgA结 合等等种形式；正常情况下，血液中游离α i-微球蛋白可自由通过肾小球滤过，并在近曲小 管被重吸收，因此尿中含量极微。而结合IgAW Ci1-微球蛋白则不能通过肾小球滤过。由 于Ci1-微球蛋白的产生量恒定，较少受肾外因素影响，因此测定Ci1-微球蛋白浓度对肾功 能损伤具有早期诊断意义。已知测定α r微球蛋白(α rMG)的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分 析法、酶联免疫法(ELISA法)，这些方法存在着操作繁琐，需要特殊的设备，样本需要预处 理，不能进行批量样本分析和不能直接上全自动生化分析仪检测等缺点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述
技术介绍
的不足，提供一种α工-微球蛋白 检测试剂的改进，所提供的试剂应具有样本无需稀释、操作简单、准确度高、重复性好，适用 于各种类型的全自动生化分析仪的特点。本专利技术提供的技术方案是一种纳米微球免疫比浊法检测α 1-微球蛋白的试剂盒，包括试剂R1、试剂R2以及 参考校准品，其中a、试剂R1 —种使样本中α「微球蛋白抗原位点充分暴露，有利于与抗α工-微球 蛋白抗体试剂充分结合的α f微球蛋白溶液，包括5-200mmol/L缓冲液、0. 5-5mmol/L的稳 定剂、50-200mmol/L电解质、0. l-4mmol/L表面活性剂以及适量防腐剂，其余为纯化水；b、试剂R2 —种结合有抗人α 1_微球蛋白抗体的纳米微球溶液，包括5-200mmol/ L的缓冲液、重量比例0.的抗人Ci1-MG抗体多克隆抗体和纳米微球、并加入适量防 腐剂，纳米微球直径为50-150nm ；C、参考校准品一种用来与样本比较，进行结果计算的α 1-微球蛋白溶液，包括 100-200mmol/L pH7. 0的缓冲液、171-180mmol/L的稳定剂、适量防腐剂以及根据浓度需要 确定量的重组α 1-微球蛋白纯品，其余为纯化水。CI1-微球蛋白参考校准品的浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时用生 理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品；也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准 品；这里没有特别的限制，只要制得的Ci1-MG参考校准品能与样本比较，能够测定样本中 O1-MG的含量即可。所述α r微球蛋白试剂溶液中还加入反应促进剂PEG-6000，浓度为3-lOmmol/L。所述结合有抗人α 1-微球蛋白抗体的纳米微球溶液的制备方法是用缓冲液在 室温下稀释重量比例为1 1的抗人CI1-MG抗体多克隆抗体和纳米微球，将两者混勻后室 温振荡吸附2小时，加入含0. 1 % BSA的缓冲液封闭1小时，离心去上清，再用缓冲液稀释至 浓度为0. 3%，并加入适当防腐剂。抗人α rMG抗体多克隆抗体和纳米微球包括羊抗人α rMG抗体多克隆抗体或兔 抗人Ci1-MG抗体多克隆抗体或鼠抗人Ci1-MG抗体多克隆抗体。所述稳定剂是乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白以及氯化钠中的一种或多种的混I=I O所述缓冲液是三羟甲基氨基甲烷或CAPS0。所述防腐剂是广谱杀菌剂。1、羊抗人Ci1-MG抗体多克隆抗体或兔抗人Ci1-MG抗体多克隆抗体或鼠抗人 α「MG抗体多克隆抗体，可外购或由浙江伊利康生物技术研发中心按常规方法制备；该抗 体仅与人α工-微球蛋白反应，与其它抗原无免疫交叉反应，效价能够满足本试剂要求。2、纳米微球，市场上有许多商品化的纳米微球可供选择，包括美国Sigma公司、德 国默克公司、日本UNF公司；可选择多种直径的纳米微球，本专利技术采用了直径为80 120nm 的微球，相应的试剂检测主波长为600nm。3、重组Ci1-微球蛋白纯品(外购，或由浙江伊利康生物技术研发中心制备)，用于 制备本试剂所需参考校准品。其余生化原料均可外购。试剂R2中纳米微球与抗人α 1_微球蛋白抗体的结合可以采用物理吸附法或化学 交联法制备，优选物理吸附法。所述参考校准品中添加的重组人α 1-微球蛋白纯品，采用人血清或动物血清或 其它类似血清基质的液体。本专利技术的检测原理是利用抗原抗体反应，试剂Rl作为样本稀释液加入，解除样 本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露，然后加入试剂R2(抗人Ci1-MG抗 体的纳米微球溶液)；α rMG抗体的纳米微球与样本中相应的α「MG抗原反应，形成不溶性 的抗原_抗体复合物，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的Q1-MG含量成正比；在规定 波长下测定该不溶性抗原_抗体复合物的吸光度值，与已知浓度的α rMG参考校准品进行 比较，则可计算出样本中Q1--MG的含量。本专利技术提供的试剂操作简单、样本不用预稀释，采用重组人α工-微球蛋白纯品的 人血清或其它类似血清基质的Q1-微球蛋白参考校准品与样本比较，进行结果计算。本试 剂为液体双试剂，具有特异性好，灵敏度高，准确性好及抗干扰能力强等优点，可用于检测 体液中α工-微球蛋白的浓度，适用于临床全自动生化分析仪。附图说明图1是用实施例1进行检测所得α rMG的测定值与通过放射免疫分析法所得的 α rMG测得值的相互关系示意图。图2是用实施例2进行检测所得α rMG的测定值与通过放射免疫分析法所得的α rMG测得值的相互关系示意图。图3是用实施例3进行检测所得α rMG的测定值与通过放射免疫分析法所得的α rMG测得值的相互关系示意图。具体实施例方式α rMG检测试剂的制备实施例实施例一1、Ci1-MG 溶液(试剂 R1)三羟甲基氨基甲烷(缓冲液)50mmol/L吐温-20 (表面活性剂)0. 5mmol/LNaCL (电解质)IOOmmol/LPEG-6000 (反应促进剂)4mmol/L广谱杀菌剂(防腐剂)3mmol/L乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)5mmol/L其余为纯化水2、抗人α rMG抗体溶液(试剂R2)用lOOmmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH 7. 0)在室温下稀释羊抗人α I-MG抗 体多克隆抗体和150nm纳米微球(抗体和微球的重量比例为1 1)，将两者混勻后室温振 荡吸附2小时(即本领域技术人员已公知的物理吸附法)，加入含0. 1%BSA的三羟甲基氨 基四烷缓冲液封闭1小时，离心去上清，用lOOmmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释至浓度 为0. 3%，并加入防腐剂；获得α 1-微球蛋白检测试剂盒试剂(R2)。 3、血清型α rMG溶液(参考校准品)CAPSO (缓冲液)100mmol/L广谱杀菌剂(防腐剂)2mmol/L乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)2mmol/L牛血清白蛋白 (稳定剂)3mmol/L氯化钠(稳定剂)166mmol/L其余为纯化水按照需要的α rMG参考校准品浓度将相应的重组α r微球蛋白纯品90mg/L加入 上述缓冲液中，制备得90mg/L浓度的α r微球蛋白参考校准品。采用本实施例试剂进行具体检测，所得α rMG的测定值与通过放射免疫分析法 所得的α rMG测得值进行比较(参本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米微球免疫比浊法检测α１－微球蛋白的试剂盒，包括试剂Ｒ↓［１］、试剂Ｒ↓［２］以及参考校准品，其中：ａ、试剂Ｒ↓［１］：一种使样本中α↓［１］－微球蛋白抗原位点充分暴露，有利于与抗α↓［１］－微球蛋白抗体试剂充分结合的α↓［１］－微球蛋白溶液，包括５－２００ｍｍｏｌ／Ｌ缓冲液、０．５－５ｍｍｏｌ／Ｌ的稳定剂、５０－２００ｍｍｏｌ／Ｌ电解质、０．１－４ｍｍｏｌ／Ｌ表面活性剂以及适量防腐剂，其余为纯化水；ｂ、试剂Ｒ２：一种结合有抗人α１－微球蛋白抗体的纳米微球溶液，包括５－２００ｍｍｏｌ／Ｌ的缓冲液、重量比例０．１％－５％的抗人α↓［１］－ＭＧ抗体多克隆抗体和纳米微球、并加入适量防腐剂，纳米微球直径为５０－１５０ｎｍ；ｃ、参考校准品：一种用来与样本比较，进行结果计算的α１－微球蛋白溶液，包括：１００－２００ｍｍｏｌ／ＬｐＨ７．０的缓冲液、１７１－１８０ｍｍｏｌ／Ｌ的稳定剂、适量防腐剂以及根据浓度需要确定量的重组α１－微球蛋白纯品，其余为纯化水。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王贤理，蒙凯，蔡其浩，
申请(专利权)人：浙江伊利康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]