一种从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其步骤是：（１）将鱼胶原蛋白溶于水，制成胶原蛋白溶液，溶液ｐＨ值为６．０－９．０；（２）将胶原蛋白溶液上亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到饱和；（３）使用淋洗剂将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；（４）使用洗脱剂将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱出，洗脱过程的温度控制在１５－３７℃；（５）利用凝胶过滤层析法或膜超滤法将得到的洗脱液浓缩，得到浓缩液；（６）将浓缩液冷冻干燥，所得白色粉末即鱼胶原蛋白中的功能多肽。本发明专利技术中利用纤维连接蛋白作为配基，采用亲和层析的方法分离鱼胶原蛋白中的部分多肽，步骤合理、方法简单，具有分辨率高和特征性强等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种以鱼胶原蛋白为原料分离功能多肽的方法。
技术介绍
我们知道，鱼胶原蛋白是指以鱼鳞或鱼皮为原料采用热处理、酸/碱处理、酶法降 解或结合多种方式降解获得的混合物，其主要成份是鱼鳞或鱼皮中胶原降解后形成的分子 量不均一的多肽类物质。鱼胶原蛋白可作为功能食品或保健品，具有提高人体免疫力、促进 钙的吸收、改善血液微循环以及补充氨基酸营养成份等功能，从鱼胶原蛋白中有效识别与 分离不同功能的多肽组份是近年来鱼胶原蛋白产品开发中的盲点。 传统的鱼胶原蛋白产品开发的重点主要集中于鱼胶原蛋白制备工艺及其对产品 分子量范围及性能的影响。韩国Hee-GukByun利用离子交换色谱和凝胶过滤色谱的方 法从胶原蛋白中分离出具有抑制血管紧张素转化酶活性的多肽(ProcessBiochemistry， 2001,36 :1155-1162);日本MaruyamaS从胶原蛋白中分离出可抑制血小板活性的多肽 (Biochimi. Biophysi. Acta ;1993， 1164， 215-223);韩国KimSK采用凝胶过滤色谱结合离 子交换和反相色谱的方法从鱼皮明胶中分离出具有抗氧化功能的组份(JAgricFoodChem， 2001,49(4) :1984-9)。传统的鱼胶原蛋白中不同多肽的分离方法主要基于分子量范围、带 电荷状态等性质进行分离，存在分辨率低和特征性不强等缺点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种步骤合理、具有分辨率高和特征性强的基于亲和层析的从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法。 本专利技术解决上述技术问题采用的技术方案是一种从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其步骤是(1) 将鱼胶原蛋白溶于水，制成胶原蛋白溶液，并将该溶液的pH值调至6. 0-9. 0 ;(2) 将胶原蛋白溶液上亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到饱和；(3) 使用淋洗剂将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；(4) 使用洗脱剂将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱出，洗脱过程的温度可控制在 15 — 37°C ;(5) 利用凝胶过滤层析法或膜超滤的方法将得到的洗脱液浓縮，得到浓縮液；(6)将浓縮液冷冻干燥，所得白色粉末即鱼胶原蛋白中的功能多肽。 本专利技术基于亲和层析的从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法中，如果待分离的胶 原蛋白原料是水溶液，则省去(l)所述的胶原蛋白溶解过程，直接将胶原蛋白溶液的pH值 调制6. 0-9.0。 本专利技术所述的鱼胶原蛋白可以是鱼鳞胶原蛋白或鱼皮胶原蛋白。 本专利技术所述的亲和层析柱中层析介质的配基可以是纤维连接蛋白。 本专利技术所述的洗脱剂可以是含2 — 8mol/L脲、pH值为3. 0 — 8. 0的缓冲液，也可以是含5 — 50%乙醇的水溶液或5 — 50%乙腈的水溶液。如果采用5 — 50%乙醇的水溶液或5 — 50%乙腈的水溶液作为洗脱剂，则省去(5)所述的利用凝胶过滤层析法或膜超滤的方法将得到的洗脱液浓縮，得到浓縮过程，洗脱液直接进行冷冻干燥。 本专利技术中纤维连接蛋白可与胶原蛋白降解物中的许多多肽特异性结合，利用纤维连接蛋白等作为配基，采用亲和层析的方法分离鱼胶原蛋白中的部分多肽，对照现有技术，本专利技术步骤合理、方法简单，具有分辨率高和特征性强等优点。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步描述。 实施例1 :，其以2mg/ml的鱼鳞胶原蛋白水溶液为原 料，从该鱼鳞胶原蛋白中分离功能多肽的方法步骤是(1) 将原料鱼鳞胶原蛋白水溶液的PH调至7. 0 ;(2) 将鱼鳞胶原蛋白水溶液上样至亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到 饱和，也就是说直至透过液中检测出胶原蛋白。亲和层析柱配基人血浆纤维连接蛋白，柱 填料体积40ml，填料粒径60 — 120微米；(3) 使用20ml0. 2mol/L碳酸氢铵作为淋洗剂淋洗层析柱，流速lml/min，将未与层析介 质配基结合的多肽淋洗出；(4) 使用20X乙醇溶液在3(TC下洗涤层析柱，将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱 出，流速lml/min，收集前30min组份;(5) 将收集到的组份直接冷冻干燥，获得的白色粉末即为鱼鳞胶原蛋白中的功能多肽。 本专利技术中利用纤维连接蛋白等作为配基，采用亲和层析的方法分离鱼胶原蛋白中 的部分多肽，步骤合理、方法简单，具有分辨率高和特征性强等优点。 实施例2:，其步骤是(1) 其以鱼皮胶原蛋白水溶液为原料，将原料鱼皮胶原蛋白水溶液的pH调制为7. O，浓 度控制在3-10mg/mL ;(2) 将鱼鳞胶原蛋白水溶液上样至亲和层析柱，至透过液中检测出胶原蛋白。亲和层析 柱配基为人血浆纤维连接蛋白，柱填料体积40ml，填料粒径60 — 120微米；(3) 使用20ml0. 2mol/L碳酸氢铵作为淋洗剂淋洗层析柱，流速lml/min，将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；(4)使用8M脲素溶液(含0. 1NH4HC03)在2(TC下洗涤层析柱，将与亲和层析介质配基 结合的多肽洗脱出，流速lml/min，收集前35min组份；(5 )将收集到的洗脱液使用凝胶过滤层析柱(S印hadexGlO )除去溶液中的脲素，得到洗 脱液浓縮；(6)脱盐后的多肽直接冷冻干燥，获得的白色粉末即为鱼鳞胶原蛋白中的功能多肽。 本专利技术中利用纤维连接蛋白等作为配基，采用亲和层析的方法分离鱼胶原蛋白中 的部分多肽，步骤合理、方法简单，具有分辨率高和特征性强等优点。权利要求，其特征是其步骤为(1)将鱼胶原蛋白溶于水，制成胶原蛋白溶液，并将该溶液的pH值调至6.0-9.0；(2)将胶原蛋白溶液上亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到饱和；(3)使用淋洗剂将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；(4)使用洗脱剂将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱出，洗脱过程的温度可控制在15－37℃；(5)利用凝胶过滤层析法或膜超滤的方法将得到的洗脱液浓缩，得到浓缩液；(6)将浓缩液冷冻干燥，所得白色粉末即鱼胶原蛋白中的功能多肽。2. 根据权利要求1所述的从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其特征是所说的鱼胶原蛋白是鱼鳞胶原蛋白或鱼皮胶原蛋白。3. 根据权利要求1所述的从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其特征是所说的亲 和层析柱中层析介质的配基是纤维连接蛋白。4. 根据权利要求1所述的从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其特征是所说的洗脱剂是含2 — 8mol/L脲、pH值为3. 0 — 8. 0的缓冲液或含5 — 50%乙醇的水溶液或5 — 50%乙腈的水溶液。全文摘要本专利技术涉及，其步骤是(1)将鱼胶原蛋白溶于水，制成胶原蛋白溶液，溶液pH值为6.0-9.0；(2)将胶原蛋白溶液上亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到饱和；(3)使用淋洗剂将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；(4)使用洗脱剂将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱出，洗脱过程的温度控制在15－37℃；(5)利用凝胶过滤层析法或膜超滤法将得到的洗脱液浓缩，得到浓缩液；(6)将浓缩液冷冻干燥，所得白色粉末即鱼胶原蛋白中的功能多肽。本专利技术中利用纤维连接蛋白作为配基，采用亲和层析的方法分离鱼胶原蛋白中的部分多肽，步骤合理、方法简单，具有分辨率高和特征性强本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从鱼胶原蛋白中分离功能多肽的方法，其特征是其步骤为：　　（１）将鱼胶原蛋白溶于水，制成胶原蛋白溶液，并将该溶液的ｐＨ值调至６．０－９．０；　　（２）将胶原蛋白溶液上亲和层析柱，循环上样至亲和层析柱吸附样品达到饱和；　　（３）使用淋洗剂将未与层析介质配基结合的多肽淋洗出；　　（４）使用洗脱剂将与亲和层析介质配基结合的多肽洗脱出，洗脱过程的温度可控制在１５－３７℃；　　（５）利用凝胶过滤层析法或膜超滤的方法将得到的洗脱液浓缩，得到浓缩液；　　（６）将浓缩液冷冻干燥，所得白色粉末即鱼胶原蛋白中的功能多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苗强，张贵锋，白义化，苏志国，
申请(专利权)人：威海市宇王集团有限公司，中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]