一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒及其应用。本发明专利技术基于马传染性贫血病毒的P26蛋白和gp45蛋白的抗原表位和结构特点，以及大肠杆菌的密码子偏好对马传染性贫血病毒的P26蛋白和gp45蛋白进行了序列的优化和融合表达，得到的重组蛋白在检测马传染性贫血病毒时具有较高的特异性和敏感性。重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，将其作为发光抗原制备得到的试剂盒在检测马传染性贫血病毒时具有较高的特异性和灵敏度，在检测马传染性贫血病毒的领域具有重要意义。重要意义。重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]马传染性贫血病(Equine infectious anaemia,EIA)简称马传贫,二类传染病、寄生虫病，由反录病毒科慢病毒亚科中的马传染性贫血病病毒(Equine infectious anaemia virus,EIAV)引起的马属动物传染病、其特征主要为间歇性发烧、消瘦、进行性衰弱、贫血、出血和浮肿；在无烧期间则症状逐渐减轻或暂时消失。多数感染马传染性贫血病毒的马经过急性期和慢性期后，马传染性贫血病毒仍在马体内以低水平复制，是危险的传染源，给养马业带来巨大的经济损失，因而需要建立一种更灵敏性、高效的检测方法。
[0003]马传染性贫血病毒(EIAV)基因组结构研究，证明马传染性贫血病毒(EIAV)基因组主要由gag、pol和env基因组成。gag基因编码4种核心结构蛋白，分别为P15、P26、P11和P9。其中，P26约占病毒总蛋白的40％。因为P26蛋白高度保守，任何不同血清型马传贫病毒感染马都能产生针对P26抗原的抗体，而且，P26抗体在感染马体内产生早，持续时长，是马传贫免疫琼脂扩散和ELISA诊断法使用的主要抗原。gp45蛋白是囊膜糖蛋白裂解物，gp45是与病毒复制、介导病毒与细胞受体结合密切相关的重要病毒结构蛋白，大量研究证实gp45含有大量与免疫保护相关的抗原表位，包括CTL表位和B淋巴细胞表位。这些抗原表位诱导机体产生的细胞免疫和体液免疫在限制病毒复制和控制感染中发挥重要的作用。试验结果也表明，gp45变异区域主要集中在gp45的C端，而gp45的N端，特别是胞外功能区至穿膜区域是保守的，这表明其在病毒组装和病毒与细胞融合过程的重要性。目前检测马传染性贫血病抗体的主要包括为琼脂凝胶免疫扩散反应、酶联免疫吸附分析法(ELISA)等方法。
[0004]常用的琼脂凝胶免疫扩散反应费时费力，酶联免疫吸附分析法具有操作试验操作简便、检测速度快的优点，目前市场上有检测马传染性贫血抗体类型的商品化普通ELISA试剂盒，但这些单一抗原包被试剂盒其结果有时会出现假阴性，准确性不高，同时不能在感染早期快速检测出马传染性贫血病毒抗体，不能及时做出防护措施，有可能产生更大范围的病毒传染。对于那些已经免疫后又感染的动物，由于具有中和抗体使得病毒的复制很慢，导致体内具有很低浓度的特异性蛋白，致使商品化的普通ELISA试剂盒敏感性低，使这些低浓度的特异性蛋白很难被检测到，导致部分感染动物漏检。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒及其应用。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种马传染性贫血病毒的重组蛋白，包括：P26蛋白和gp45蛋白；所述P26蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述gp45蛋白包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
[0007]进一步地，所述P26蛋白由SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列编码得到；所述gp45蛋白由SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列编码得到。
[0008]进一步地，所述重组蛋白包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。
[0009]本专利技术进一步提供一种核酸，所述核酸用于编码所述重组蛋白。
[0010]本专利技术进一步提供一种生物材料，所述生物材料包括所述的核酸；所述生物材料为表达盒、载体或转基因细胞。
[0011]进一步地，所述载体为原核载体pET
‑
30a。
[0012]进一步地，所述转基因细胞为大肠杆菌BL21细胞。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括所述重组蛋白，或所述核酸，或所述生物材料。
[0014]进一步地，所述试剂盒为化学发光检测试剂盒；所述试剂盒以所述重组蛋白为发光抗原。
[0015]进一步地，包括：
[0016]化学发光抗原包被板、酶标抗体、血清稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物A、发光底物B和10倍浓缩洗涤液。
[0017]所述化学发光抗原包被板由如下方法制备得到：
[0018]将1～1.5ug/mL的P26
‑
gp45融合蛋白以95～105uL/孔的加样量进行包被，在2～8℃条件下孵育16～18小时。
[0019]本专利技术进一步提供所述重组蛋白，或所述核酸在提高检测马传染性贫血病毒的特异性和敏感性中的应用。
[0020]本专利技术进一步提供所述重组蛋白，或所述核酸，或所述生物材料，或所述试剂盒在检测马传染性贫血病毒中的应用。
[0021]本专利技术具备如下有益效果：
[0022]本专利技术基于马传染性贫血病毒的P26蛋白和gp45蛋白的抗原表位和结构特点，以及大肠杆菌的密码子偏好对马传染性贫血病毒的P26蛋白和gp45蛋白进行了序列的优化和融合表达，显著提升了融合蛋白的表达效率，同时得到的重组蛋白在检测马传染性贫血病毒时具有较高的特异性和敏感性。
[0023]本专利技术提供的微孔板式化学发光检测试剂盒，可以检测马传染性贫血病毒感染早期不同血清型或接种疫苗后产生的抗体，判断被检动物是否感染马传染性贫血病毒或接种疫苗，其敏感性、特异性、稳定性好，尤其适用于低浓度样本的检测以及疫病的早期诊断。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1是本专利技术实施例1提供的诱导的PET
‑
30a
‑
P26
‑
gp45表达产物纯化后的SDS
‑
PAGE分析结果；其中1为Marker，2为诱导的PET
‑
30a，3为诱导的PET
‑
30a
‑
P26
‑
gp45。
具体实施方式
[0026]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术中的附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]实施例1
[0028]本实施例提供一种检测马传染性贫血病毒的试剂盒，包括：化学发光抗原包被板、酶标抗体、血清稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物A、发光底物B和10倍浓缩洗涤液。
[0029]1、化学发光抗原包被板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板；
[0030]包被过程为：将P26
‑
gp45融合蛋白加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马传染性贫血病毒的重组蛋白，包括：P26蛋白和gp45蛋白；所述P26蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述gp45蛋白包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述P26蛋白由SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列编码得到；和/或，所述gp45蛋白由SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列编码得到。3.根据权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。4.一种核酸，其特征在于，所述核酸用于编码权利要求2
‑
3任一项所述的重组蛋白。5.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括权利要求4所述的核酸；所述生物材料为表达盒、载体或转基因细胞。6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王新杰，孙晓明，白雪冬，李润年，
申请(专利权)人：北京亿森宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：