牛轮状病毒检测反应体系、RAA、crRNA引物及检测方法与应用技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，具体公开了牛轮状病毒检测反应体系、RAA、crRNA引物及检测方法与应用。本发明专利技术提供了一种牛轮状病毒RAA‑CRISPR/CAS反应体系，其包括：牛轮状病毒RAA上、下游引物和crRNA；所述牛轮状病毒RAA上、下游引物的序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。采用该反应体系可对牛轮状病毒基因进行无电源现场视觉检测或荧光检测，快速判定结果，检测设备少、成本低、灵敏度高、特异性佳。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒检测，具体地说，涉及牛轮状病毒检测反应体系、raa、crrna引物及检测方法与应用。

技术介绍

1、牛轮状病毒(bovine rotavirus，brv)是引起犊牛腹泻常见的病毒病原体之一，犊牛感染后会以精神委顿、厌食、呕吐、腹泻、脱水为主要特征，轮状病毒感染犊牛后再与其他肠道病原体混合感染，会导致腹泻症状加剧，严重者可致死亡。已成为影响养牛业健康发展的主要疫病之一。目前，对brv感染缺乏有效的治疗药物，并且对brv疫苗的研究较少，导致brv的防控难度加大。此外，犊牛腹泻是临床上常发的疫病，而引起犊牛腹泻的病原较多，如大肠杆菌(escherichia coli)、沙门氏菌(salmonella)、冠状病毒(coronavirus)等，仅从临床症状难以辨别，需要通过实验室进行诊断。为此，建立一种brv一管式核酸检测方法显得尤为重要。

2、目前对brv的诊断方法主要有传统方法，如病毒的分离鉴定法、电镜观察诊断法；免疫学检测技术，包括酶联免疫吸附试验、免疫层析试纸条检测技术；分子生物学技术，包括rt-pcr、实时荧光定量rt pcr本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.牛轮状病毒RAA-CRISPR/CAS反应体系，其特征在于，包括：牛轮状病毒RAA上、下游引物和crRNA；所述牛轮状病毒RAA上、下游引物的序列分别如SEQ ID NO.1-2所示，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的牛轮状病毒RAA-CRISPR/CAS反应体系，其特征在于，还包括：ssDNA和LbCas12a蛋白，所述ssDNA的序列如SEQ ID NO.10所示，所述ssDNA标记有荧光基团；

3.根据权利要求1-2任一项所述的牛轮状病毒RAA-CRISPR/CAS反应体系，其特征在于，包括：2～5mmol/L ...

【技术特征摘要】

1.牛轮状病毒raa-crispr/cas反应体系，其特征在于，包括：牛轮状病毒raa上、下游引物和crrna；所述牛轮状病毒raa上、下游引物的序列分别如seq id no.1-2所示，所述crrna的序列如seq id no.3所示。

2.根据权利要求1所述的牛轮状病毒raa-crispr/cas反应体系，其特征在于，还包括：ssdna和lbcas12a蛋白，所述ssdna的序列如seq id no.10所示，所述ssdna标记有荧光基团；

3.根据权利要求1-2任一项所述的牛轮状病毒raa-crispr/cas反应体系，其特征在于，包括：2～5mmol/l dntp、0.5～1.5μmol/l单链结合蛋白、1.0～2.5μmol/l重组酶蛋白、0.2～1.0u/μl dna聚合酶、15～50mmol/l trishcl、20～80mmol/l nacl、5～15mmol/l二硫苏糖醇、0.8～5.0μmol/l牛轮状病毒raa上游引物、0.8～5.0μmol/l牛轮状病毒raa下游引物、0.5～3μmol/l crrna、0.1～1.0μmol/l lbcas12a、0.2～1.5u/μl exo核酸外切酶、20～80nmol/l ssdna、0.2～1.0u/μl rnase inhibitor。

4.牛轮状病毒raa检测引物对，其特征在于，所述牛轮状病毒raa检测引物对的序列分别如seq id no.1-2所示。

5.crrna分子，其特征在于，序列如seq id no.3所示。

6.权利要求1-3任一项所述的牛轮状病毒raa-crispr/cas反应体系或...

【专利技术属性】
技术研发人员：王新杰，张阿敏，蒲利生，高姗姗，孙晓明，王琴，
申请(专利权)人：北京亿森宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：