检测牛伊氏锥虫的方法、RAA反应体系及应用技术

本发明专利技术涉及牛伊氏锥虫检测技术领域，具体公开了检测牛伊氏锥虫的方法、RAA反应体系及应用。本发明专利技术提供了一种检测牛伊氏锥虫的方法，所述检测牛伊氏锥虫的方法为非疾病诊断或治疗目的，所述方法采用RAA‑CRISPR CAS12a/CAS13a技术，反应体系包括：牛伊氏锥虫RAA上、下游引物和Cas12a‑crRNA；所述牛伊氏锥虫RAA上、下游引物、Cas12a‑crRNA的序列分别如SEQ ID No.4‑6所示。本发明专利技术的检测方法可高效、准确地进行牛伊氏锥虫的检测，从而为控制牛伊氏锥虫的流行作出贡献。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及牛伊氏锥虫检测，具体地说，涉及检测牛伊氏锥虫的方法、raa反应体系及应用。

技术介绍

1、牛锥虫病(trypanosomiasisevansi)又名苏拉病，俗称“肿脚病”，是由伊氏锥虫所引起的一种多种动物共患的血液原虫病。多发于热带和亚热带地区。临诊上以高热、黄疸、贫血、进行性消瘦以及高病死率为特征。伊氏锥虫寄生在脏器、血浆以及淋巴液中，也可侵入脑脊液寄生，在寄生动物的造血器官以及血液和淋巴液中进行繁殖，繁殖方式以纵分裂法为主。伊氏锥虫可感染马、驴、骡、水牛、黄牛、山羊、绵羊、犬和猫等动物，在家畜中，马、驴、骡最易感，水牛和黄牛次之。犬和猫以及山羊、绵羊只在实验室接种时很敏感，但在自然条件下，很少感染，尤其是犬和猫基本不感染。很多的野生动物也可感染伊氏锥虫。

2、伊氏锥虫是一种单细胞原虫，分类学上高于细菌，低于多细胞的真核生物，以寄生在牛血液中为生。伊氏锥虫的虫体显微镜下观察类似柳叶状，前端尖锐，后端钝圆，长约15～34μm，运动性很强，依靠鞭毛移动。血液、造血器官和淋巴液等是伊氏锥虫主要寄生处，以纵行二分裂的方式进行繁殖。...

【技术保护点】

1.一种检测牛伊氏锥虫的方法，所述检测牛伊氏锥虫的方法为非疾病诊断或治疗目的，其特征在于，所述方法采用RAA-CRISPR CAS12a/CAS13a技术，反应体系包括：牛伊氏锥虫RAA上、下游引物和Cas12a-crRNA；所述牛伊氏锥虫RAA上、下游引物、Cas12a-crRNA的序列分别如SEQ ID No.4-6所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系还包括：LbCas12a蛋白和ssDNA；所述ssDNA标记有产生荧光色的荧光基团；未标记前的ssDNA的序列如SEQ ID No.10所示；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，...

【技术特征摘要】

1.一种检测牛伊氏锥虫的方法，所述检测牛伊氏锥虫的方法为非疾病诊断或治疗目的，其特征在于，所述方法采用raa-crispr cas12a/cas13a技术，反应体系包括：牛伊氏锥虫raa上、下游引物和cas12a-crrna；所述牛伊氏锥虫raa上、下游引物、cas12a-crrna的序列分别如seq id no.4-6所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系还包括：lbcas12a蛋白和ssdna；所述ssdna标记有产生荧光色的荧光基团；未标记前的ssdna的序列如seq id no.10所示；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系包括：2.0～8.0mmol/ldntp、0.1～1.5μmol/l单链结合蛋白、0.5～2.5μmol/l重组酶蛋白、0.1～1.5u/μl dna聚合酶、15～60mmol/ltrishcl、15～80mmol/lnacl、5～15mmol/l二硫苏糖醇、0.5～5.0μmol/l牛伊氏锥虫raa上游引物、0.5～5.0μmol/l牛伊氏锥虫raa下游引物、0.5～3.0μmol/l crrna、0.1～0.6μmol/l lbcas12a、0.1～1.0u/μl exo核酸外切酶、50～150nmol/lssdna和...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓明，王新杰，高姗姗，张阿敏，王斯，蒲利生，王琴，
申请(专利权)人：北京亿森宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：