一种高热稳定性己糖激酶及其表达与纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种高热稳定性己糖激酶及其表达与纯化方法，属于生物工程领域。本发明专利技术以含来源于嗜热菌的己糖激酶GLK基因的重组质粒pET‑28a(+)‑GLK在大肠杆菌中表达为基础，建立了一种己糖激酶的生产方法，包括己糖激酶GLK在重组细胞中的表达方法、分离纯化方法以及保存方法。本发明专利技术实现了异源己糖激酶的在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化，所述方法为其他高附加值酶蛋白的生产提供了有益借鉴，为我国突破在血糖诊断试剂制备中的短板提供了更多可能性和发展空间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高热稳定性己糖激酶及其表达与纯化方法，属于生物工程领域。

技术介绍

1、己糖激酶可催化葡萄糖磷酸化形成葡萄糖-6-磷酸，与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联可将nad+还原为nadh。通过检测nadh在340nm处的吸光值变化可对葡萄糖含量进行定量检测。因此，在生化检测行业中己糖激酶常被用于血糖、尿糖等生化检测项目的葡萄糖定量检测。由于己糖激酶是酶制剂行业的小酶种，国内外鲜有报道己糖激酶生产制备相关的研究成果，因此国内企业对其关注度不高，缺乏己糖激酶生产制备方面的自主知识产权，导致国内己糖激酶市场目前仍然以进口酵母源己糖激酶为主。随着生活水平的提高，人们的饮食习惯也相应发生变化，越来越多人趋于高热量高糖饮食习惯，导致糖尿病患者数量日益增加。由于血糖检测是糖尿病患者治疗环节中不可或缺的步骤，糖尿病患者剧增意味着其对血糖检测的需求增加，己糖激酶的需求量也随之增加，基于国内仍以依赖进口己糖激酶供应需求的现状，开发挖掘价格亲民，对热稳定的己糖激酶迫在眉睫。

2、嗜热菌长期生存于高温环境，其相关蛋白及酶类热稳定性高，是热稳定己糖激酶挖掘筛选的优本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，表达SEQ ID NO.1所示的己糖激酶。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以E.coliBL21(DE3)为宿主，以pET-28a(+)为表达载体。

3.一种提高己糖激酶可溶性表达量的方法，其特征在于，将权利要求1所述重组大肠杆菌在培养基中培养至OD600为1.2-1.4，用终浓度为0.01-0.05mmol/L的IPTG诱导培养。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述改良LB培养基是在LB培养基...

【技术特征摘要】

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，表达seq id no.1所示的己糖激酶。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以e.colibl21(de3)为宿主，以pet-28a(+)为表达载体。

3.一种提高己糖激酶可溶性表达量的方法，其特征在于，将权利要求1所述重组大肠杆菌在培养基中培养至od600为1.2-1.4，用终浓度为0.01-0.05mmol/l的iptg诱导培养。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述改良lb...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓禹，周胜虎，李倩妮，毛银，赵运英，李国辉，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：