包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用。所述包虫病检测引物包括上游引物Hy

【技术实现步骤摘要】
包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，尤其涉及一种包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]包虫病(Hydatidosis)又称棘球蚴病(Echinococcosis)。该病不仅是传播最广泛的寄生虫病之一，也是公共卫生方面治疗和预防费用最高的疾病之一，呈地方性流行，是由棘球属的绦虫的幼虫寄生于人或动物机体组织所引发的传染病。包虫病的早期临床表现无自觉症状，全身健康状况良好，病程进展缓慢，潜伏期1
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30年。在分类学上可以分为四个虫种:细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，Eg)、多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，Em)、伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli，Ev)和少节棘球绦虫(Echinococcus oligarthrus，Eo)。这四种棘球属绦虫可引起不同类型的包虫病。包虫病有“虫癌”之称。该病直接导致器官或屠体死亡，间接影响人和动物的健康。采取早期诊断、早期治疗以及积极防治动物传染源的综合性防治措施，对控制包虫病对人类健康和畜牧业发展的影响十分重要。
[0003]包虫病的诊断目前主要依靠于B超、影像学检查和病理学检查等。因方法自身限制，易造成小病灶、非典型病灶的误诊和漏诊。因此，有必要建立一种快速、灵敏、准确度高的包虫检测方法。随着分子生物学技术的发展，近年来出现了一系列检测包虫病的新方法，如多重PCR检测法、粪抗原ELISA法、粪DNA检测方法等。目前这些检测方法，均是针对细粒棘球绦虫或者多房棘球绦虫单独设计的引物和探针，增加了检测成本；多重PCR因其在一个反应体系中加入了二对以上的引物，容易与亲缘关系较近的病原发生交叉反应，并且引物对之间也易发生互补结合、易产生干扰反应现象，因此，存在特异性差问题。ELISA方法相对简便、快速，但对于微量或杂质较多的样品，其特异性和灵敏度较低。
[0004]目前在包虫病检测方面已开发了多种PCR检测方法，Trachsel,D.等开发了一种多重PCR来区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和带绦虫的感染；Shang等开发了多重PCR检测方法，用于3种棘球绦虫的特异性和敏感性检测。目前尚未发现能在一个反应管条件下，同时针对细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫和少节棘球绦虫四个致病虫种，进行有效检测的技术方案。

技术实现思路

[0005]有鉴于
技术介绍
中存在的技术问题，本专利技术的一个目的在于提供一种能同时用于检测和鉴定4种包虫病病原的产品，能够快速、有效地进行检测，准确性、特异性和敏感性高，稳定性好。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种包虫病检测引物，包括上游引物Hy
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F和下游引物Hy
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R；
[0007]所述上游引物Hy
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F的核苷酸序列包括SEQ ID No.1，或，SEQ IDNO.1所示的核苷酸
序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列；
[0008]所述下游引物Hy
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R的核苷酸序列包括SEQ ID No.2，或，SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。
[0009]本专利技术还提供了与所述引物配套使用的探针，包括探针Hy
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P；所述探针Hy
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P的核苷酸序列包括SEQ ID No.3，或，SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。
[0010]本专利技术还提供了一种包虫病检测试剂盒，所述试剂盒包括所述引物，和/或，所述探针。
[0011]优选的，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、缓冲液、dNTP、双蒸水中的至少一种。
[0012]优选的，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
[0013]本专利技术还提供了所述引物，或者所述探针，或者所述试剂盒在非疾病诊断目的的棘球绦虫检测中的应用。
[0014]优选的，所述棘球绦虫的DNA中含有目的片段，所述目的片段的核苷酸序列包括SEQ ID No.4，或，SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。
[0015]优选的，所述棘球绦虫包括多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫、少节棘球绦虫、细粒棘球绦虫中的至少一种。
[0016]优选的，所述应用包括如下步骤：
[0017]S1、提取样品DNA；
[0018]S2、以步骤S1所述样品DNA为模板，利用所述引物进行PCR扩增反应；
[0019]S3、分析PCR产物。
[0020]优选的，所述非疾病诊断目的的棘球绦虫检测包括如下任意一种：
[0021](1)检测食品中是否含有棘球绦虫；
[0022](2)检测工作环境中是否含有棘球绦虫。
[0023]有益效果：
[0024]本专利技术提供了一种包虫病检测引物，包括上游引物Hy
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F和下游引物Hy
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R；所述上游引物Hy
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F和下游引物Hy
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R是根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫和少节棘球绦虫(Genbank Accession分别为：NC_008075、NC_000928、NC_009461和NC_009462)的rrnS基因序列设计得到，能分别检测细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫和少节棘球绦虫中的任何一种包虫病病原，也可同时用于检测和鉴定4种包虫病病原的混合感染。将所述检测引物应用于包虫病的荧光定量PCR检测，能够灵敏地检测包虫病，且准确性、特异性和敏感性高，稳定性好，检测结果快速、有效。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术
描述中所需要使用的附图进行说明。
[0026]图1是本专利技术实施例1所述荧光定量PCR扩增的实验结果，其中，序号1
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4依次代表多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫、少节棘球绦虫和细粒棘球绦虫；
[0027]图2是本专利技术实施例2所述荧光定量PCR检测包虫的特异性验证结果，其中，序号1
‑
9依次代表细粒棘球绦虫、石渠棘球绦虫、加拿大棘球绦虫、狮棘球绦虫、亚洲带绦虫、肥胖带绦虫、带状带绦虫、猪肉绦虫和灭菌去离子水；
[0028]图3是本专利技术实施例3所述荧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包虫病检测引物，其特征在于，包括上游引物Hy
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F和下游引物Hy
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R；所述上游引物Hy
‑
F的核苷酸序列包括SEQ ID No.1，或，SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列；所述下游引物Hy
‑
R的核苷酸序列包括SEQ ID No.2，或，SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。2.与权利要求1所述引物配套使用的探针，其特征在于，包括探针Hy
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P；所述探针Hy
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P的核苷酸序列包括SEQ ID No.3，或，SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。3.包虫病检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述引物，和/或，权利要求2所述探针。4.根据权利要求3所述包虫病检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓明，高姗姗，经珍珠，王新杰，张阿敏，张棕瑶，
申请(专利权)人：北京亿森宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：