本发明专利技术提供一种检测侵袭性致病真菌的基因芯片和试剂盒，其中基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，上述探针包含从白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新生隐球菌的ｒＤＮＡ的１８Ｓ－５．８Ｓ或５．８Ｓ－２８Ｓ内转录间区（ＩＴＳ）以及从上述九种真菌的５．８Ｓ?ｒＤＮＡ中选取的ＤＮＡ序列。利用本发明专利技术的基因芯片和试剂盒检测九种常见致病菌，操作简便，准确性高，重复性强。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测九种常见侵袭性致病真菌的基因芯片和检测用试剂盒。技术背景 近年来，由于抗生素、激素、免疫抑制剂和肿瘤放疗化疗的广泛应用，各种体内留 置管、人工瓣膜等的大量使用，以及艾滋病(AIDS)的增多，侵袭性真菌感染发病率有明显 上升的趋势，并且已成为危重病人死亡的重要原因之一。在美国，1990年住院患者深部真菌 感染率是1980年的1. 9倍，居各种病原体感染率上升之首位，2004年报道住院患者侵袭性 真菌感染率是20世纪90年代的2. 4倍，病死率为29%;在欧洲，1983 1997年间，侵袭性 真菌感染死亡患者占所有死亡患者的5. 1 %，而1998 2002年间由侵袭性真菌感染导致死 亡的患者占到了 7.8% ；在中国，北京协和医院1998年6月 1999年6月调查I⑶282例 患者中有53例发生深部真菌感染，感染率为18.8%，比1993年的5. 6%上升了 3. 4倍。侵袭性真菌感染多发生在医院内，主要由念珠菌、隐球菌等所致。其中，念珠菌是 血液系统感染的主要致病菌，由其导致的败血症病死率最高。在医学上常见的念珠菌除了 最常见的白色念珠菌外，近年来随着新一代抗真菌药物的应用，光滑假丝酵母，克柔假丝酵 母和热带假丝酵母等真菌造成的感染也日益增多。经研究发现，这些不同种类的假丝酵母 对抗生素敏感性存在差异。念珠菌感染是一种人类的机会感染，它可以急性或慢性感染的 形式发生。对口部粘膜的慢性增生性念珠菌疾病的研究是相当重要的，因为它与鳞状细胞 癌的发生有关。除了表面器官损伤以外，像心脏内膜炎和食道炎，深部念珠菌感染疾病，很 可能发生在免疫缺陷的个体中。对念珠菌的研究，很少将其鉴定到种的水平。在慢性增生性念珠菌病例中，研究仅 限于通过观察病变组织中念珠菌的菌丝来辨别菌种。人们已经认识到念珠菌菌种和亚种在 致病能力上存在很大差异。对念珠菌临床菌株进行鉴定和分类的传统方法包括形态学、生 物化学分析、菌落形态学分析、抗性分析以及血清学分类，这些方法很费时，而且依赖表型 特征，所以他们的可靠性不是很高。依靠基因的不同进行菌种检测是另一种可行的方法，基 因型分析方法已被用在念珠菌菌株的分类和检测中，但是并不常用在种的分类中。隐球菌的主要致病类型是新型隐球菌，隐球菌感染是艾滋病常见的并发症，发生 隐球菌脑膜炎后治愈率极低。隐球菌属包括许多种，其中新生隐球菌被认为是唯一的一种 人类病原体。新生隐球菌首先侵入肺中，然后通过血流扩散到达大脑和脑膜。在未被HIV感 染的隐球菌病患者中，特别是隐球菌引起的脑膜炎患者，经常有像红斑狼疮、肉状瘤病、白 血病、淋巴瘤、库欣综合症等一系列并发症出现。新生隐球菌病是一种经常与AIDS相伴的 疾病。新生隐球菌病和血清性感染迹象可以作为感染AIDS的一个判断依据。在将近45% 的AIDS患者中，新生隐球菌病经常被用于诊断AIDS。肺部新生隐球菌病的患者通常是很难 被诊断。诊断通常只能依靠检测肺部组织切片来完成，为了实现真菌的快速和简单的检测 需要更加灵敏和特异的方法。其中一种方法是检测血清中的抗原，然而，检测新生隐球菌抗 原的血清方法具有假阳性的缺点。在实验室中，诊断真菌感染经常很困难。培养从病人的尿液，血液以及唾液获得的样品经常很困难。在评价实验结果时，还要考虑到可能的污染问 题。近年来，越来越多的分子技术用于病原菌的鉴定、检测及病害诊断中，包括间区基 因序列分析、随机扩增长度多态性(RAPD)分析、核糖体DNA限制性片段长度多态性(RFLP) 分析等。和传统检测技术相比，这些基于多聚酶链式反应(PCR)的分子检测技术，不需要经 过病原菌的分离、纯培养等过程，而且具有快速、灵敏、特异性强等优点。生物芯片作为一种病原体分子检测技术具有高通量、快速、准确、可靠的特点，能 够实现对组群样品、多目标的同时检测，极大的提高检测效率。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是将基因芯片技术应用于侵袭性真菌的检测，利用生物芯片高 通量、快速、灵敏、特异性好的特点，提高侵袭性真菌的检测速度、通量和灵敏度，大大降低 成本，缩短检测时间。 本专利技术所述的检测侵袭性真菌致病菌的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相 载体上的寡聚核苷酸探针，其中所述的该寡聚核苷酸探针包含从以下序列中选取的一种或 多种序列a.从白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵 母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新生隐球菌的rDNA的18S-5. 8S或 5. 8S-28S内转录间区(ITS)、5· 8S rDNA选取的一种或多种DNA序列； b.所述a中选取的DNA序列的互补DNA序列；c. a或b中所述的DNA序列的互补RNA序列。本专利技术的一优选实施例中，上述a中从白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵 母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新 生隐球菌的rDNA的18S-5. 8S或5. 8S-28S内转录间区(ITS)、5. 8S rDNA选取的DNA片段 具有SEQ ID NO 3-38、除去其中的5、16的核苷酸序列中的一种或多种。本专利技术所述的基因芯片，还包括阳性对照探针、阴性探针和荧光探针。本专利技术的优选实施例中，上述阳性对照探针选自上述白色念珠菌、近平滑假丝酵 母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也 蒙假丝酵母、新生隐球菌的5. 8S rDNA序列。本专利技术的优选实施例中，上述阳性对照探针具有SEQ ID NO :16所示的核苷酸序 列。本专利技术所述的基因芯片可用于检测白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、 乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母或新生 隐球菌。本专利技术还提供一种检测侵袭性真菌的试剂盒，其包含上述的基因芯片，具体地，该 基因芯片可以包含具有SEQ ID N0:3-38、除去其中的5、16的核苷酸序列中的一种或多种 的寡核苷酸探针。本专利技术所述的试剂盒可应用于检测白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、 乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母或新生隐球菌。由上述的技术方案可见，本专利技术将特异rDNA间区序列与基因芯片技术相结合，建 立了一种快速、灵敏、准确性高、重复性强的白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、 乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新生隐 球菌检测基因芯片及其检测方法，利用本专利技术的基因芯片可以达到检测九种侵袭性真菌致 病菌目的。本专利技术提供的检测侵袭性致病真菌的基因芯片，检测范围内的九种致病菌为白色 念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵 母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新生隐球菌，以弥补针对真菌检测技术存在的费时耗 力的缺陷，扩展病原菌检测范围，提高检测灵敏度和特异性，降低劳动强度，缩短检测周期。为让本专利技术的上述和其它目的、特征和优点 能更明显易懂，下面特举较佳实施例， 并配合说明书附图，作详细说明如下。附图说明图1为本专利技术基因芯片的一个实施例的外形示意图；图2为本专利技术基因芯片的一个实施例上单一点阵探针本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测侵袭性真菌致病菌的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，其特征在于该寡聚核苷酸探针包含从以下序列中选取的一种或多种序列： ａ．从白色念珠菌、近平滑假丝酵母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、光滑假丝酵母、季也蒙假丝酵母、新生隐球菌的ｒＤＮＡ的１８Ｓ－５．８Ｓ或５．８Ｓ－２８Ｓ内转录间区、５．８Ｓ ｒＤＮＡ选取的一种或多种ＤＮＡ序列； ｂ．所述ａ中选取的ＤＮＡ序列的互补ＤＮＡ序列； ｃ．ａ或ｂ中所述的ＤＮＡ序列的互补ＲＮＡ序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，喻群芳，杨磊，曹勃阳，冯露，
申请(专利权)人：天津生物芯片技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：12
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