一种绵羊ＰＲＮＰ等位基因密码子的分型方法技术

本发明专利技术公开了一种绵羊ＰＲＮＰ等位基因密码子的分型方法，包括：以提取的绵羊血液基因组ＤＮＡ为模板，使用寡核苷酸作为引物，通过巢式ＰＣＲ方式扩增外侧引物；稀释扩增产物，并以得到的扩增产物稀释物为模板，以所述序列Ａ作为上游引物，使用序列Ｃ～序列Ｌ作为下游引物，通过ＡＲＭＳ－ＰＣＲ扩增外侧引物，分别进行密码子１３６、１５４和１７１不同基因型突变位点的检测；扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，记录扩增条带的有无，判断并确定基因型。本发明专利技术所述分型方法，可以克服现有技术中成本高、检测时间长和精确性差等缺陷，以实现成本低、检测时间短、并有利于提高绵羊ＰＲＮＰ痒病抗性基因型（ＡＲＲ／ＡＲＲ）频率的优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种绵羊ＰＲＮＰ等位基因密码子的分型方法，其特征在于，包括以下步骤：　　ａ、提取绵羊血液基因组ＤＮＡ，以所述基因组ＤＮＡ为模板，使用寡核苷酸作为引物，通过巢式ＰＣＲ方式扩增外侧引物；　　其中，所述寡核苷酸包括以下序列表：　　序列Ａ　ＳＨＰ－Ｐ１　５′ＧＣＡＴＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧ　３′；　　序列Ｂ　ＳＨＰ－Ｐ２　５′ＡＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＣＣＣＴＴＧ　３′；　　ｂ、稀释步骤ａ得到的扩增产物，获得扩增产物稀释物，以所述扩增产物稀释物为模板，以所述序列Ａ作为上游引物，并使用序列Ｃ～序列Ｌ作为下游引物，通过ＡＲＭＳ－ＰＣＲ扩增外侧引物，并分别进行密码子１３６、１５４和１７１不同基因型突变位点的检测；　　其中，所述密码子１３６包括密码子１３６Ａ、１３６Ｖ和１３６Ｔ，所述密码子１５４包括１５４Ｒ、１５４Ｈ和１５４Ｌ，所述密码子１７１包括１７１Ｑ、１７１Ｒ、１７１Ｋ和１７１Ｈ；　　所述序列Ｃ～序列Ｌ具体如下：　　序列Ｃ　１３６Ａ　５′ＴＧＴＡＧＧＣＣＴＧＣＴＣＡＴＡＧＣ　３′；　　序列Ｄ　１３６Ｖ　５′ＴＡＧＣＴＡＧＧＣＣＴＧＣＴＣＡＡＧＡ　３′；　　序列Ｅ　１３６Ｔ　５′ＧＣＴＡＧＧＣＣＴＧＣＴＣＡＴＴＧＴ　３′；　　序列Ｆ　１５４Ｒ　５′ＧＣＴＣＡＡＣＧＧＴＡＣＡＴＧＴＴＴＴＣＡＣ　３′；　　序列Ｇ　１５４Ｈ　５′ＣＧＣＴＡＡＣＧＧＴＡＣＡＴＧＴＴＴＴＧＡＴ　３′；　　序列Ｈ　１５４Ｌ　５′ＣＣＴＣＡＡＣＧＧＴＡＣＡＴＧＴＴＴＴＣＡＡ　３′；　　序列Ｉ　１７１Ｑ　５′ＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＡＴＣＣＴＧ　３′；　　序列Ｊ　１７１Ｒ　５′ＣＴＧＣＴＡＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣ　３′；序列Ｋ　１７１Ｋ　５′ＴＧＴＴＣＧＡＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＡＴＡＴＴＴ　３′；　　序列Ｌ　１７１Ｈ　５′ＣＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＧＣＡＡ　３′；　　ｃ、对步骤ｂ得到的扩增产物，经琼脂糖凝胶电泳检测，记录特异性扩增条带的有无，并判断基因型；具体记录参见下表：ｄ、当出现步骤ｃ中Ｅｘａｍｐｌｅ　１８～Ｅｘａｍｐｌｅ　２２情况时，对步骤ａ得到的扩增产物进行ＴＡ克隆，以随机挑选的无色透明菌落为模板，进行菌落ＰＣＲ扩增。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴润，刘磊，李发弟，张小丽，赵春林，王芳，贾晓蕊，王川，刁小龙，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]