生殖泌尿系统病原体联检并区分的组合物、试剂盒及用途技术方案

本发明专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及生殖泌尿系统感染相关病原体的检测，更具体地，涉及生殖支原体、人型支原体、阴道毛滴虫、加德纳杆菌的检测。本发明专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光PCR分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实现生殖支原体、人型支原体、阴道毛滴虫、加德纳杆菌的检测和区分。本发明专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到200拷贝/mL，特异性好，检测更为准确。检测更为准确。检测更为准确。

【技术实现步骤摘要】
生殖泌尿系统病原体联检并区分的组合物、试剂盒及用途


[0001]本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及生殖泌尿系统相关病原体的检测，更具体地，涉及生殖支原体、人型支原体、阴道毛滴虫和加德纳杆菌的检测。

技术介绍

[0002]支原体引起的泌尿生殖道炎症是最古老、最常见的性传播性疾病之一。生殖支原体(Mycoplasma genitalium，MG)，是一种很难培养的性传播病原体，有10
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35％的男性急性和慢性非淋菌性尿道炎(NGU)也由生殖支原体引起，也可致女性宫颈炎、子宫内膜炎和盆腔炎。
[0003]人型支原体(Mycoplasma hominis，MH)是生殖泌尿系统中容易引起盆腔炎、细菌性阴道病、产后发热等疾病的病原体，常导致严重的疾病，甚至有研究表明其可能与女性不孕有关。
[0004]阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis，TV)感染是一种十分常见的性传播疾病，据WHO报道，全球每年有1.7亿人感染TV。除引起泌尿生殖道感染外，TV也是HⅣ感染和诱发宫颈癌的危险因素之一。女性妊娠中期感染TV常引起胎膜早破、早产、低体重儿等，它也是男性非淋菌性尿道炎的一个重要病因。与其他性传播疾病一样，其临床症状不典型，临床确诊常借助实验检测。
[0005]加德纳杆菌(Gardnerella vaginalis，GV)引起的感染多数较轻，多见于性活跃妇女。急性期白带增多，有鱼腥或氨的臭味，外阴潮湿不适，常伴有阴道灼热感、性交痛及外阴骚痒。检查见部分患者外阴红肿，阴道粘膜充血，呈灰红色，轻度红肿，分泌物多呈均质性，稀薄，灰白色，有时为乳黄色或类绿色，腥臭味。阴道pH常为5
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5.5。有时白带量少，仅有薄薄一层，如膜样覆盖在充血的阴道壁上。少数患者阴道壁有红斑或淤点，孕妇患者可引起流产或产后子宫内膜炎。感染重者也可导致败血症、尿道感染、肾周脓肿和膀胱炎等。
[0006]以上单体感染易引发交叉混合感染，导致并发症，研究表明女性患病率明显高于男性。在女性妊娠期感染MG、MH、TV、GV，可引起胎膜早破、早产、低体重儿等；此外，MG、MH、TV也是男性非淋菌性尿道炎的一个重要病因，其临床症状不典型，临床确诊需借助实验室检测。目前，临床治疗衣原体感染抗菌药物种类较多，但抗生素的滥用使得支原体对其耐药性增加，而高效精准的支原体检测产品可为临床合理用药提供可靠依据与参考，进而提升治疗效果，改善预后结局。
[0007]因此，本领域需求一种产品能够简单、快速地检测上述病原体以便为后续治疗提供针对性的策略，并且灵敏度高，特异性好。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种生殖泌尿系统病原体联检并区分的组合物，包括：
[0009]如SEQ ID NO:1～3所示的检测生殖支原体的上游引物、下游引物及探针；
[0010]如SEQ ID NO:4～6所示的检测人型支原体的上游引物、下游引物及探针；以及
[0011]如SEQ ID NO:7～9所示的检测阴道毛滴虫的上游引物、下游引物及探针。
[0012]进一步地，所述组合物还包括：如SEQ ID NO:10～12所示的检测加德纳杆菌的上游引物、下游引物及探针。
[0013]本专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光PCR分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实生殖支原体、人型支原体、阴道毛滴虫和加德纳杆菌的检测和区分，以便为后续治疗提供针对性的策略。本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到200拷贝/mL，特异性好，检测更为准确。
[0014]进一步地，所述组合物包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
[0015]在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。在一个具体的实施方案中，内标是Rnase P。
[0016]进一步地，本专利技术组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
[0017]在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用ATTO 425、Quasar705、FAM、HEX、ROX和CY5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
[0018]在一些具体的实施方案中，生殖支原体探针的荧光报告基团为FAM；人型支原体探针的荧光报告基团为HEX(或VIC)；阴道毛滴虫探针的荧光报告基团为ROX；加德纳杆菌探针的荧光报告基团为CY5。
[0019]进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物和探针对中的一对或多对。在本专利技术中，“对”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
[0020]本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应4个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
[0021]举例来说，可以包括上述4对引物和探针中的任意3对，可以包括上述4对引物和探针中的任意2对，也可以包括上述4对引物和探针中的任意1对。
[0022]也就是说，如果一管之内4个靶标均能扩增，不相互影响，那么也就证明这4个靶标中任意3个靶标，任意2个靶标，任意1个靶标也能实现检测对应靶标的效果，这是毫无疑问的。
[0023]在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光PCR。
[0024]进一步地，探针的3
’
末端还具有非荧光淬灭剂。
[0025]进一步地，探针的3
’
末端还具有淬灭基团，例如BHQ1或BHQ2。
[0026]在一个具体的实施方案中，探针的3
’
末端为BHQ1。
[0027]在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分分别存在于单独包装中。
[0028]在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分存在于同一个包装中。
[0029]进一步地，本专利技术的组合物的各成分以混合的形式存在。
[0030]第二方面，本专利技术提供了上述本专利技术的组合物在制备生殖泌尿系统病原体联检并区分的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为生殖支原体、人型支原体、白色念珠菌、加德纳
杆菌。
[0031]第三方面，本专利技术提供了一种生殖泌尿系统病原体联检并区分的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述本专利技术的组合物。
[0032]进一步地，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
[0033]在一个具体的实施方案中，阴性质控品是DEPC H2O、生理盐水中的至少一种。阳性质控品是生殖支原体、人型支原体、阴道毛滴虫、加德纳杆菌的片段质粒或阳性菌株中的至少一种。
[0034]进一步地，所述试剂盒还包括dNTP、PCR缓冲液以及Mg
2+
中的至少一种。
[0035]更进一步地，所述试剂盒还包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生殖泌尿系统病原体联检并区分的组合物，包括：如SEQ ID NO:1～3所示的检测生殖支原体的上游引物、下游引物及探针；如SEQ ID NO:4～6所示的检测人型支原体的上游引物、下游引物及探针；以及如SEQ ID NO:7～9所示的检测阴道毛滴虫的上游引物、下游引物及探针。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：如SEQ ID NO:10～12所示的检测加德纳杆菌的上游引物、下游引物及探针。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，生殖支原体的荧光报告基团为FAM；人型支原体的荧光报告基团为HEX或IVC；阴道毛滴虫的荧光报告基团为ROX；加德纳杆菌探针的荧光报告基团为CY5。5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙青芝，许思瑶，谭德勇，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：