【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因检测，具体涉及检测xpr1基因多态性位点的引物组合物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、原发性家族性脑钙化(pfbc)是一种以基底神经节和其他脑区磷酸钙沉积，双侧对称性脑钙化为特征的神经系统疾病，病变位置也会影响至晶状核、尾状核、齿状核、丘脑、小脑半球和皮层下白质；与pfbc相关的临床症状多种多样，其中包括运动障碍、认知障碍、精神症状、步态障碍、音感障碍、小脑综合征、癫痫发作和慢性头痛。
2、pfbc具有遗传异质性，多数伴有明确的家族史，多为常染色体显性遗传，部分常染色体隐性遗传家系亦有报道。目前，pfbc的诊断通常仅依赖于颅脑ct扫描的双侧和对称钙化(主要在基底节区)，在接受ct扫描的老年(≥60岁)患者中，其患病率可达20％-30％，但在老龄且无症状患者中，区别其脑钙化是生理性钙化还是病理性钙化仍是一大难题。随着致病基因的相继鉴定，分子诊断技术对明确诊断pfbc也日趋重要。
3、近期，xpr1基因变异被认为是以常染色体显性方式遗传的pfbc的致病基因；研究表明，xpr1可以与pdgfrb相互作用，并可能在细胞膜上形成复合物，参与磷酸盐的输出；xpr1介导磷酸盐输出，然而xpr1基因的错义突变导致细胞内磷酸盐输出减少；这些结果表明，xpr1在维持大脑细胞磷酸盐平衡中发挥了重要作用。
4、在检测手段中，原发性家族性脑钙化作为一种罕见遗传病，仅依靠颅脑ct扫描进行诊断，其延迟诊断现象严峻，尤其是无明确家族史的患者，要提高原发性家族性脑钙化检测效率，目前市面上尚未有基因检测方法的
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供检测xpr1基因多态性位点的引物组合物、试剂盒及检测方法。
2、本专利技术提供一种检测xpr1基因多态性位点的引物组合物，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少一种；
3、所述组分a包括seq id no:1所示的上游引物、seq id no:2所示的下游引物和seqid no:3所示的单碱基延伸引物；
4、所述组分b包括seq id no:4所示的上游引物、seq id no:5所示的下游引物和seqid no:6所示的单碱基延伸引物；
5、所述组分c包括seq id no:4所示的上游引物、seq id no:5所示的下游引物和seqid no:7所示的单碱基延伸引物；
6、所述组分d包括seq id no:4所示的上游引物、seq id no:5所示的下游引物和seqid no:8所示的单碱基延伸引物；
7、所述组分e包括seq id no:9所示的上游引物、seq id no:10所示的下游引物和seq id no:11所示的单碱基延伸引物。
8、本专利技术利用pcr扩增引物和单碱基延伸引物，通过能够特异性扩增包含snp位点区域的目标基因片段的引物和dna聚合酶进行pcr扩增，pcr结束后加入碱性磷酸酶消化处理，去除反应液中的dntp。之后，在反应液中加入snp位点特异的延伸引物及ddntp等相关组分并进行单碱基延伸反应，反应过程中，snp位点特异的延伸引物能够与待测的snp位点的5’端进行特异结合并根据碱基互补配对原则延伸出与目标snp基因型互补的碱基，根据不同的基因型的dna模板可得到不同的延伸产物。不同碱基的分子量不同，根据延伸产物的分子量能够确定所分析snp位点的基因型。本专利技术提供的检测xpr1基因多态性位点的引物组合物可以显著提高分型检测效率、降低样本用量，并且准确性高。
9、本专利技术提供的检测xpr1基因多态性位点的引物组合物具有高灵敏度、高特异性和高精密度，能够直接分辨16dalton(道尔顿)的差异，不引入荧光等标记物所带来的偏差，信号偏差显著低于定量pcr，保证了pcr反应的准确性和重复性，一台质谱仪每次可以检测384*2个样本，检测所需的样本量少(可以检测出浓度为5ng/μl的样本)，适合技术推广和应用。利用本专利技术的引物组合物可以实现对xpr1基因的5个snp位点进行准确的基因分型的目的。
10、优选地，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少两种。
11、优选地，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d和组分e。
12、本方案提供的检测xpr1基因多态性位点的引物组合物能同时检测xpr1基因的5个突变基因位点(c.260t＞c、c.407g＞a、c.419t＞c、c.434t＞c、c.653t＞c)，在一管反应体系中能同时检测5个位点(高通量)，一个标本只需进行一次核酸提取和同时进行单管pcr扩增和单碱基延伸，在核酸质谱仪上就能得出5个位点的基因型，实现了反应检测snp位点较多，反应操作简便的目的，通过采用本方案的最佳引物组合物，引物之间互不干扰，同时扩增多个突变位点，涵盖范围更广泛，还具有较高的准确性、灵敏度和重复性，对于检测xpr1基因多态性位点具有重要的指导和研究价值。本专利技术提供的引物组合物实现整个扩增和多态性位点的检测在同一反应体系中完成，减少外界因素对结果的干扰，可以提高检测的准确度，并且可以降低因检测位点不全导致的误检风险，更好地满足xpr1基因多态性位点检测的需要。
13、本专利技术提供一种所述检测xpr1基因多态性位点的试剂盒，所述试剂盒包括所述检测xpr1基因多态性位点的引物组合物。
14、优选地，所述试剂盒还包括pcr反应试剂、sap反应试剂、单碱基延伸反应试剂中的至少一种。
15、优选地，所述pcr反应试剂包括pcr缓冲液、pcr酶中的至少一种。
16、优选地，所述sap反应试剂包括sap缓冲液和sap酶中的至少一种。
17、优选地，所述单碱基延伸反应试剂包括延伸缓冲液、延伸终止液、延伸酶中的至少一种。
18、优选地，所述试剂盒还包括阳性质控品、阴性质控品中的至少一种。
19、优选地，所述阳性质控品包括含c.260t＞c杂合突变型质粒、c.407g＞a杂合突变型质粒、c.419t＞c杂合突变型质粒、c.434t＞c杂合突变型质粒、c.653t＞c杂合突变型质粒共五种质粒的混合物。
20、优选地，所述阴性质控品包括生理盐水。
21、优选地，所述检测xpr1基因多态性位点的引物组合物的浓度为0.1μm～0.2μm。
22、本专利技术提供一种以非诊断目的检测xpr1基因多态性位点的方法，包括如下步骤：
23、s1.使用所述试剂盒中的所述上游引物和所述下游引物对待测样本进行pcr扩增反应，得到扩增产物；
24、s2.将步骤s1得到的扩增产物进行去磷酸化处理，得到去磷酸化产物；
25、s3.使用所述试剂盒中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测XPR1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分A、组分B、组分C、组分D、组分E中的至少一种；
2.根据权利要求1所述检测XPR1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分A、组分B、组分C、组分D、组分E中的至少两种。
3.根据权利要求2所述检测XPR1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分A、组分B、组分C、组分D和组分E。
4.一种检测XPR1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一项所述检测XPR1基因多态性位点的引物组合物。
5.根据权利要求4所述检测XPR1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂、SAP反应试剂、单碱基延伸反应试剂中的至少一种。
6.根据权利要求5所述检测XPR1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应试剂包括PCR缓冲液和PCR酶中的至少一种。
7.根据权利要求5所述检测XPR1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述SAP反应试剂包括
8.根据权利要求5所述检测XPR1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸反应试剂包括延伸缓冲液、延伸终止液、延伸酶中的至少一种。
9.一种检测原发性家族性脑钙化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一项所述检测XPR1基因多态性位点的引物组合物。
10.一种以非诊断目的检测XPR1基因多态性位点的方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测xpr1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少一种；
2.根据权利要求1所述检测xpr1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少两种。
3.根据权利要求2所述检测xpr1基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d和组分e。
4.一种检测xpr1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一项所述检测xpr1基因多态性位点的引物组合物。
5.根据权利要求4所述检测xpr1基因多态性位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr反应试剂、sap反应试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：马维蔓，张立华，蔡琦，肖呈媛，吴康，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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