检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物、探针、试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及细菌检测技术领域，公开了检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物和探针，所述引物用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因中的一种或二种；所述探针用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的一种或二种；所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的引物包括正向引物和反向引物；本发明专利技术提供的用于real

【技术实现步骤摘要】
检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物、探针、试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及细菌检测
，具体是检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物、探针、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，Kpn)是一种条件性致病菌，当机体免疫力下降时常常可以引起呼吸系统、泌尿系统、血液系统、软组织等感染；在20世纪80年代中期，我国台湾地区首次报道了一种独特的社区获得性、组织侵袭性肺炎克雷伯菌感染的临床综合征，主要表现为化脓性肝脓肿，感染灶可出现在多个部位并可能发生转移性传播；这种新发现的菌被命名为高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKp)，hvKp能在相对健康的宿主造成严重的、潜在致命的感染，而经典肺炎克雷伯菌(classic Klebsiella pneumoniae，cKp)倾向于感染免疫功能低下的人群；hvKp能造成如脑膜炎、坏死性筋膜炎、眼内炎和骨髓炎等原发感染，并且感染能力较cKp更强；此外，hvKp造成的感染还具有转移播散的倾向，多与K1和K2荚膜血清型及高黏液表型有关。
[0003]目前，针对高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因检测的方法主要有传统PCR方法和real
‑
time PCR方法等，存在检测周期长、技术要求高、过程繁琐等不足；随着分子生物学技术的发展，建立一种反应快速、操作简便、灵敏性高的检测方法对于高毒力肺炎克雷伯菌的有效控制具有重要意义。<br/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物、探针、试剂盒及方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物和探针，所述引物用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因中的一种或二种；所述探针用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的一种或二种；
[0007]所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物为K1
‑
F1、K1
‑
F2、K1
‑
F3中的一种和K2
‑
F1、K2
‑
F2、K2
‑
F3中的一种；所述反向引物为K1
‑
R1、K1
‑
R2、K1
‑
R3中的一种和K2
‑
R1、K2
‑
R2、K2
‑
R3中的一种；
[0008]其中，K1
‑
F1的核苷酸序列为GCTCGCTTGGACGTGCAACAGAAAGATATC；
[0009]K1
‑
F2的核苷酸序列为GTCTCTACATGCAGGCATGATACTATGCTCTC；
[0010]K1
‑
F3的核苷酸序列为GCATTGTCACAATTTACACGCTTTTTAGAAATAGCC；
[0011]K2
‑
F1的核苷酸序列为CGAGCTGGCGCCGCCTTAATTATTATTGTTG；
[0012]K2
‑
F2的核苷酸序列为GCTCAATTATTTAGATCCTGCCATAATAAATAAC；
[0013]K2
‑
F3的核苷酸序列为GTATTATACAATATAACGATTTTATTAGCCCTG；
[0014]K1
‑
R1的核苷酸序列为ACGAGATGTATTTCGTATAACAGTAACAAAAGC；
[0015]K1
‑
R2的核苷酸序列为ATAATGAGGAGAACATTACCATAAAACGAGATG；
[0016]K1
‑
R3的核苷酸序列为CGTAAAATGATGATATAATAACTGAACTACCC；
[0017]K2
‑
R1的核苷酸序列为CAGCAAAACCCTAAACATTAACTTTCCTTTAAGG；
[0018]K2
‑
R2的核苷酸序列为GATATTACTATTGAGCATAGCGACAGCAAAAC；
[0019]K2
‑
R3的核苷酸序列为CATAGCGACAGCAAAACCCTAAACATTAAC；
[0020]所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因的探针核苷酸序列为：GCATCTATTGCTTATTTACTCGCGAGATTAATAGTTA[FAM
‑
dT]AA[THF][BHQ
‑
dT]ATTATGATAAGCCTT[C3spacer]；
[0021]所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K2基因的探针核苷酸序列为：CTACCAGATTGTATGTAGTATCCTTCTATTAGCCG[ROX
‑
dT]A[THF][BHQ
‑
dT]GTTAAACTGGAGTAC[C3sp acer]。
[0022]作为本专利技术再进一步的方案：所述引物中的正向和反向引物均为寡核苷酸序列。
[0023]作为本专利技术再进一步的方案：所述探针在距5
’
端约30nt序列位置上标记dSpacer，THF位点上游标记一个荧光基团，下游标记一个淬灭基团，两个基团距离2
‑
4nt，THF距离3
’
末端≥15nt，并且3
’
末端标记修饰基团C3Spacer；所述荧光基团包括FAM和ROX，所述淬灭基团包括BHQ1和BHQ2。
[0024]作为本专利技术再进一步的方案：所述正向引物的核苷酸序列为
[0025]GCTCGCTTGGACGTGCAACAGAAAGATATC和CGAGCTGGCGCCGCCTTAATTATTATTGTTG，所述反向引物的核苷酸序列为ACGAGATGTATTTCGTATAACAGTAACAAAAGC和
[0026]GATATTACTATTGAGCATAGCGACAGCAAAAC；所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因的探针核苷酸序列为：
[0027]GCATCTATTGCTTATTTACTCGCGAGATTAATAGTTA[FAM
‑
dT]AA[THF][BHQ
‑
dT]ATTATGATAAGCCTT[C3spacer]，所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K2基因的探针核苷酸序列为：
[0028]CTACCAGATTGTATGTAGTATCCTTCTATTAGCCG[ROX
‑
dT]A[THF][B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物和探针，其特征在于，所述引物用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因中的一种或二种；所述探针用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的一种或二种；所述用于扩增高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因和K2基因的引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物为K1
‑
F1、K1
‑
F2、K1
‑
F3中的一种和K2
‑
F1、K2
‑
F2、K2
‑
F3中的一种；所述反向引物为K1
‑
R1、K1
‑
R2、K1
‑
R3中的一种和K2
‑
R1、K2
‑
R2、K2
‑
R3中的一种；其中，K1
‑
F1的核苷酸序列为GCTCGCTTGGACGTGCAACAGAAAGATATC；K1
‑
F2的核苷酸序列为GTCTCTACATGCAGGCATGATACTATGCTCTC；K1
‑
F3的核苷酸序列为GCATTGTCACAATTTACACGCTTTTTAGAAATAGCC；K2
‑
F1的核苷酸序列为CGAGCTGGCGCCGCCTTAATTATTATTGTTG；K2
‑
F2的核苷酸序列为GCTCAATTATTTAGATCCTGCCATAATAAATAAC；K2
‑
F3的核苷酸序列为GTATTATACAATATAACGATTTTATTAGCCCTG；K1
‑
R1的核苷酸序列为ACGAGATGTATTTCGTATAACAGTAACAAAAGC；K1
‑
R2的核苷酸序列为ATAATGAGGAGAACATTACCATAAAACGAGATG；K1
‑
R3的核苷酸序列为CGTAAAATGATGATATAATAACTGAACTACCC；K2
‑
R1的核苷酸序列为CAGCAAAACCCTAAACATTAACTTTCCTTTAAGG；K2
‑
R2的核苷酸序列为GATATTACTATTGAGCATAGCGACAGCAAAAC；K2
‑
R3的核苷酸序列为CATAGCGACAGCAAAACCCTAAACATTAAC；所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K1基因的探针核苷酸序列为：GCATCTATTGCTTATTTACTCGCGAGATTAATAGTTA[FAM
‑
dT]AA[THF][BHQ
‑
dT]ATTATGATAAGCCTT[C3spacer]；所述用于检测高毒力肺炎克雷伯菌荚膜血清型K2基因的探针核苷酸序列为：CTACCAGATTGTATGTAGTATCCTTCTATTAGCCG[ROX
‑
dT]A[THF][BHQ
‑
dT]GTTAAACTGGAGTAC[C3sp acer]。2.根据权利要求1所述的检测肺炎克雷伯菌K1基因和K2基因的引物和探针，其特征在于，所述引物中的正向和反向引物均为寡核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的检测肺炎克...

【专利技术属性】
技术研发人员：李进，胡铁弋，谢铌奇，王杉，
申请(专利权)人：重庆市大足区人民医院，
类型：发明
国别省市：