【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及阴道炎相关病原体的检测，更具体地，涉及乳杆菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌、阴道嗜血杆菌的检测。
技术介绍
1、乳杆菌(lactobacillus)对阴道失调或感染具有保护作用。阴道微生菌群从女性出生就开始定居并伴随一生。随着年龄的变化，阴道微生菌群会从青春期前的厌氧微生物过渡到生殖年龄的以乳杆菌为主的健康阴道微生物菌群，乳杆菌占70％，它能够产生乳酸，通过维持阴道弱酸性环境、提供生物屏障、发挥免疫作用等多种机制，抑制致病菌增殖，并防止外源性病原微生物感染，是抵御病原体的主要防线。阴道微生物失调的特点是乳酸杆菌丰度较低，其他微生物菌群的水平较高，如普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌、阴道嗜血杆菌等水平升高会对阴道和生殖健康产生不利影响，并导致细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎等各种阴道感染，甚至是早产、先兆子痫、妊娠高血压等不良妊娠表现。因此，监测阴道乳杆菌是评估女性阴道菌群稳态的重要依据。
2、普雷沃氏菌(prevotella)是一种革兰氏阴性厌氧细菌。它主要集聚于正常人体的口腔、女性生殖道等部位，与宿主有一定的共生关系，是这些部位的正常菌群和优势菌属之一，也是临床上较为常见的一种条件致病菌。当阴道中占优势的乳杆菌保护丧失且形成了严格的厌氧环境时，普雷沃氏菌丰度会偶然增加，容易造成女性生殖道感染，从而引起阴道炎，也是久治不愈细菌性阴道炎的罪魁祸首之一。
3、阴道阿托波氏菌(atopobium)是形态细长的革兰氏阳性球菌，无运动，无芽孢形成，生长缓慢，是细菌性阴道病患者中的常见
4、阴道嗜血杆菌(gardnerella)是一种小而短的多形性革兰氏阴性杆菌，是引起阴道感染最常见的病原菌之一。正常情况下，阴道的弱酸性环境能保持阴道的自洁功能，当阴道嗜血杆菌等厌氧菌过度繁殖，多于乳酸菌100～1000倍，便会产生阴道发炎的症状，引起阴道嗜血杆菌性阴道炎。
5、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌、阴道嗜血杆菌均能引阴道炎。因此，本领域需求一种产品能够简单、快速地检测上述病原体，并且要求灵敏度高，特异性好，为临床医生提供较为充分的快速诊断以及排除不同病原体感染的依据，缩短临床医生对患者病情诊断的时间，加快对患者实施治疗措施。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种检测阴道炎相关病原体的组合物，包括：
2、如seq id no:1～3所示的检测乳杆菌的上游引物、下游引物及探针；
3、如seq id no:4～6所示的检测普雷沃氏菌的上游引物、下游引物及探针；
4、如seq id no:7～9所示的检测阴道阿托波氏菌的上游引物、下游引物及探针；以及
5、如seq id no:10～12所示的检测阴道嗜血杆菌的上游引物、下游引物及探针。
6、本专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光pcr分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实乳杆菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌，和阴道嗜血杆菌的检测和区分，以便为后续治疗提供针对性策略。本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到500拷贝/ml，特异性好，检测更为准确，为临床医生提供较为充分的快速诊断以及排除不同病原体感染的依据，缩短临床医生对患者病情诊断的时间，加快对患者实施治疗措施。
7、进一步地，所述组合物包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
8、在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。在一个具体的实施方案中，内标是rnase p。
9、进一步地，本专利技术组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
10、在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用atto425、quasar705、fam、hex、rox和cy5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
11、在一些具体的实施方案中，乳杆菌探针的荧光报告基团为fam；普雷沃氏菌探针的荧光报告基团为hex(或vic)；阴道阿托波氏菌探针的荧光报告基团为rox；阴道嗜血杆菌探针的荧光报告基团为cy5。
12、进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物和探针对中的一对或多对。在本专利技术中，“对”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
13、本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应4个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
14、举例来说，可以包括上述4对引物和探针中的任意3对，可以包括上述4对引物和探针中的任意2对，也可以包括上述4对引物和探针中的任意1对。
15、在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光pcr。
16、进一步地，探针的3’末端还具有非荧光淬灭剂。
17、进一步地，探针的3’末端还具有淬灭基团，例如bhq1或bhq2。
18、在一个具体的实施方案中，探针的3’末端为bhq1。
19、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分分别存在于单独包装中。
20、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分存在于同一个包装中。
21、进一步地，本专利技术的组合物的各成分以混合的形式存在。
22、第二方面，本专利技术提供了上述本专利技术的组合物在制备检测阴道炎相关病原体的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为乳杆菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌和/或阴道嗜血杆菌。
23、第三方面，本专利技术提供了一种检测阴道炎相关病原体的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述本专利技术的组合物。
24、进一步地，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
25、在一个具体的实施方案中，阴性质控品是depc h2o、生理盐水中的至少一种。阳性质控品是乳杆菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌、阴道嗜血杆菌的片段质粒或阳性菌株中的至少一种。
26、进一步地，所述试剂盒还包括dntp、pcr缓冲液以及mg2+中的至少一种。
27、更进一步地，所述试剂盒还包括：核酸释放试剂、核酸提取试剂，以及dna聚合酶中的至少一种。
28、更进一步地，所述试剂盒还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、dntp、dutp、尿嘧啶糖基化酶(udg)、dna聚合酶、pcr缓冲液以及mg2+中的至少一种。
29、进一步地，所述dna聚合酶的浓度为3u/反应～15u/反应，例如dna聚合酶可以是taq酶。
30、在一个具体的实施方案中，本专利技术试剂盒包括taq酶、udg酶、mg2+、dntp(u)s、引物、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测阴道炎相关病原体的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌的荧光报告基团为FAM；普雷沃氏菌的荧光报告基团为HEX或VIC；阴道阿托波氏菌的荧光报告基团为ROX；阴道嗜血杆菌探针的荧光报告基团为CY5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物在制备检测阴道炎相关病原体的试剂盒中的用途，其中，所述病原体为乳杆菌、普雷沃氏菌、阴道阿托波氏菌和/或阴道嗜血杆菌。
7.一种检测阴道炎相关病原体的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～5中任一项所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
9.根据权利要求7或8所述
10.一种组合物用于制备检测阴道炎相关病原体的试剂的用途，所述检测包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测阴道炎相关病原体的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌的荧光报告基团为fam；普雷沃氏菌的荧光报告基团为hex或vic；阴道阿托波氏菌的荧光报告基团为rox；阴道嗜血杆菌探针的荧光报告基团为cy5。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
6.根据权利要求1～5中任...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗磊，刘佩珊，任小梅，吴康，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。