【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物繁殖，具体地，涉及颗粒细胞的外泌体及相关mirna在哺乳动物卵母细胞体外培养中的应用。
技术介绍
1、卵巢是雌性哺乳动物生殖系统中的核心器官，卵泡是卵巢的基本功能单位，成熟的卵泡由卵母细胞、颗粒细胞(granulosa cells，gcs)、卵丘细胞、卵泡膜细胞和卵泡液组成。卵母细胞的健康发育对动物的发情、排卵等繁殖性能有重要作用。
2、雌性哺乳动物一生中体内卵母细胞的数量是有限的，并且卵母细胞的质量受到年龄、健康、环境等因素的影响。现有技术通过卵母细胞的体外培养来保存高质量的卵母细胞，提升卵母细胞的利用率，并进一步利用开展体外胚胎技术来满足哺乳动物的繁育需求。但与体内发育的卵母细胞相比，体外培养的卵母细胞质量较差，成熟率较低，且更易遭受到氧化应激损伤，导致后续的人工授精和胚胎培养受到影响，使得体外受精率降低，囊胚的产量和质量也受到影响。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中利用体外培养技术培养的卵母细胞存在成熟率低、质量差和易受氧化应激损伤的问题，本专利技术提供了颗粒细胞的外泌体及相关mirna在哺乳动物卵母细胞体外培养中的应用。
2、本专利技术的第一个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外培养中的应用。
3、本专利技术的第二个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外发育中的应用。
4、本专利技术的第三个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirn
5、本专利技术的第四个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的卵丘卵母细胞复合物的体外培养中的应用。
6、本专利技术的第五个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的人工授精中的应用。
7、本专利技术的第六个目的是提供颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的体外胚胎培育中的应用。
8、本专利技术的第七个目的是提供一种用于哺乳动物卵母细胞的体外培养的产品。
9、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
10、本专利技术提出颗粒细胞能分泌外泌体，且颗粒细胞来源的外泌体能被cocs所摄取进而发挥作用，在卵母细胞体外成熟培养液中添加颗粒细胞来源的外泌体可以显著提高卵丘扩张指数，促进卵丘扩张，提高卵母细胞的成熟率，还可以减少卵母细胞的氧化应激水平，提高线粒体膜电位，进而提高卵母细胞的发育水平和质量。此外，颗粒细胞来源的外泌体还能抑制颗粒细胞的增殖并提升雌激素的分泌能力。
11、通过对颗粒细胞来源的外泌体进行测序，确定外泌体中的mir-148a-3p是发挥主要作用的调控因子，过表达mir-148a-3p mimics与添加颗粒细胞外泌体产生的效果一致。这表明外泌体是通过其内的mir-148a-3p进而调控颗粒细胞雌激素的合成，对卵母细胞发挥作用。
12、本专利技术请求保护以下内容：
13、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外培养中的应用。
14、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外发育中的应用。
15、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外成熟中的应用。
16、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的卵丘卵母细胞复合物的体外培养中的应用，所述卵丘卵母细胞复合物包含卵母细胞、卵丘细胞和/或颗粒细胞。
17、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的人工授精中的应用。
18、颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的体外胚胎培育中的应用。
19、对于任一所述的应用，优选地，所述哺乳动物为偶蹄目动物。
20、更优选地，所述偶蹄目动物为猪。
21、进一步优选地，所述颗粒细胞的供体动物为猪。
22、进一步优选地，所述外泌体和/或外泌体mirna的受体动物为猪。
23、优选地，所述外泌体mirna为mir-148a-3p。
24、更优选地，所述mir-148a-3p的核苷酸序列如seq id no.23所示。
25、促进颗粒细胞分泌外泌体的试剂在哺乳动物卵母细胞的体外培养、卵母细胞的体外发育、卵母细胞的体外成熟、卵丘卵母细胞复合物的体外培养、人工授精和/或体外胚胎培育中的应用，也应在本专利技术的保护范围之内。
26、促进所述mir-148a-3p表达的试剂在哺乳动物卵母细胞的体外培养、卵母细胞的体外发育、卵母细胞的体外成熟、卵丘卵母细胞复合物的体外培养、人工授精和/或体外胚胎培育中的应用，也应在本专利技术的保护范围之内。
27、所述mir-148a-3p的模拟物在哺乳动物卵母细胞的体外培养、卵母细胞的体外发育、卵母细胞的体外成熟、卵丘卵母细胞复合物的体外培养、人工授精和/或体外胚胎培育中的应用，也应在本专利技术的保护范围之内。
28、优选地，所述mir-148a-3p的模拟物包括mir-148a-3p的mimics。
29、更优选地，所述mir-148a-3p的mimics的正向序列的核苷酸序列如seq id no.23所示，反向序列的核苷酸序列如seq id no.24所示。
30、优选地，优选地，所述哺乳动物为偶蹄目动物。
31、更优选地，所述偶蹄目动物为猪。
32、进一步优选地，所述颗粒细胞的供体动物为猪。
33、进一步优选地，所述外泌体和/或外泌体mirna的受体动物为猪。
34、一种用于哺乳动物卵母细胞的体外培养的产品，包括颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna。
35、优选地，所述哺乳动物为偶蹄目动物。
36、更优选地，所述偶蹄目动物为猪。
37、进一步优选地，所述颗粒细胞的供体动物为猪。
38、进一步优选地，所述外泌体和/或外泌体mirna的受体动物为猪。
39、优选地，所述外泌体mirna为mir-148a-3p。
40、更优选地，所述mir-148a-3p的核苷酸序列如seq id no.23所示。
41、更优选地，还包括所述mir-148a-3p的模拟物。
42、进一步优选地，所述mir-148a-3p的模拟物包括mir-148a-3p的mimics。
43、更进一步优选地，所述mir-148a-3p的mimics的正向序列的核苷酸序列如seq idno.23所示，反向序列的核苷酸序列如seq id no.24所示。
44、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
45、本专利技术提供的颗粒细胞外泌体和外泌体mirna对于哺乳动物的体外培养具有重要的影响，一方面能够促进卵母细胞的发育和成熟，减少ros，提升线粒体膜本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物卵母细胞的体外培养中的应用。
2.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物卵母细胞的体外发育中的应用。
3.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物卵母细胞的体外成熟中的应用。
4.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物的卵丘卵母细胞复合物的体外培养中的应用。
5.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物的人工授精中的应用。
6.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA在哺乳动物的体外胚胎培育中的应用。
7.根据权利要求1～6任一项所述的应用，其特征在于，所述外泌体miRNA为miR-148a-3p。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述miR-148a-3p的核苷酸序列如SEQ IDNO.23所示。
9.一种用于哺乳动物卵母细胞的体外培养的产品，其特征在于，包括颗粒细胞的外泌体和/或外泌体miRNA。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，所述外泌体miRNA为miR-14
...【技术特征摘要】
1.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外培养中的应用。
2.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外发育中的应用。
3.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物卵母细胞的体外成熟中的应用。
4.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的卵丘卵母细胞复合物的体外培养中的应用。
5.颗粒细胞的外泌体和/或外泌体mirna在哺乳动物的人工授精中的应用。
6.颗粒细胞的外泌体和/或外泌...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴珍芳，洪林君，任佳杰，石俊松，顾婷，蔡更元，李紫聪，郑恩琴，徐铮，黄思秀，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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