【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、阿尔茨海默病(ad)是发生于老年和老年前期以进行性认知功能障碍和行为损害为临床症状的中枢神经系统退行性病变。ad是最常见的痴呆类型之一，也是老年人死亡的重要原因，给家庭和社会带来巨大的经济压力。ad从病理改变到临床症状出现周期跨度较久。在临床前期，患者认知功能正常，但病理实际已发生改变，最早可发生在临床症状出现的20年前。因此，寻找标志物在ad临床前期进行早期诊断和早期干预具有重要意义。
2、已有大量的研究表明，胶质纤维酸性蛋白(gfap)反映了胶质细胞活化的过程，从ad临床前阶段就已经显著升高，能够准确识别ad不同临床阶段和鉴别ad痴呆与非ad痴呆，且可用于预测ad临床进展，是ad早期诊断和发病预测的潜在新生物标志物。由于血浆中gfap的含量偏低，酶联免疫法和化学发光法难以测出，目前临床检测多采用以超敏的单分子免疫阵列技术法，然而该法的单次检测费用高、依赖昂贵仪器限制其在基层医院的推广应用，因此仍需进一步探索更低成本、便携、易推广的检测手段。
3、适配体是通过指数富集的配体系统进化技术(systematic elution ofligandsby exponential enrichment，selex)在体外筛选的寡核苷酸序列，能够与特定靶标结合，包括小分子、蛋白质，甚至整个细胞。适配体具有类似抗体结合识别功能，被称为“化学抗体”。此外，适配体与抗体相比具有许多明显的优势，包括易于合成、易于化学修饰、稳定性好、低毒性
技术实现思路
1、(一)要解决的技术问题鉴于现有技术的上述缺点、不足，本专利技术提供一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体筛选方法，该核酸适配体与胶质纤维酸性蛋白具有较强的亲和力和特异性，可用于高效的检测胶质纤维酸性蛋白；
2、相应地，本专利技术还提供一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体的筛选方法。
3、相应地，本专利技术还提供一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体作为检测试剂等用于胶质纤维酸性蛋白的检测及联合其他指标提高阿尔茨海默症的早期诊断率。
4、即本专利技术还提供所述核酸适配体在制备检测胶质纤维酸性蛋白的产品中的应用、在建立胶质纤维酸性蛋白的检测方法中的应用。
5、(二)技术方案
6、为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：
7、第一方面，本专利技术提供一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其核苷酸序列为：5’-ttcagcactccacgcatagctcagtcaggggggctgctcgggattgcggatacggacctatgcgtgctaccgtgaa-3’(如seq id no.1所示)，所示核苷酸序列中，方向为5’-3’。
8、所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，对所述核酸适配体的5’端或3’端进行荧光基团、巯基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化学修饰。
9、所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，在25℃，[na+]＝137mm，[mg2+]＝0.85mm的条件下，所述核酸适配体的空间结构分别如下：
10、
11、第二方面，本专利技术提供上述胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体的筛选方法，其包括以下步骤：
12、s1设计上游引物、下游引物，合成相应的随机文库；
13、s2反靶蛋白与羧基磁珠孵育偶联制得反筛磁珠；
14、靶蛋白与羧基磁珠孵育偶联制得正筛磁珠；
15、s3以随机文库作为初始文库，进行8～20轮的筛选获得所述核酸适配体；
16、第一轮以初始文库仅进行正筛磁珠的正筛；
17、第二轮以上的筛选均以前一轮筛选后的单链次级文库先与反筛蛋白孵育，完成反筛；再与靶标蛋白孵育，完成正筛。
18、第三方面，本专利技术还提供所述核酸适配体在制备检测胶质纤维酸性蛋白的试剂、试剂盒或传感器中的应用。
19、所述的核酸适配体在制备检测胶质纤维酸性蛋白的探针中的应用。
20、所述探针为对所述核酸适配体5’端修饰荧光基团后形成或修饰巯基基团形成。
21、所述的核酸适配体在建立胶质纤维酸性蛋白的检测方法中的应用。
22、所述检测方法为比色快速检测法。该方法建立时可以对所述核酸适配体的5’端修饰巯基，然后5’端修饰巯基的核酸适配体与金纳米粒子偶联，催化tmb显色。
23、所述检测方法还可以为荧光分析法。
24、对所述核酸适配体5’端修饰荧光基团，建立荧光分析法。
25、所述荧光基团为fam基团。
26、(三)有益效果
27、本专利技术提供的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其弥补了胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体领域的空白，其对胶质纤维酸性蛋白有良好的亲和力和特异性；其可在检测胶质纤维酸性蛋白的方法或相应的试剂盒中应用，具体的可制成分子探针、作为检测试剂等用于胶质纤维酸性蛋白的检测及与其他指标联合提高阿尔茨海默症的早期诊断率。
28、其中，本专利技术提供的胶质纤维酸性蛋白适配体，可人工合成，成本低、生产周期短，易于化学修饰；
29、本专利技术提供的筛选方法其方法简便，筛选的文库具有较高的保留率。
30、本专利技术所提供的胶质纤维酸性蛋白适配体用于检测胶质纤维酸性蛋白具有较高的灵敏度、特异性和准确性。
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1.一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：其核苷酸序列为：5’-TTCAGCACTCCACGCATAGCTCAGTCAGGGGGGCTGCTCGGGATTGC GGATACGGACCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’。
2.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：在25℃，[Na+]＝137mM，[Mg2+]＝0.85mM的条件下，所述核酸适配体的空间结构分别如下：
3.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：对所述核酸适配体的5’端或3’端进行荧光基团、巯基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化学修饰。
4.如权利要求1-3任意一项所述的核酸适配体在制备检测胶质纤维酸性蛋白的试剂、试剂盒或传感器中的应用。
5.如权利要求1-3任意一项所述的核酸适配体在制备检测胶质纤维酸性蛋白的探针中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述探针为对所述核酸适配体5’端修饰荧光基团后形成或修饰巯基基团形成。
7.如权利要求1所述的核酸适配体在建立胶质纤维酸性
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述检测方法为比色快速检测法。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述检测方法为荧光分析法。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：对所述核酸适配体5’端修饰荧光基团，建立荧光分析法。
...【技术特征摘要】
1.一种胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：其核苷酸序列为：5’-ttcagcactccacgcatagctcagtcaggggggctgctcgggattgc ggatacggacctatgcgtgctaccgtgaa-3’。
2.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：在25℃，[na+]＝137mm，[mg2+]＝0.85mm的条件下，所述核酸适配体的空间结构分别如下：
3.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白的核酸适配体，其特征在于：对所述核酸适配体的5’端或3’端进行荧光基团、巯基、氨基、生物素、地高辛或聚乙二醇化学修饰。
4.如权利要求1-3任意一项所述的核酸适配体...
【专利技术属性】
技术研发人员：张胜行，曹越，陈莉，王水良，邱抒倩，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院，
类型：发明
国别省市：
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