【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及不同类型立克次体并分型的检测，更具体地，涉及恙虫病立克次体、伯纳特立克次体、五日热巴尔通体和普氏立克次体的检测。
技术介绍
1、恙虫病又名丛林斑疹伤寒，是由恙虫病立克次体(orientia tsutsugamushi，ot)引起的自然疫源性疾病。啮齿类为主要传染源，恙螨幼虫为传播媒介。临床特征为突然起病、发热、叮咬处有焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹。由于该病与其他热性病临床症状相似，且对常规青霉素类等抗生素不敏感，加上目前医院普遍未建立针对该病的特异性检测方法，临床上极易造成误诊，导致延误治疗甚至死亡。
2、q热，亦称寇热，是由伯纳特立克次体(coxiella burneti，cb)引起的急性自然疫源性传染病。q热是一种全世界广泛分布的重要人兽共患病。蜱、野生动物、禽类等均可为贝氏柯克斯体的宿主。临床上，急性q热主要表现为发热、头痛、肌肉酸疼，常伴有肺炎、肝炎等；慢性q热表现为长期持续或反复发热，常伴有心内膜炎、慢性肝炎、骨髓炎等，病死率高达60％。四环素族及氯霉素对本病有特效，但q热仍会引起相应的并发症，应尽快治疗，以免延误最佳治疗期。
3、战壕热，又称五日热或华伦热，该病是由携带五日热巴尔通体(bartonellaquintana，bq)的体虱叮咬而传播的一种急性传染性疾病。临床主要表现为畏寒、发热、剧烈头痛、肌肉疼痛、眼球痛、脾脏肿大和部分患者出现充血性斑丘疹，对人体健康危害较大。
4、流行性斑疹伤寒又称虱传斑疹伤寒，是由普氏立克次体(rick
5、进入夏秋季，雨水较多，恙虫病比较流行，人群普遍易感，特别是在田间劳作的人，野外作业人员，野外训练人员和野外露营者受恙螨侵袭机会较多，容易发生感染，如果与携带贝氏柯克斯体的牛羊等牲畜有过密切接触，感染q热的风险大大增加，现今进入深山老林与大漠戈壁巡逻执勤、勘探、旅游及各种从业活动仍有感染战壕热的风险。流行性斑疹伤寒多发生于寒冷地区的冬、春季节。由于气候寒冷，人们衣着较厚，且少换洗，这有利于虱的寄生和繁殖。战争、灾荒和群体个人卫生差的情况下，人虱繁殖的机会增加，容易导致流行。上述四种立克次体病原体致病后具有发热、头疼，重症患者表现为心肌炎、脑炎等相似的临床症状和流行特征，通过临床症状和血常规等实验室检测很难鉴别确定所感染的病原体种类，在临床上很难鉴别诊断，给及时预防和治疗带来很大的困难。
6、因此，本领域需求一种产品能够简单、快速地检测上述不同的病原体，以便为临床医生提供较为充分的快速诊断以及排除不同病原体感染的依据，缩短临床医生对患者病情诊断的时间，加快对患者实施治疗措施，并且灵敏度高，特异性好。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种立克次体检测并分型的组合物，包括：
2、如seq id no:1～3所示的检测恙虫病立克次体的上游引物、下游引物及探针；
3、如seq id no:4～6所示的检测伯纳特立克次体的上游引物、下游引物及探针；以及
4、如seq id no:7～9所示的检测五日热巴尔通体的上游引物、下游引物及探针。
5、进一步地，所述组合物还包括如seq id no:10～12所示的检测普氏立克次体的上游引物、下游引物及探针。
6、本专利技术提供的联检的组合物，主要利用多重荧光pcr分析方法，通过检测不同靶点，对不同类型的病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实恙虫病立克次体、伯纳特立克次体、五日热巴尔通体、普氏立克次体的检测和区分，以便为后续治疗提供针对性的策略。本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到400拷贝/ml，特异性好，检测更为准确。
7、进一步地，所述组合物包括检测内标的上游引物、下游引物及探针。
8、在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。在一个具体的实施方案中，内标是icon。
9、在一个具体的实施方案中，所述组合物还包括如seq id no:13～15所示的检测内标的上游引物、下游引物及探针。
10、具体地，上游引物序列seq id no:13为cgcaatacctccggattcc，下游引物序列seqid no:14为tccgcagaggcactgagtt，探针序列seq id no:15为aacaggtcgctgcatggctggaa。
11、进一步地，本专利技术组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
12、在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用atto425、quasar705、fam、hex、rox和cy5，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
13、在一些具体的实施方案中，恙虫病立克次体探针的荧光报告基团为fam；伯纳特立克次体探针的荧光报告基团为rox；五日热巴尔通体探针的荧光报告基团为cy5；普氏立克次体的荧光报告基团为hex。
14、进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物和探针对中的一对或多对。在本专利技术中，“对”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
15、本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应5个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
16、举例来说，上述5对引物和探针中的任意4对，上述5对引物和探针中的任意3对，可以包括上述5对引物和探针中的任意2对，也可以包括上述5对引物和探针中的任意1对。
17、在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光pcr。
18、进一步地，探针的3’末端还具有非荧光淬灭剂。
19、进一步地，探针的3’末端还具有淬灭基团，例如bhq1或bhq2。
20、在一个具体的实施方案中，探针的3’末端为bhq1。
21、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分分别存在于单独包装中。
22、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分存在于同一个包装中。
23、进一步地，本专利技术的组合物的各成分以混合的形式存在。
24、第二方面，本专利技术提供了上述本专利技术的组合物在制备立克次体检测并分型的试剂盒中的用途。
25、第三方面，本专利技术提供了一种检测立克次体并分型的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述本专利技术的组合物。
26、进一步地，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
27、在一个具体的实施方案中，阴性质控品是dep本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种立克次体检测并分型的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括如SEQ ID NO:10～12所示的检测普氏立克次氏体的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述恙虫病立克次体探针的荧光报告基团为FAM；伯纳特立克次体探针的荧光报告基团为ROX；五日热巴尔通体探针的荧光报告基团为CY5；普氏立克次氏体的荧光报告基团为HEX。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物在制备检测立克次体并分型的试剂盒中的用途。
7.一种检测立克次体并分型的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～5中任一项所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在
10.一种组合物用于制备立克次体检测并分型的试剂的用途，所述检测包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种立克次体检测并分型的组合物，包括：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括如seq id no:10～12所示的检测普氏立克次氏体的上游引物、下游引物及探针。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述恙虫病立克次体探针的荧光报告基团为fam；伯纳特立克次体探针的荧光报告基团为rox；五日热巴尔通体探针的荧光报告基团为cy5；普氏立克次氏体的荧光报告基团为hex。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄少亚，苏静明，林娇阳，程星，谭德勇，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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