一种改良的双抗原夹心免疫检测法制造技术

一种改良的双抗原夹心免疫检测法，其旨在降低现有双抗原夹心检测法的假阳率，提高检测的特异性。该方法通过将抗人ＩｇＧ单克隆抗体或者多克隆抗体，以合适的使用比例加入到双抗原夹心法检测的反应体系之中参与检测，可具体应用于快速诊断、酶联免疫检测、化学发光检测等多种检测方法。本发明专利技术的双抗原夹心免疫检测法与现有双抗原夹心免疫检测法相比，检测的背景和假阳率有显著降低，特异性有大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，具体地说，是涉及一种改良的双抗原夹心 免疫检测法。
技术介绍
免疫检测是应用免疫学技术测定标本中待测物质的方法。在临床检验 中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。根据检测原理 的不同，免疫检测可以分为间接法、夹心法(包括双抗原夹心法和双抗体 夹心法)、捕获法、竞争法等。双抗原夹心法属于夹心法的一种，广泛应用于免疫检测领域。其基本 原理是用特异性抗原进行包被和制备标记结合物，通过两次免疫结合， 形成包被抗原-抗体-标记抗原复合物，完成待测抗体的检测。根据抗原标 记物及检测技术的不同，双抗原夹心法又可进一步具体应用于酶联免疫(ELISA)、快速诊断(包括基于胶体金、胶体银、胶体硒、乳胶等的快速 诊断)、放射免疫、荧光免疫等检测中。酶联免疫的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合 在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体 既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。双抗原夹心ELISA法，是双抗原 夹心免疫检测法在ELISA检测上面的一个具体应用。在测定时，受检标本 中的抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方式使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原， 也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检抗体的 量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产3物的量与标本中受检抗体的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或 定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测 定方法达到很高的敏感度。故双抗原夹心ELISA法广泛应用于传染病等项 目的抗体检测，具有灵敏度高，特异性好的特点。快速诊断检测采用胶体金、胶体银、胶体硒、乳胶等标记物，利用此 类标记物可以牢固吸附在抗原/抗体的表面而不影响抗原/抗体的活性，当 标记抗体/抗原与待测标本中的抗原/抗体反应聚集到一定浓度时，可以直 接呈现颜色，从而达到快速诊断的效果。快速诊断检测又可进一歩具体为 斑点渗滤法，免疫层析法等。免疫层析法是上世纪九十年代兴起的一种基 于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将特异的抗体/抗原先固定于 硝酸纤维膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品后，由于 毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体/抗原的区域 时，样品中相应的抗原/抗体即与该抗体/抗原发生特异性结合，若用免疫 胶体金可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。双抗原 夹心免疫层析法，是双抗原夹心免疫检测法在免疫层析检测上面的一个具 体应用，此方法检测待测样品中的目标抗体，具有迅速便捷的优势。化学发光免疫观lj定(Chemiluminescent immunoassay, CLIA)是将抗 原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检 测技术。放射免疫测定法将放射性的灵敏度与免疫的特异度相结合，既简 便准确又灵敏可靠。双抗原夹心法均可具体应用于这两种检测方法。但是，双抗原夹心法在具体实施时，常常会由于试剂、材料、环境等 因素，特别是待测样品中的一些干扰性物质会引起非特异性结合，导致有 一定程度的假阳性，影响了检测结果的可信度。常规的处理方法就是调低 包被或者标记抗原的用量，提高抗原纯度，严格控制双抗原夹心法试剂盒 材料的质量等方面去缓解。但是调低包被或者标记抗原的用量势必会降低 检测的灵敏度，提高抗原纯度也不可能使抗原纯度达到百分之百，试剂盒 材料的质量也不是自己可以随意可调控的因素。因此双抗原夹心法检测目4的抗体时，背景过高以及假阳率高始终是一个难以解决的问题。为此，必须寻求一种方法来降低双抗原夹心法的背景和假阳率，提高 检测的特异性。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术的目的就是为了提供一种改良的双抗原夹心免疫检测法，降低 检测的背景和假阳率，提高检测的特异性。 技术方案在双抗原夹心法检测样品时，有多种因素可能导致假阳，包括操作员， 待测样品本身含有的干扰性物质，试剂盒所采用的抗原抗体以及其它辅料 等等因素。在这些因素当中，检测中由于样品含有的干扰性物质的非特异 性结合是引起假阳的重要因素。非特异性结合的是指在待测样品中除待测抗体以外的其他物质与包 被抗原或者检测系统中的固相支持物结合，使得检测结果为假阳。为了减少和降低这种非特异性结合，本专利技术将抗人IgG加入到检测体 系中，利用抗人IgG的非特异性结合特性，使其与待测样品中的其他蛋白 或者抗体产生非特异性的结合，由于这种结合将对两者的空间构象产生影 响，增大了非待测抗体与包被抗原或者标记抗原产生非特异性结合的空间 位阻，降低了结合的几率，从而降低了由于非特异性结合的干扰带来的假 阳。而对于待测抗体，由于抗原抗体间的结合是特异性的，抗人IgG即使 结合到待测抗体上，对灵敏度的影响不大(可参看实施例中的具体试验数 据)。进一步具体来说，本专利技术将抗人IgG单克隆抗体或者多克隆抗体，以 合适的使用比例加入到双抗原夹心法检测的反应体系之中，例如将抗人IgG 单克隆抗体或者多克隆抗体加入到ELISA检测法的样品稀释液、免疫层析 检测法的加样垫或者标记物垫上，按照免疫层析试剂盒的一般结构组装成双抗原夹心法检测试剂盒。因此，本专利技术提供一种改良的双抗原夹心免疫检测法，此方法在双抗 原夹心法的反应体系中加有抗人IgG抗体。通过抗人IgG在检测体系中的 作用，尤其是抗人IgG抗体与检测体系中各种成分的复合作用的综合影响， 达到最终降低假阳的效果。本专利技术中利用的抗人IgG经验证可以是单克隆抗体，多克隆抗体。 通过一系列的实验证明了抗人IgG在双抗原夹心法中具有普遍适应性。本专利技术可以应用于酶联免疫法、快速检测法、放射免疫检测法、荧光 免疫检测法等，相应的，其标记物可以是酶、胶体金、胶体银、胶体硒、 乳胶、化学发光物质、荧光物质、放射性物质。更进一歩，本专利技术公开了该方法在快速诊断检测中的应用。可将抗人IgG抗体加入加样垫或标记物垫。相应的，本专利技术公开了上述方法制备的快速诊断检测试剂盒，由PVC 底板、加样垫、标记物垫、NC膜、吸水纸、对照线和检测线组成，在加样 垫或者标记物垫中含有抗人IgG抗体。此外，本专利技术还公开了该方法在酶联免疫检测上的应用，具体可将抗 人工gG抗体加入样品稀释液中。相应的，本专利技术公开了上述方法制备的酶联免疫检测试剂盒，由多孔 板、样品稀释液、酶结合物稀释液、显色液组成，在样品稀释液中加有抗 人IgG抗体。实施例的数据证明了抗人IgG在双抗原夹心法的应用可以在不影响检 测灵敏度的条件下，降低检测系统中由非特异性结合干扰所带来的假阳， 保证检测的准确度。本专利技术的详细技术方案，将在以下的实施例中进行说明。实施例以双 抗原夹心法检测丙型肝炎病毒(H印atitis C Virus, HCV)抗体和梅毒螺 旋体(Tr印onema Pallidum, TP)抗体为例详细阐述，对于其它项目的双 抗原夹心法，本领域的普通技术人员可以以此类推。需要说明的是，在现有技术中，采用捕获法测定特异IgM时，也有人 在样品稀释液中加入抗人IgG抗体。之所以加入抗人IgG抗体，是因为样品中的IgG抗体会跟待测IgM抗体竞争性的结合抗原标记物，导致本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双抗原夹心免疫检测法，其特征在于反应体系中加有抗人ＩｇＧ抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：颜文豪，潘少丽，洪娟，彭亮，王宁燕，王荣娥，孙兴宝，孙婧，胡鹏，
申请(专利权)人：深圳市菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]