甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，包括底板，底板上依次粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫，所述的胶体金垫上附着有胶体金标记的抗甲型肝炎病毒抗原的多克隆抗体或第一单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被有由抗甲型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗体构成的检测线以及由抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体的二抗抗体构成的质控线，所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体与所述的第二单克隆抗体相配对。本发明专利技术试纸条采用胶体金标记技术，检测唾液中的甲型肝炎病毒抗原成分，从而判断是否感染甲肝病毒，具有操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和自检、经济实用等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物应用
，特别是涉及一种曱型肝炎病毒抗原唾 液快速检测试纸条。
技术介绍
曱型肝炎(简称曱肝)是由曱肝病毒(HAV )引起的一种病毒性肝炎， 主要是经粪口传播途径感染，即由病人的潜伏期或急性期粪便、血液中的 曱肝病毒污染水源、食物、用具及生活密切接触经口进入胃肠道而传播。 曱肝病毒对各种外界因素有较强的抵抗力而能长期在外界环境中存活，能 通过各种污染物品(手、日常用品、衣物、被单等)以及水和食物传播， 也可经苍蝇携带而传播。曱型肝炎传染源通常是急性患者和亚临床感染者，病人自潜伏末期至 发病后10天传染性最大，粪-口途径是其主要传播途径，水、食物是爆发 性的主查方式，日常生活接触是散发病例的主要传播途径。有报道曱型肝 炎亦可通过血液传播和垂直传播(国外医学流传分册1994),尚待进一步研 咒。甲肝主要是经由不洁饮食以及喝生水等途径而感染的，曱肝病毒主要 以人体、猕猴、人猿等灵长类动物为宿主，潜伏期大约为2-6星期在感 染一个星期内，还可以在粪便中找到病毒的颗粒；而受感染个体就好像得 了一场感冒似的，某些个体可能出现高烧，或者食欲不振，全身倦怠等非 特异性的症状；少数可能出现茶色尿或被告知有黄疽的现象。目前，检测以上传染病最常用的方法是免疫4全测，此方法以抗原一抗 体的特异性识别为基础，包括传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)和近来兴 起的胶体金法两种。胶体金法分为免疫层析和免疫渗滤两种方式，其中以 免疫层析法最为方便、快捷。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，已得到较为广泛的应用，基 本原理如下利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试纸条的硝酸纤维素膜4上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含有相应的特异性抗体或 抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在硝酸纤 维素膜上层析，再被包被的抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测线(T 线)，通过检测线的有无实现对结果的判定。现有的试纸条均是血液为样 品，操作复杂，不能够自检，检测成本较高。
技术实现思路
本专利技术提供了 一种曱型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，该试纸条 可以用唾液作为样品，解决了现有试纸条不适合现场;险测，4企测成本较高 的问题。一种曱型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，包括底板，底板上依次 粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫，所述的胶体金垫上 附着有胶体金标记的抗曱型肝炎病毒抗原的多克隆抗体或第 一单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被有由抗甲型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗 体构成的检测线以及由抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体的二抗抗 体构成的质控线，所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体与所述的第二单克 隆抗体相配对。上述试纸条与传统的免疫层析检测试纸条的检测原理相同，上述多克 隆抗体与第二单克隆抗体配对是指多克隆抗体中的所有抗体和第二单克隆抗体与曱型肝炎病毒抗原的不同抗原决定簇结合，上述第一单克隆抗体 与第二单克隆抗体相配对是指两者与甲型肝炎病毒抗原的不同抗原决定簇结合。所述的胶体金垫上附着有0.15 ~ 0.45昭/cm2的胶体金标记的抗曱型肝 炎病毒抗原的多克隆抗体或第一单克隆抗体，在该浓度范围内，可以和大 多数患者唾液中的待测抗原含量相匹配。所述的胶体金垫通过如下方法制备取胶体直径为15 ~ 35nm的胶体金溶液，调节pH值至8.0 ~ 8.2，按每 100ml胶体金溶液加入0.75 ~ l.Omg的抗曱型肝炎病毒抗原的多克隆抗体 或第一单克隆抗体，搅拌后用牛血清蛋白封闭，离心去上清液，加入相同 体积的胶体金溶液复溶,将每毫升溶液均匀铺在22 ~ 50cm"玻璃纤维膜上， 干燥后制得胶体金垫。所述的检测线中抗曱型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗体含量为0.05~ l.Opg/cm;所述的质控线中抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体 的二抗抗体含量为0.05~ 1.0|xg/cm。在该浓度下，正好可以和大多数唾液 中的抗原相匹配。所述的检测线和质控线包被方法如下取浓度为0.01mol/L、 pH为8.0的磷酸緩冲溶液，将抗曱型肝炎病毒 抗原的第二单克隆抗体和抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体的二抗 抗体分别溶解在磷酸緩冲溶液中制得浓度均为0.05~ 1.0mg/ml的两种溶 液，将该两种溶液以1 ~ 1.5nl/cm的参数分别在硝酸纤维素膜两端划线， 干燥后即得检测线和质控线。所述的试纸条的宽度为2.5 ~ 6mm。本专利技术还提供了一种上述试纸条的检测方法，包括以下步骤取人唾 液，用磷酸緩冲溶液稀释，取50~ 100pl稀释后的唾液滴在样品垫上，根 据^r测线(T线)和质控线(C线)的显色状态，判断^^测结果。如C、 T线均出现，判定样品为阳性；C线出现，T线不出现，判定 样品为阴性；C、 T线都不出现或者C线不出现T线出现，均判定试纸无 效。本专利技术试纸条采用胶体金标记技术，才企测唾液中的曱型肝炎病毒抗原 成分，从而判断是否感染曱肝病毒，具有操作简单、反应快速、敏感性高、 特异性强、适合现场检测和自检、经济实用等优点。具体实施方式 实施例1 胶体金垫的制备以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径15nm的胶体金溶液，制备完成 后取100ml胶体金溶液于烧杯内，用O.IM K2C03调至pH8.0，按100ml 胶体金溶液加入0.75mg相应抗曱型肝炎病毒抗原的多克隆抗体(上海领 潮生物科技有限公司)，室温搅拌1小时，加入重量百分比为5%的牛血清 白蛋白(BSA)封闭1小时，12000rpm、 4。C离心30分钟，弃上清，用胶 体金溶液复溶至100ml,按lml溶液铺22cm2的比例，将溶液均匀地铺在 玻璃纤维膜上，37'C干燥30分钟，制成胶体金垫。6硝酸纤维素膜的包被将抗曱型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗体(上海领潮生物科技有限公 司)以及抗上述多克隆抗体的二抗抗体(羊抗鼠、上海领潮生物科技有限公司)溶解在0.01M、 pH8.0磷酸緩冲液(PBS )配制成0.05mg/ml的溶 液，用喷膜仪分别在硝酸纤维素膜两端以1.5lil/cm的参数进行划线，包被 T线和C线，划线后将硝酸纤维素膜在室温干燥8小时。上述抗曱型肝炎病毒抗原的多克隆抗体与第二单克隆抗体相配对。检测试纸的组装在干燥室内，温度20~25°C,湿度小于30%，将样品垫(玻璃纤维 膜)、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫(吸水试纸)粘贴在底板上， 其中硝酸纤维素膜位于底板中部，硝酸纤维素膜包被有T线的一端与胶体 金垫的1/3搭接，包被有C线的一端与吸样垫的1/10搭接，样品垫与胶体 金垫的1/5搭接。最后切成宽度为2.5mm的试纸条，也可将试纸条装入一 个塑料卡中制成检测卡。实施例2 胶体金垫的制备以氯金酸_柠檬酸三钠还原法制备直径35nm的胶体金溶液，制备完 成后取100ml胶体金溶液于烧杯内，用0.1M K2C03调至pH8.2,向胶体 金溶液加入lmg相应抗曱型肝炎病毒抗原的第一单克隆抗体(上海领潮生 物科技有限公司)，室温搅拌1小时，加入重量百分比为5%的牛血清白蛋 白(BSA)封闭1小时，12000rpm、 4。C离心30分钟，弃上清，用胶体金 稀释液复溶至100ml，按lml溶液铺50cm2的比例，将溶液均匀的铺在玻 璃纤维膜上，37。C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，包括底板，底板上依次粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫，其特征在于：所述的胶体金垫上附着有胶体金标记的抗甲型肝炎病毒抗原的多克隆抗体或第一单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被有由抗甲型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗体构成的检测线以及由抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体的二抗抗体构成的质控线，所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体与所述的第二单克隆抗体相配对。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑隆泗，李洪江，
申请(专利权)人：杭州艾力康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]