草鱼呼肠孤病毒基因诊断试剂盒及其应用制造技术

一种草鱼呼肠孤病毒基因诊断试剂盒，包括：１．内脏组织中病毒ＲＮＡ提取试剂：ＤＥＰＣ水；蛋白酶Ｋ（１ｍｇ／ｍＬ，ｐＨ８．０）；ＳＤＳ（１％）；酚／氯仿／异戊醇（２５／２４／１）；氯仿／异戊醇（２４／１）；异丙醇；７０％乙醇；２．细胞感染病毒的ＲＮＡ提取试剂：Ｔｒｉｚｏｌ；氯仿；异丙醇；７０％乙醇；ＤＥＰＣ水；３．ＲＴ反应试剂成分：５×ＡＭＶ?Ｂｕｆｆｅｒ，ｄＮＴＰ，ＤＥＰＣ水，反向引物Ｒ１，ＲＮＡ酶抑制剂ＲＮＡｓｉｎ（ＲＩ），反转录酶ＡＭＶ；４．ＰＣＲ反应试剂成分：１０×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ（含Ｍｇ２＋），ｄＮＴＰＭｉｘｔｕｒｅ（各２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）；特异性寡核苷酸引物Ｆ１和引物Ｒ１；ＤＥＰＣ水和Ｔａｑ?Ｅ（５Ｕ／ｕＬ），所述正向引物Ｆ１：５’－ＡＴＣＣＣＧＴＡＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＴＴ－３’；所述反向引物Ｒ１：５’ＴＴＧＧＡＧＡＣＧＡＡＣＡＴＡＧＡＣＧＣ－３。本发明专利技术用于草鱼呼肠孤病毒基因诊断。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种草鱼呼肠孤病毒基因诊断试剂盒，其特征在于它包括：　　１）内脏组织中病毒ＲＮＡ提取试剂：ＤＥＰＣ水；蛋白酶Ｋ（１ｍｇ／ｍＬ，ｐＨ８．０）；ＳＤＳ（１％）；酚／氯仿／异戊醇（２５／２４／１）；氯仿／异戊醇（２４／１）；异丙醇；７０％乙醇；２）细胞感染病毒的ＲＮＡ提取试剂：Ｔｒｉｚｏｌ；氯仿；异丙醇；７０％乙醇；ＤＥＰＣ水；　　３）ＲＴ反应试剂成分：５×ＡＭＶ　Ｂｕｆｆｅｒ，ｄＮＴＰ，ＤＥＰＣ水，反向引物Ｒ１，ＲＮＡ酶抑制剂ＲＮＡｓｉｎ（ＲＩ），反转录酶ＡＭＶ；　　４）ＰＣＲ反应试剂成分：１０×ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ（含ｍｇ２＋），ｄＮＴＰ　Ｍｉｘｔｕｒｅ（各２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）；特异性寡核苷酸引物Ｆ１和引物Ｒ１；ＤＥＰＣ水和Ｔａｑ　Ｅ（５Ｕ／ｕＬ），所述正向引物Ｆ１：５’－ＡＴＣＣＣＧＴＡＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＴＴ－３’；所述反向引物Ｒ１：５’－ＴＴＧＧＡＧＡＣＧＡＡＣＡＴＡＧＡＣＧＣ－３

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郝贵杰，沈锦玉，潘晓艺，徐洋，姚嘉赟，尹文林，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]