动物虫媒病多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测试剂及制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域。尤其是一种能够同时鉴别检测四种动物虫媒病的试剂，以及这种试剂的制备方法和应用。本发明专利技术所述的动物虫媒病多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测试剂包含四对特异性引物，ＢＴＶ、ＥＨＤＶ、ＶＳＶ、ＡＫＶ各自的扩增目标片段长度为３５１ｂｐ、５３６ｂｐ、３００ｂｐ和２５０ｂｐ。本发明专利技术系分别选择蓝舌病病毒（ＢＴＶ）、鹿流行性出血病病毒（ＥＨＤＶ）、水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）、赤羽病病毒（ＡＫＶ）的ＶＰ７和Ｎ基因的保守片段为靶目标，应用ｐｒｉｍｅｒ？Ｅｘｐｒｅｓｓ软件和ｐｒｉｍｅｒ？ｐｒｅｒｅ５．０软件，设计合成引物。将设计的多对引物进行最佳配对筛选实验和多重ＲＴ－ＰＣＲ试验，并经过大量的反应条件优选、对比试验和验证试验，得到如上所述的可进行四种动物虫媒病鉴别检测的扩增效率高和特异性好的四对引物。本试剂所组成的试剂盒可在收到样品后６小时之内作出定性、鉴别检测结果。该多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测试剂是一种检测临床样品中ＢＴＶ、ＥＨＤＶ、ＶＳＶ、ＡＫＶ的敏感和可靠的方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种动物虫媒病多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测试剂，其特征在于包含四对特异性引物，ＢＴＶ、ＥＨＤＶ、ＶＳＶ、ＡＫＶ各自的扩增目标片段长度为３５１ｂｐ、５３６ｂｐ、３００ｂｐ和２５０ｂｐ，引物序列为：　　ＢＴＶ引物：ＢＴＶ－Ｐ１：５’－ＣＴＴＣＣＴＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡＣＣＴＴ－３’　　ＢＴＶ－Ｐ２：５’－ＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＴＣＧＣＡＴＴＣＴＧ－３’；　　ＥＨＤＶ引物：ＥＨＤＶ－Ｐ１：５’－ＣＣＡＧＡＡＴＧＴＴＡＣＴＡＣＡＴＣＡＡＴＣＧＴＡＴＣＣＴ－３’　　ＥＨＤＶ－Ｐ２：５’－ＧＧＣＧＣＣＡＡＴＡＣＧＣＴＡＡＡＧＧ－３’；　　ＶＳＶ引物：ＶＳＶ－Ｐ１：５’－ＧＧＣＴＴＣＣＣＡＴＣＴＡＣＡＴＣＣＴＡＧＧ－３’　　ＶＳＶ－Ｐ２：５’－ＴＧＣＣＣＡＡＡＴＧＴＴＧＣＡＡＧＴＧ－３’；　　ＡＫＶ引物：ＡＫＶ－Ｐ１：５’－ＣＡＡＣＧＡＴＧＴＴＣＣＡＣＡＡＣＧＧ－３’　　ＡＫＶ－Ｐ２：５’－ＧＧＣＡＧＴＧＴＣＴＧＡＣＡＣＴＧＧＡＴＴ－３’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：花群义，阮周曦，曾少灵，张彩虹，陶虹，孙洁，曹琛福，吕建强，卢体康，林庆燕，
申请(专利权)人：花群义，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]