检测牛病毒性腹泻病毒的方法逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备及其使用方法技术

检测牛病毒性腹泻病毒的方法逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备及其使用方法，它涉及反应试剂盒的制备及其使用方法。它解决了现有检测牛病毒性腹泻病毒的方法存在成本昂贵，需要专业设备及专业人员参与检测且不适于现阶段中国畜牧业发展状况的问题。方法：首先设计引物，然后配制逆转录环介导等温扩增反应液，即完成。使用方法：取含牛病毒性腹泻病毒样品的ＲＮＡ提取物，加入反应液，混合后进行逆转录环介导等温扩增反应，再离心检测；或加入１００００×ＳＹＢＲ？ＧＲＥＥＮ？Ｉ，然后置于紫外灯下检测；或进行电泳检测；或采用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ？ＰＣＲ仪进行保温反应检测。本发明专利技术反应试剂盒的检测方便，无需昂贵仪器，降低成本。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
检测牛病毒性腹泻病毒的方法逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备方法，其特征在于检测牛病毒性腹泻病毒的逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备方法按以下步骤实现：一、从基因数据库中检索所有牛病毒性腹泻病毒的基因序列，通过Ｃｌｕｓｔａｌｗ软件分析找出特异性的保守靶ＤＮＡ序列，然后利用Ｐｒｉｍｅｒ　　Ｅｘｐｌｏｒｅｒ　　４软件设计６条引物；二、根据所得的６条引物配制逆转录环介导等温扩增反应液，即完成检测牛病毒性腹泻病毒的逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备；其中步骤一中保守靶ＤＮＡ序列为：ＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＴＴＡＧＣＧＡＡＧＧＣＣＧＡＡＡＡＧＡＧＧＣＴＡＧＣＣＡＴＧＣＣＣＴＴＡＧＴＡＧＧＡＣＴＡＧＣＡＡＡＡＣＡＡＧＧＡＧＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＡＧＴＴＣＧＴＴＧＧＡＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＴＧＡＧＴＡＣＡＧＧＧＴＡＧＴＣＧＴＣＡＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＡＣＡＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＣＣＡＣＧＴＧＧＡＣＧＡＧＧＧＣＡＴＧＣＣＣＡＣＡＧＣＡＣＡＴＣＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧＴＣＧＴＴＣＡＧＧＴＧＡＡＡＡＣＧＧＴＴＴＡＡＣＣＡＡＣＣＧＣＴＡＣＧＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＴＡＧＧＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＡＴＣＧＣＴＡＣＴＡＡＡＡＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＴＧＧＣＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＧＡＴＴＡＣＡＡＡＴＧ；步骤一中６条引物分别为：　　　　名称　　序列　　　　Ｆ３　　５’－ＴＧＣＣＣＴＴＡＧＴＡＧＧＡＣＴＡＧＣＡ－３’　　　　Ｂ３　　５’－ＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＣＡＧＧＣＴＧＴＡ－３’　　　　ＦＩＰ　　５’－ＣＧＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣＧＡＣＴＡＣＣＣＴＧＴＴＴＴＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＡＧＴＴ－３’　　　　ＢＩＰ　　５’－ＣＡＡＧＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＣＣＡＣＧＴＴＴＴＴＣＣＧＴＴＴＴＣＡＣＣＴＧＡＡＣＧＡＣＣ－３’　　　　ＦＬ　　５’－ＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＧ－３’　　　　ＢＬ　　５’－ＣＡＧＣＡＣＡＴＣＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＧＧ－３’；　　　　步骤二中逆转录环介导等温扩增反应液为每２０μｌ反应液由１．９μｌ的Ｎｕｃｌｅａｓｅ－Ｆｒｅｅ水、２．５μｌ的１０×ＴｈｅｒｍｏＰｏｌ反应缓冲液、０．１μｌ的１Ｍ　　Ｍｇ↓［２］ＳＯ↓［４］、２μｌ的５Ｍ　　Ｂｅｔａｉｎｅ、４μｌ的１０ｍＭ　　ｄＮＴＰ、１μｌ的２０×ＳＹＢＲ　　ＧＲＥＥＮ　　Ｉ、１μｌ的５μＭ引...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王君伟，李岩，高明春，马波，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]