pH依赖性突变型白细胞介素-2多肽制造技术

本发明专利技术总体涉及pH依赖性突变型白细胞介素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】pH依赖性突变型白细胞介素
‑
2多肽


[0001]本专利技术一般涉及pH依赖性突变型白细胞介素
‑
2多肽。更具体地，本专利技术涉及突变型IL
‑
2多肽，其表现出用作免疫治疗剂的经改善的特性。此外，本专利技术涉及免疫缀合物SpH依赖性突变型IL
‑
2多肽或免疫缀合物，以及包含此类多核苷酸分子的载体和宿主细胞。本专利技术进一步涉及用于产生所述pH依赖性突变型IL
‑
2多肽或免疫缀合物的方法；包含所述pH依赖性突变型IL
‑
2多肽或免疫缀合物的药物组合物；以及其用途。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
2(Interleukin
‑
2，IL
‑
2)，也称为T细胞生长因子(T cell growth factor，TCGF)，是在淋巴细胞产生、存活和体内平衡中起着核心作用的15.5kDa球状糖蛋白。它具有133个氨基酸的长度并且由四个反向平行的两亲性α
‑
螺旋组成，所述四个反向平行的两亲性α
‑
螺旋形成其功能必不可少的四元结构(Smith,Science 240,1169
‑
76(1988)；Bazan,Science257,410
‑
413(1992))。来自不同物种的IL
‑
2的序列见于NCBI RefSeq号NP000577(人)、NP032392(小鼠)、NP446288(大鼠)或NP517425(黑猩猩)下。
[0003]IL
‑
2通过与IL
‑
2受体(IL
‑
2R)结合来介导其作用，所述IL
‑
2受体由至多三个单独亚基组成，所述至多三个单独亚基的不同缔合可以产生IL
‑
2亲和力不同的受体形式。α(CD25)、β(CD122)和γ(γ
c
，CD132)亚基的缔合产生高亲和力的三聚IL
‑
2受体。由β亚基和γ亚基组成的二聚IL
‑
2受体被称为中等亲和力IL
‑
2R受体。α亚基形成低亲和力的单体IL
‑
2受体。尽管中等亲和力的二聚IL
‑
2受体以比高亲和力的三聚受体低约100倍的亲和力结合IL
‑
2，但是二聚和三聚IL
‑
2受体变体都能够在IL
‑
2结合时传递信号(Minami等人，Annu Rev Immunol 11,245
‑
268(1993))。因此，α
‑
亚基CD25对IL
‑
2信号传导不是必需的。α
‑
亚基赋予与其受体的高亲和力结合，而β亚基CD122和γ亚基对信号传导至关重要(Krieg等人，Proc Natl Acad Sci 107,11906
‑
11(2010))。包含CD25的三聚IL
‑
2受体由(静息)CD4
+
叉头框P3(FoxP3)
+
调节性T(T
reg
)细胞表达。它们也在常规活化的T细胞上被瞬时诱导，而在静息状态下，这些细胞仅表达二聚IL
‑
2受体。T
reg
细胞在体内始终表达最高水平的CD25(Fontenot等人，Nature Immunol 6,1142
‑
51(2005))。
[0004]IL
‑
2主要由活化的T细胞合成，特别是由CD4
+
辅助T细胞合成。它刺激T细胞的增殖和分化、诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte，CTL)的产生和外周血淋巴细胞向细胞毒性细胞和淋巴因子激活杀伤(lymphokine
‑
activated killer，LAK)细胞的分化、促进T细胞的细胞因子和溶细胞分子表达、有助于B细胞的增殖和分化以及B细胞的免疫球蛋白合成，并刺激自然杀伤(natural killer，NK)细胞的产生、增殖和活化(例如在Waldmann,Nat Rev Immunol 6,595
‑
601(2009)；Olejniczak和Kasprzak,Med Sci Monit 14,RA179
‑
89(2008)；Malek,Annu Rev Immunol 26,453
‑
79(2008)中所综述)。
[0005]其在体内扩增淋巴细胞群并增加这些细胞的效应功能的能力赋予了IL
‑
2抗肿瘤作用，使得IL
‑
2免疫疗法成为用于某些转移性癌症的有吸引力的治疗选择。因此，高剂量IL
‑
2治疗已被批准用于患有转移性肾细胞癌和恶性黑素瘤的患者。
[0006]然而，IL
‑
2在免疫应答中具有双重功能，因为它不仅介导效应细胞的扩增和活性，而且还在维持外周免疫耐受中起关键作用。
[0007]外周自身耐受的主要机制是IL
‑
2诱导T细胞的活化诱导细胞死亡(activation
‑
induced cell death，AICD)。AICD是一种通过接合细胞表面表达的死亡受体(诸如CD95(也称为Fas))或TNF受体而使完全活化的T细胞经历程序性细胞死亡的过程。当在增殖期间表达高亲和力IL
‑
2受体(在先前暴露于IL
‑
2之后)的抗原活化的T细胞经由T细胞受体(T cell receptor，TCR)/CD3复合物而被抗原再次刺激时，Fas配体(Fas ligand，FasL)和/或肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)的表达被诱导，使得细胞对Fas介导的凋亡敏感。该过程为IL
‑
2依赖性的(Lenardo,Nature353,858
‑
61(1991))并经由STAT5介导。通过AICD在T淋巴细胞中的过程，不仅可以针对自身抗原建立耐受性，而且还可以针对明显不是宿主构成的组成部分的持久性抗原(诸如肿瘤抗原)建立耐受性。
[0008]此外，IL
‑
2还参与维持外周CD4
+
CD25
+
调节性T(T
reg
)细胞(Fontenot等人，Nature Immunol 6,1142
‑
51(2005)；D
’
Cruz和Klein，Nature Immunol 6,1152
‑
59(2005)；Maloy和Powrie，Nature Immunol 6,1171
‑
72(2005))，所述细胞还被称为抑制性T细胞。它本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种突变型白细胞介素
‑
2(IL
‑
2)多肽，其包含一个或多个氨基酸取代，各自与野生型IL
‑
2，优选根据SEQ ID NO:144的人IL
‑
2相比，其中所述一个或多个氨基酸取代在中性pH下消除或降低与IL
‑
2受体、优选与中等亲和力IL
‑
2受体(IL2Rβγ)的结合，并在降低的pH下促进与所述IL
‑
2受体、优选与所述中等亲和力IL
‑
2受体(IL2Rβγ)的结合。2.根据权利要求1所述的突变型IL
‑
2多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代位于选自与根据SEQ ID NO:144的人IL
‑
2的残基6、8、11、12、13、15、16、19、20、22、23、81、84、87、91、95、120、123、126、130、133对应的位置的组的位置处。3.根据权利要求1或2所述的突变型IL
‑
2多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自下组：S6Y、K8E、Q11E、Q11T、L12D、L12E、L12Q、L12S、L12T、Q13H、Q13R、E15Q、H16D、H16E、H16N、H16Q、L19D、L19Q、D20E、D20Q、Q22D、Q22E、Q22H、M23E、M23N、M23Q、R81D、R81E、R81H、R81N、R81Q、D84E、D84Q、S87D、S87E、S87N、S87Q、V91D、V91E、V91N、E95D、E95Q、R120E、R120H、T123E、T123Q、Q126E、Q126H、S130E、T133D、T133E、T133N、T133Q。4.根据权利要求1至3中任一项所述的突变型IL
‑
2多肽，其中所述突变型IL
‑
2多肽包含氨基酸取代(i)L12E、D20E、M23N、R81N、D84E、S87E、R120E、T123E、S130E、T133N；(ii)Q11E、D20Q、M23E、R81D、D84E、S87E、S130E、T133N；(iii)L12E、L19D、R81D、R120E、T123E、S130E、T133E；(iv)R81Q、S87E、V91D、T123E、S130E、T133D；(v)Q11E、L12E、M23Q、R81D、S87E、V91D、S130E、T133Q；(vi)Q11E、L19D、R81D、D84E、S130E、T133D；(vii)R81D、D84Q、S87D、V91N、T123Q、S130E、T133D；(viii)L19D、R81E、D84E、S87Q、R120H、S130E、T133E；(iix)L19D、M23N、R81D、T133E；(ix)Q11E、L12E、M23Q、R81Q、S87D、V91N、E95Q、R120H、T123E、S130E、T133E；(x)L19D、R81E、S130E、T133D；(xi)R81Q、S87E、V91D、R120E、S130E、T133D；(xii)L12Q、L19Q、R81H、V91E、T123E、S130E、T133E；(xiii)K8E、D20E、M23N、R81H、D84Q、S87E、R120H、S130E、T133D；(xiv)L12E、L19Q、R81H、R120E、T133D；(xv)H16E、L19D、Q22E、M23Q、R81D、D84E、S87D、R120H、S130E、T133E；(xvi)Q11E、L12E、H16Q、L19D、Q22E、M23N、R81E、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xvii)Q11E、H16E、L19D、M23E、R81D、S87E、R120H、Q126E、T133D；(xviii)Q11E、L12S、E15Q、H16N、L19D、M23E、R81E、D84E、S87D、R120H、S130E、T133E；(xix)Q11E、H16E、M23E、R81N、D84E、S87E、R120H、Q126E、S130E、T133E；(xx)Q11E、E15Q、H16E、Q22E、M23E、R81H、D84E、S87E、R120H、S130E、T133D；(xxi)Q11E、L12D、Q13H、E15Q、H16E、Q22E、M23E、R81N、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxii)Q11E、E15Q、H16E、L19D、R81E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxiii)H16E、L19D、M23Q、R81N、D84E、S87D、R120H、S130E、T133D；(xxiv)Q11E、L12T、E15Q、H16E、L19D、Q22H、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；
(xxv)Q11E、L12T、E15Q、H16E、L19D、Q22H、M23E、R81E、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxvi)Q11E、E15Q、H16E、L19D、R81E、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxvii)H16E、Q22E、M23Q、S87N、R120H、S130E、T133E；(xxviii)H16E、L19D、Q22D、M23Q、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxiix)Q11E、L12E、Q13H、E15Q、H16N、L19D、Q22E、M23Q、R81E、D84E、S87D、E95D、R120H、T133E；(xxix)Q11E、L12T、H16E、L19D、Q22E、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T133D；(xxx)Q11T、L12E、E15Q、H16E、L19D、R81D、D84E、S87E、R120E、S130E、T133D；(xxxi)Q11E、E15Q、H16E、L19D、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxxii)Q11E、E15Q、H16E、L19D、R81Q、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxxiii)Q11E、L12S、H16E、L19D、M23Q、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T133E；(xxxiv)S6Y、L12E、Q13R、H16Q、Q22E、M23Q、R81N、D84E、S87E、R120H、S130E、T133D；(xxxv)H16D、M23N、R81D、D84E、R120H、S130E、T133E；(xxxvi)Q11E、L12T、H16Q、L19D、M23E、R81D、D84E、S87E、R120H、S130E、T1...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：