白介素-2多肽及其融合蛋白，及其药物组合物和治疗应用制造技术

本文提供了白介素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白介素
‑
2多肽及其融合蛋白，及其药物组合物和治疗应用
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于2020年4月28日提交的美国临时申请第63/016,289号；于2020年5月20日提交的美国临时申请第63/027,929号；以及于2020年7月2日提交的美国临时申请第63/047,867号的优先权，上述每个申请的披露内容通过引用整体并入本文。


[0002]本文提供了白介素
‑
2多肽和及其融合蛋白。本文还提供了其药物组合物和用于治疗、预防或减轻增殖性疾病的一种或多种症状的使用方法。对序列表的引用
[0003]本说明书与计算机可读形式(CRF)的序列表一起提交，该序列表名为216A007WO01_SEQ_LIST_ST25.txt，大小为309,651字节，创建于2021年4月26日；该序列表通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0004]白介素
‑
2(IL
‑
2)是一种多效性细胞因子，其协调免疫效应(Teff)细胞和调节性T(Treg)细胞二者的增殖、生存和功能以保持免疫稳态。Bluestone,N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]2011,365,2129
‑
31；Boyman等人，Nat.Rev.Immunol.[自然免疫学综述]2012,12,180
‑
90。IL
‑
2驱动T细胞生长，增强自然杀伤(NK)细胞活性，诱导调节性T(Treg)细胞的分化，并且介导活化诱导的细胞死亡。Liao等人，Curr.Opin.Immunol.[当代免疫学观点]2011,23,598
‑
604。天然IL
‑
2具有位于Cys 58与Cys 105之间的单个二硫键。Agrawalla等人，Bioconjugate Chem.[生物缀合化学]2018,29,29
‑
34。
[0005]白介素
‑
2受体(IL
‑
2R)具有三种不同的白介素
‑
2受体链：α链(IL
‑
2Rα或CD25)、β链(IL
‑
2Rβ或CD122)和γ链(IL
‑
2Rγ、γ
c
或CD132)。Wang等人，Science[科学]2005,310,1159
‑
63。IL
‑
2以低亲和力(K
d
≈10nM)与IL
‑
2Rα结合。同上。根据四级IL
‑
2信号复合物的晶体结构，IL
‑
2上的15个氨基酸残基(K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72和Y107)被鉴定为IL
‑
2与IL
‑
2Rα之间的界面残基。Stauber等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]2006,103,2788
‑
93。IL
‑
2以中等亲和力(K
d
≈1nM)与记忆T细胞和NK细胞上表达的IL
‑
2Rβ和IL
‑
2Rγ的异二聚体复合物(“IL
‑
2Rβ/γ”)结合。Wang等人，Science[科学]2005,310,1159
‑
63。IL
‑
2以高亲和力(K
d
≈10pM)与Treg细胞上表达的IL
‑
2Rα、IL
‑
2Rβ和IL
‑
2Rγ的异三聚体复合物结合。同上。IL
‑
2以约100nM的解离常数(K
d
)与IL
‑
2Rβ单独结合，并且对IL
‑
2Rγ没有检测到单独的结合亲和力。同上。IL
‑
2Rα自身没有信号传导活性。同上。IL
‑
2通过中等亲和力异二聚体IL
‑
2Rβ/γ复合物或高亲和力异三聚体IL
‑
2Rα/β/γ复合物发信号。Liao等人，Curr.Opin.Immunol.[当代免疫学观点]2011,23,598
‑
604。IL
‑
2与中等亲和力异二聚体IL
‑
2Rβ/γ复合物的结合导致免疫刺激性Teff细胞的活化与增殖，而IL
‑
2与高亲和力异三聚体IL
‑
2Rα/β/γ复合物的结合导致免疫抑制性Treg细胞的活化与增殖。Malek等人，Immunity[免疫学]2010,33,153
‑
65；
Bluestone,N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]2011,365,2129
‑
31；Boyman等人，Nat.Rev.Immunol.[自然免疫学综述]2012,12,180
‑
90；Spangler等人，Annu.Rev.Immunol.[免疫学年鉴]2015,33,139
‑
67。免疫刺激和免疫抑制的这种双重对立功能对将IL
‑
2开发成安全有效的治疗剂提出了重大挑战。Skrombolas等人，Expert Rev.Clin.Immunol.[临床免疫学专家评论]2014,10,207
‑
17；Abbas等人，Sci.Immunol.[科学免疫学].2018,3,eaat1482。
[0006]阿地白介素是一种重组人IL
‑
2，FDA于1992年批准将其用于转移性肾细胞癌，并且在1998年批准将其用于转移性黑素瘤。Rosenberg,J.Immunol.[免疫学杂志]2014,192,5451
‑
58。转移性黑素瘤患者或肾癌患者的完全癌消退率为5％至10％，另有10％的患者经历部分消退。Atkins等人，J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学杂志]1999,17,2105
‑
16；Klapper等人，Cancer[癌症]2008,113,293
‑
301。约有70％的IL
‑
2疗法完全应答者不会复发。Rosenberg,Sci.Transl.Med.[科学转化医学]2012,4,127ps8。然而，IL
‑
2作为癌症免疫疗法的成功已受到其严重毒性和有限功效的阻碍。其作为抗癌剂的功效的一项主要限制因素是由IL
‑
2驱动的Treg细胞优先扩增导致的免疫抑制。Abbas等人，Sci.Immunol.[科学免疫学]2018,3,eaat 1482。为使IL
‑
2在癌症治疗中有效，需要高剂量治疗方案。Blues本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种白介素
‑
2多肽，包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5的氨基酸序列，其中所述白介素
‑
2多肽包含：(i)用包含IL
‑
15铰链或其片段的氨基酸序列的肽替代SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第29位至第50位处的氨基酸残基；(ii)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第30位至第80位处的两个氨基酸之间形成的二硫键；(iii)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第8、9、13、15、16、19、23、32、76、79、81、84、87、88、91、92、95、127或130位处的氨基酸取代，条件是在第88位处的所述氨基酸取代不是N88R；(iv)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第30位至第35位处的氨基酸残基的缺失；或(v)用肽连接子替代SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第30位至第35位处的氨基酸残基。2.如权利要求1所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第8、9、13、15、16、19、23、32、76、79、81、84、87、88、91、92、95、127或130位处的氨基酸取代。3.如权利要求1或2所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第8、9、13、15、16、23、32、76、79或81、84、87、91、92或95位处的氨基酸取代。4.如权利要求1至3中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第8位处的氨基酸取代。5.如权利要求1至4中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含K8D、K8E或K8Q的氨基酸取代。6.如权利要求1至5中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第9位处的氨基酸取代。7.如权利要求1至6中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含K9D、K9E或K9Q的氨基酸取代。8.如权利要求1至7中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第13位处的氨基酸取代。9.如权利要求1至8中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含Q13E或Q13N的氨基酸取代。10.如权利要求1至9中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第15位处的氨基酸取代。11.如权利要求1至10中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含E15K的氨基酸取代。12.如权利要求1至11中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第16位处的氨基酸取代。13.如权利要求1至12中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含H16D、H16E、H16N或H16Q的氨基酸取代。14.如权利要求1至13中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第23位处的氨基酸取代。15.如权利要求1至14中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含M23K的氨基酸取代。16.如权利要求1至15中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第32位处的氨基酸取代。
NO:1、2、3、4或5中所示第16位处的氨基酸取代，和(ii)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第76位处的氨基酸取代。35.如权利要求34所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含：(i)H16D、H16E或H16Q的氨基酸取代；和(ii)K76D、K76E或K76Q的氨基酸取代。36.如权利要求34或35所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含H16E和K76E的氨基酸取代。37.如权利要求29或30所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含：(i)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第32位处的氨基酸取代，和(ii)SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第76位处的氨基酸取代。38.如权利要求37所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含：(i)K32D、K32E或K32Q的氨基酸取代；和(ii)K76D、K76E或K76Q的氨基酸取代。39.如权利要求37或38所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含K32E和K76E的氨基酸取代。40.如权利要求1至39中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第84、87、88、91、92或95位处的氨基酸取代。41.如权利要求1至40中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第84位处的氨基酸取代。42.如权利要求1至41中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含D84T的氨基酸取代。43.如权利要求1至42中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第87位处的氨基酸取代。44.如权利要求1至43中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含S87D或S87E的氨基酸取代。45.如权利要求1至44中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第88位处的氨基酸取代。46.如权利要求1至45中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含N88A的氨基酸取代。47.如权利要求1至46中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第91位处的氨基酸取代。48.如权利要求1至47中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含V91L的氨基酸取代。49.如权利要求1至48中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第92位处的氨基酸取代。50.如权利要求1至49中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含I92A或I92L的氨基酸取代。51.如权利要求1至50中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
‑
2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第95位处的氨基酸取代。52.如权利要求1至51中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含E95K、E95E或E95Q的氨基酸取代。
ID NO:1、2、3、4或5中所示第35位至第72位处的两个氨基酸之间形成的二硫键。73.如权利要求1至72中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第35位至第69位处的两个氨基酸之间形成的二硫键。74.如权利要求1至73中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在两个不同位置处的两个氨基酸之间形成的二硫键，所述两个不同位置各自独立选自SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第35、38、42、45、62、69和72位。75.如权利要求1至74中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第35、38、42或45位处的氨基酸与第62、69或72位处的氨基酸之间形成的二硫键。76.如权利要求1至75中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示位置K35、R38、F42或Y45处的氨基酸与位置E62、V69或L72处的氨基酸之间形成的二硫键。77.如权利要求1至76中任一项所述的白介素
‑
2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在以下两个氨基酸之间形成的二硫键：K35C和L72C、R38C和L72C、F42C和V69C、Y42C和L72C、或Y45C和E62C。78.如权利要求1至77中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在K35C和L72C之间形成的二硫键。79.如权利要求1至77中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在R38C和L72C之间形成的二硫键。80.如权利要求1至77中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在F42C和V69C之间形成的二硫键。81.如权利要求1至77中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在Y42C和L72C之间形成的二硫键。82.如权利要求1至77中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含在Y45C和E62C之间形成的二硫键。83.如权利要求1至70中任一项所述的白介素
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2多肽，其中所述白介素
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2多肽包含用肽替代SEQ ID NO:1、2、3、4或5中所示第29位至第50位的氨基酸残基，所述肽包含IL
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15铰链或其片段的氨基酸序列。84.如权利要求71至83中任一项所述的白...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶帆，廖艾瑞克，李雨敏，马修，
申请(专利权)人：安维塔生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：