一种分泌Fc-IL-2m融合蛋白的改良型CAR-T细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌Fc

【技术实现步骤摘要】
一种分泌Fc
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IL
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2m融合蛋白的改良型CAR
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T细胞及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种分泌Fc
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IL
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2m融合蛋白的改良型CAR
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T细胞及其应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)T细胞，是利用基因工程技术将患者自体T细胞在经过体外基因改造并大量扩增后回输体内的过继性免疫细胞疗法，是近年来癌症免疫治疗的重大突破之一，尤其在血液肿瘤治疗领域效果显著。CAR
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T细胞通常表达的CAR结构包括负责识别、结合抗原的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)、铰链区、跨膜结构域和胞内结构域，在与特异性肿瘤抗原识别、结合后启动T细胞特异性杀伤肿瘤细胞的作用。2017年至今，已有六种靶向CD19或BCMA的CAR
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T细胞经美国FDA批准上市，但是尚无针对实体瘤的CAR
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T疗法获批上市，因此，探索治疗实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的IL
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2变体多肽，其特征在于，所述分离的IL
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2变体多肽包含与SEQ ID NO.1至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；优选地，所述相同的氨基酸序列与由SEQ ID NO.1代表的多肽相比，具有增强对IL
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2Rβ的结合亲和力或降低对IL
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2Rγc受体的结合亲和力的能力、具有去除O
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连接的糖基化位点的能力或具有抑制二硫键形成的能力；优选地，所述增强对IL
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2Rβ的结合亲和力或降低对IL
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2Rγc受体的结合亲和力的氨基酸取代包含氨基酸残基位置L19、D20、L21、Q22、K35、R38、T41、F42、F44、Y45、E62、P65、E68、L72、L80、R81、L85、I86、N88、I92、Y107或Q126中的一个或更多个氨基酸取代；优选地，所述增强对IL
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2Rβ的结合亲和力或降低对IL
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2Rγc受体的结合亲和力的氨基酸取代包含氨基酸残基位置L80、R81、L85、I86和/或I92的氨基酸取代；优选地，所述增强对IL
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2Rβ的结合亲和力或降低对IL
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2Rγc受体的结合亲和力的氨基酸取代包含氨基酸残基位置L80、R81、L85、I86和I92的氨基酸取代；优选地，所述氨基酸残基位置L80、R81、L85、I86和I92的氨基酸取代选自：在SEQ ID NO.1的位置L80氨基酸取代包括L80F、L80V；在SEQ ID NO.1的位置R81氨基酸取代包括R81A、R81D、R81G、R81I、R81S、R81T；在SEQ ID NO.1的位置L85氨基酸取代包括L85V、L85T；在SEQ ID NO.1的位置I86氨基酸取代包括I86V、I86T；在SEQ ID NO.1的位置I92氨基酸取代包括I92F、I92K、I92R；或以上这些氨基酸取代的任何组合；优选地，所述氨基酸残基位置L80、R81、L85、I86和I92的氨基酸取代为L80F、R81D、L85V、I86V和I92F；优选地，所述去除O
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连接的糖基化位点的氨基酸取代包括氨基酸残基位置T3的氨基酸取代；优选地，所述T3的氨基酸取代包括T3A、T3G、T3Q、T3E、T3N、T3D、T3R、T3K或T3P；优选地，所述T3的氨基酸取代为T3A；优选地，所述抑制二硫键形成的氨基酸取代包括氨基酸残基位置C58、C105或C125的氨基酸取代；优选地，所述抑制二硫键形成的氨基酸取代为氨基酸残基位置C125的氨基酸取代；优选地，所述C125的氨基酸取代包括C125A、C125S、C125T、C125L或C125V；优选地，所述C125的氨基酸取代为C125A；优选地，所述IL
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2变体多肽包含SEQ ID NO.4中列出的氨基酸序列。2.一种分离的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含1)权利要求1所述的IL
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2变体多肽和2)异源蛋白；优选地，所述融合蛋白是由所述的IL
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2变体多肽与所述的异源蛋白融合构成的，任选地通过肽接头；优选地，所述融合蛋白是由所述的IL
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2变体多肽在其N末端氨基酸处与所述的异源蛋白的C末端氨基酸通过肽接头融合构成的或由所述的IL
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2变体多肽在其C末端氨基酸处与所述的异源蛋白的N末端氨基酸通过肽接头融合构成的；优选地，所述异源蛋白增加所述的IL
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2变体多肽的循环半衰期；
优选地，所述异源蛋白选自有提供半衰期延长的全长无效抗体或抗体片段组成的组；优选地，所述异源蛋白增强所述的IL
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2变体多肽的表达水平和/或减弱野生型IL
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2免疫抑制作用；优选地，所述异源蛋白用作标志物或标签或靶向部分；优选地，所述异源蛋白包括具有沉默的效应子功能和/或具有半衰期延长功能的Fc结构域或其变体；优选地，所述Fc结构域或其变体选自由以下组成的组：IgAFc结构域或其变体、IgDFc结构域或其变体、IgEFc结构域或其变体、IgGFc结构域或其变体和IgMFc结构域或其变体；优选地，所述Fc结构域或其变体为IgGFc结构域或其变体；优选地，所述IgGFc结构域或其变体包括IgG1Fc结构域或其变体、IgG2Fc结构域或其变体、IgG3Fc结构域或其变体、IgG4Fc结构域或其变体；优选地，所述Fc结构域或其变体为IgG1Fc结构域或其变体；优选地，IgG1Fc变体包含具有氨基酸残基位置L4、L5、P99中的一个或更多个氨基酸取代的SEQ ID NO.5的氨基酸序列；优选地，所述氨基酸残基位置L4、L5、P99的氨基酸取代选自：在SEQ ID NO.5的位置L4氨基酸取代包括L4A；在SEQ ID NO.5的位置L5氨基酸取代包括L5A；在SEQ ID NO.5的位置P99氨基酸取代包括P99G；或以上这些氨基酸取代的任何组合；优选地，所述氨基酸残基位置L4、L5、P99的氨基酸取代为L4A、L5A和P99G；优选地，所述IgG1Fc结构域包含SEQ ID NO.6中列出的氨基酸序列；优选地，所述融合蛋白呈多聚体、二聚体或单体的形式。3.一种改良型的CAR，其特征在于，所述改良型的CAR包含1)权利要求1所述的IL
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2变体多肽或权利要求2所述的融合蛋白和2)CAR结构；优选地，所述改良型的CAR是由所述的融合蛋白通过多顺反子结构与CAR结构的末端连接；优选地，所述多顺反子结构为自剪切多肽或内部核糖体进入位点IRES，所述自剪切多肽包括T2A、P2A、E2A或F2A；优选地，所述自剪切多肽为T2A；优选地，所述CAR结构包括抗体或其抗原结合片段、铰链区、跨膜域、胞内共刺激结构域、胞内信号转导结构域；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的来源包括CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD123、BCMA、CAIX、CD44v7/8、CEA、EGP
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2、EGP
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40、erb
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B2、erb
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B2，3，4、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HER2、IL
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11Ra、IL
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13R
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a2、IL1RAP、CLL1(CLEC12A)PSA、NCAM、NY
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ESO
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1、FLT3、B7
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H3、KDR、LeY、MAGE
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A1、MUC1、NKG2Dligands、瘤胎、PSCA、PSMA、TAG
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72、VEGF、ROR1、c
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Met、糖脂F77、FAP、EGFRvIII、MAGEA3、5T4、WT1、KG2D配体、叶酸受体(Fra)、VEGF
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R2、GPC3、Wnt1、ROBO1、MesothelinscFv；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的来源为HER2scFv；优选地，所述铰链区和和跨膜区包括以下分子的铰链区和和跨膜区：IgG1、IgG4、CD8、
CD28、IL
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2受体、IL
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7受体、IL
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11受体、PD
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1、CD34；优选地，所述铰链区和和跨膜区为CD28的铰链区和跨膜区；优选地，所述胞内共刺激结构包括以下分子的胞内信号传导结构域：CD27、CD28、4
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【专利技术属性】
技术研发人员：李思瑾，夏怡菲，刘丹，赵璇，王旭，管章春，施明，郑骏年，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：