本发明专利技术公开了一种长链脂肪酸顺反异构体HPLC检测方法，主要解决现有长链脂肪酸顺反异构体检测中操作难度大、重复性差的技术问题。本发明专利技术测定方法包括以下步骤：一、准备测量的试剂；二、样品的前处理；三、进行高效液相色谱测定，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以质量百分浓度0.1%磷酸水溶液:乙腈=95:5为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为25℃；检测波长为205nm。通过本发明专利技术为长链脂肪酸系列顺反异构体的检测领域提供了可靠便捷的检测手段。手段。手段。
【技术实现步骤摘要】
一种长链脂肪酸顺反异构体的HPLC检测方法
[0001]本专利技术涉及到一种长链脂肪酸顺反异构体的HPLC检测方法。
技术介绍
[0002]长链脂肪酸包括亚麻酸（C18：3）、油酸（18：1）、亚油酸（C18：2）等，可分为两种结构：顺式结构和反式结构，分别称为顺式脂肪酸和反式脂肪酸。其中反式脂肪酸由于对人体健康存在风险而备受关注。
[0003]长链脂肪酸顺反异构体的传统分析方法采用气相色谱法，由于长链脂肪酸的极性不易挥发，首先要进行复杂的样品处理，用衍生试剂如乙酰氯、五氟基苄(PFB)等将长链脂肪酸衍生成易挥发的非极性衍生物，衍生试剂带有一定的危险性和毒性，操作过程复杂，重现性差；要采用专用毛细管色谱柱，柱子柱效下降快，使用寿命短，成本高；检测器有的要采用电化学检测器（NIC）甚至NCI
‑
MS，配置高，普适性低。
[0004]为此，提供一种长链脂肪酸顺反异构体检测可靠、经济的解决方案是亟待解决的问题。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种长链脂肪酸顺反异构体HPLC检测方法，主要解决现有气相色谱检测方法存在的样品需要前处理，环节复杂、重现性差等技术问题。
[0006]本专利技术技术方案为：长链脂肪酸顺反异构体的HPLC检测方法；包括以下步骤：步骤一，准备测量的试剂：测量的试剂包括色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，分析纯试剂：磷酸、乙酸和三氟乙酸；步骤二、样品溶液的配制，称取试样置于容量瓶中，加入乙腈，摇匀，用乙腈定容，用0.45μm聚丙烯有机滤膜过滤；步骤三，进行高效液相色谱测定： 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长 250mm，内径 4.6mm，粒径 5μm）；以质量百分浓度0.1%磷酸水溶液:乙腈=95:5为流动相；流速为每分钟 1.0ml；柱温为 25℃；检测波长为 205nm。理论塔板数应不低于 3000。
[0007]本专利技术的有益效果是：采用了一种长链脂肪酸顺反异构体的HPLC检测方法。该方法样品处理不需要用有毒的衍生试剂衍生，操作简便、快速、准确，稳定性好；采用简单的紫外检测器，普适性广。
附图说明
[0008]图1为本专利技术实施例1油酸顺反异构体HPLC谱图。
[0009]图2为本专利技术实施例1油酸顺式异构体HPLC谱图。
[0010]图3为本专利技术实施例1油酸反式异构体HPLC谱图。
具体实施方式
实施例1
[0011]主要仪器：安捷伦1260型高效液相色谱仪，配有1260型号的VWD检测器色谱柱，C
18
色谱柱(4.6mm
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250mm, 5.0μm)；超声波提取仪(KQ5200E，郑州科泰实验设备有限公司)，0.45μm聚丙烯有机滤膜（上海安谱科学仪器有限公司），电子分析天平（CPA225D，赛多利斯科学仪器（上海）有限公司）。
[0012]主要试剂：试剂包括色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，分析纯试剂：磷酸、乙酸和三氟乙酸。
[0013]样品的前处理：称取油酸及对应异构体试样各约2mg，置于5 mL容量瓶中，加入3 mL乙腈，摇匀定容至5 mL，用0.45
ꢀµ
m聚丙烯有机滤膜过滤；分析条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长 250mm，内径 4.6mm，粒径 5μm）；以质量百分浓度0.1%磷酸水溶液:乙腈=95:5为流动相；流速为每分钟 1.0ml；柱温为 25℃；检测波长为 205nm。理论塔板数应不低于 3000。
[0014]色谱条件的优化：本专利技术在选择时分别对质量百分浓度1%乙酸水:乙腈=95:5、质量百分浓度0.05%三氟乙酸水:乙腈=95:5、质量百分浓度0.1%磷酸水:乙腈=95:5作为流动相时的分离效果进行了比较。三种流动相体系均可以达到分离要求：峰形对称、不拖尾，理论塔板数均在8000以上。但是乙酸水:乙腈和三氟乙酸水:乙腈流动相系统，由于乙酸和三氟乙酸在205nm波长处均有吸收，对脂肪酸的检测限有影响。所以最终选择质量百分浓度0.1%磷酸水:乙腈=95:5作为流动相。
[0015]本专利技术中设定柱温为25℃。比较柱温分别为20℃、40℃，柱温40℃峰形对称度较好，保留时间短，但是分离度下降。柱温20℃，柱压偏高，影响色谱柱使用寿命。综合比较，选择柱温为25℃。
[0016]实际样品的测定：采用本方法对长链脂肪酸：油酸（18:1）进行异构体检测，检测谱图见图1，图2，图3，检测结果表明，本方法快速、准确、灵敏度高、被检样品用量少，具有实际应用价值。
[0017]实施例2，对亚麻酸（C18:3）进行检测，其余参照实施例1。
[0018]实施例3，对亚油酸（C18:2）进行检测，其余参照实施例1。
[0019]结论：本专利技术建立了一种长链脂肪酸包括亚麻酸（C18:3）、油酸（18:1）、亚油酸（C18:2）等顺反异构体的HPLC检测方法。该方法操作简便、快速、准确，检测样品用量少，稳定性好，适用于长链脂肪酸包括亚麻酸（C18:3）、油酸（18:1）、亚油酸（C18:2）等顺反异构体的检测。
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【技术特征摘要】
1.一种长链脂肪酸顺反异构体的HPLC检测方法；其特征是：包括以下步骤：步骤一，准备测量的试剂：测量的试剂包括色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，分析纯试剂：磷酸、乙酸和三氟乙酸；步骤二、样品溶液的配制：称取试样置于容量瓶中，加入乙腈，摇匀，用乙腈定容，用聚丙烯有机滤膜过滤；步骤三，进行高效液相色谱仪测定：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以质量百分浓度0.1%磷酸水溶液:...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，马敬祥，夏伟冬，于程伟，
申请(专利权)人：上海吉奉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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