一种HILIC-MS/MS同时测定糖和糖醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种HILIC

【技术实现步骤摘要】
一种HILIC
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MS/MS同时测定糖和糖醇的方法


[0001]本专利技术属于分析化学及生物科学领域，具体涉及一种基于HILIC
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MS/MS对17种糖和糖醇类物质进行定性和定量分析的方法，并最终将之应用于果汁类样品中该类物质的分析。

技术介绍

[0002]糖和糖醇是水果果实生长发育过程中的重要物质，其含量影响果实的甜味口感，而且是评价水果品质的参考值，其中最主要的可溶性糖是果糖、山梨醇、葡萄糖和蔗糖，也含有少量的麦芽糖、阿拉伯糖等。不同水果中所含的糖的种类不同，不同种类糖分的相对比例也会影响水果整体的甜度。作为植物品质的重要组成部分，可溶性糖和糖醇的含量和甜度值是评价水果品质的重要因素，因此，建立果汁样品中多种糖和糖醇同时测定的方法，对评价果汁类样品的品质和食品安全质量控制具有重要意义。已有的方法(包括液质联用方法)中尚无一种针对多种糖和糖醇类物质的简便通用的分析方法。
[0003]本专利技术尝试同时检测多种糖和糖醇物质，最终列出二级质谱的色谱图及标准曲线分别用于定性及定量研究，其分析结果经过统计学分析，找出待分析物质与果汁的甜度值存在的关系，证实了果汁样品的甜味物质基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对果汁样品中常见的17种糖和糖醇类物质(果糖、葡萄糖、甘露糖、核糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖和鼠李糖，山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、核糖醇、半乳糖醇、肌醇和麦芽糖醇)提供一种简便、快捷和准确的定性、定量分析方法，具体是提供一种HILIC
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MS/MS同时测定17种糖和糖醇的方法，并将其应用于果汁样品中糖和糖醇类物质的定性定量分析，最终结果通过统计分析后，确定该类物质与样品的甜度值之间的关系。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]一种HILIC
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MS/MS(亲水作用液相色谱
‑
串联质谱)同时测定糖和糖醇的方法，其特点在于：将待测样品预处理后，进行HILIC
‑
MS/MS分析，获得待测样品中每种糖和糖醇各自的二级质谱的色谱峰面积，并根据各糖或糖醇的浓度与色谱峰面积的标准关系曲线，确定待测样品中每种糖和糖醇的浓度。所述糖包括果糖、葡萄糖、甘露糖、核糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖和鼠李糖，所述糖醇包括山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、核糖醇、半乳糖醇、肌醇和麦芽糖醇，所有物质均在25分钟内出峰完全。
[0007]进一步地，所述预处理的方法为：取待测样品1.0g，用超纯水定容至40mL，室温超声提取10min，5000rpm离心10min；取离心后上清液1mL注入氨基SPE小柱(500mg
×
3mL)(预先依次用5mL甲醇及5mL超纯水平衡)净化，用水洗脱，所得洗脱液再过0.22μm水相滤膜，收集5mL滤液并加超纯水定容至10mL，获得样品进样液。
[0008]进一步地，所述标准关系曲线的确定方法为：以超纯水为溶剂，将10种糖和7种糖
醇组成的混合标准品通过梯度稀释配制成一系列标准工作溶液；对系列标准工作溶液依次进行UPLC
‑
MS/MS分析，然后以各糖或糖醇的色谱峰面积为纵坐标、以各糖或糖醇的浓度为横坐标，绘制每一种糖及糖醇的标准关系曲线。
[0009]进一步地，所述HILIC
‑
MS/MS分析的条件为：
[0010](1)超高效液相色谱流动相：A：0.1％氨水乙腈溶液，B：0.1％氨水溶液；梯度洗脱；
[0011](2)色谱柱为亲水型ACQUITYUPLC BEH酰胺柱，其尺寸为150mm
×
3.0mm，填料粒度1.7μm，进样体积5μL，柱温35℃，流速为0.5mL/min；
[0012](3)质谱阴离子模式条件：氮气做干燥气，氮气温度350℃，流速10L/min，雾化器压力40psi；毛细管电压：阴离子4500V，CAV 7V；动态MRM模式检测，质量采集范围：阴离子模式0.05
‑
1KD。
[0013]更进一步地，所述梯度洗脱的程序为：
[0014]0‑
14min：87％A相；
[0015]14
‑
24min：87％A
‑
60％A；
[0016]24
‑
30min：60％A；
[0017]30
‑
31min：60％A
‑
87％A；
[0018]31
‑
40min：87％A。
[0019]进一步地，所述待测样品可为果汁类样品。所述果汁类样品包括天然果汁和果汁香精。根据待测样品中每种糖和糖醇的浓度，按照甜度值公式(以蔗糖甜度值为基准1.00，查阅文献得出其他物质甜度值，如果糖1.75、葡萄糖0.7等，甜度值＝果糖含量*1.75+蔗糖含量*1+葡萄糖含量*0.7+
……
+糖醇含量*对应甜度值)，计算获得待测样品的甜度值。将分析结果进行统计学分析，可找出待分析物质与果汁的甜度值存在的相关性关系。
[0020]本专利技术的有益效果体现在：
[0021]1.本专利技术使用HILIC
‑
MS/MS色谱仪，采用外标法校准曲线，并基于响应面设计优化了待测样品的提取和净化条件，消除了质谱离子化过程中因基质效应给目标物定量产生的影响，能够同时测定果汁等样品中的10种可溶性糖与7种糖醇，具有结果准确、干扰少、灵敏度高及重复性好等优点。
[0022]2.本专利技术的方法所需流动相配比简单易得、成本低、性质稳定，在所建立梯度下所有目标物质均在25min内出峰，且响应信号明显，不同物质峰互不影响，即分离效率和分离速度都满足分析要求。
[0023]3.本专利技术的该方法用于果汁类样品中糖和糖醇的定性、定量分析，考察果汁样品中糖和糖醇类物质的含量与样品甜度值的关系，为食品的品控和口味物质研究提供依据。
附图说明
[0024]图1为17种糖和糖醇混合标准品溶液的TIC模式下UPLC
‑
MS色谱图。
[0025]图2为17种糖和糖醇混合标准品溶液的MRM模式下UPLC
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MS/MS色谱图。
[0026]图3为NFC苹果汁样品的MRM模式下UPLC
‑
MS/MS色谱图。
[0027]图4为菠萝蜜香精样品的MRM模式下UPLC
‑
MS/MS色谱图。
[0028]图5为果汁样品的糖和糖醇类物质含量与甜度值的相关性分析图。
[0029]图中峰编号分别代表以下物质：1.鼠李糖；2.核糖；3.赤藓糖醇；4.木糖；5.阿拉伯
糖；6.核糖醇；7.木糖醇；8.果糖；9.甘露糖；10.山梨醇；11.葡萄糖；12.半乳糖醇；13.蔗糖；14.肌醇；15.麦芽糖醇；16.麦芽糖；17.棉子糖。
具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HILIC
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MS/MS同时测定糖和糖醇的方法，其特征在于：将待测样品预处理后，进行HILIC
‑
MS/MS分析，获得待测样品中每种糖和糖醇各自的质谱峰面积，并根据各糖或糖醇的浓度与色谱峰面积的标准关系曲线，确定待测样品中每种糖和糖醇的浓度。2.根据权利要求1所述的一种HILIC
‑
MS/MS同时测定糖和糖醇的方法，其特征在于：所述糖包括果糖、葡萄糖、甘露糖、核糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖和鼠李糖，所述糖醇包括山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、核糖醇、半乳糖醇、肌醇和麦芽糖醇。3.根据权利要求1所述的一种HILIC
‑
MS/MS同时测定糖和糖醇的方法，其特征在于，所述预处理的方法为：取待测样品1.0g，用超纯水定容至40mL，室温超声提取10min，5000rpm离心10min；取离心后上清液1mL注入氨基SPE小柱净化，用水洗脱，所得洗脱液再过0.22μm水相滤膜，收集5mL滤液并加超纯水定容至10mL，获得样品进样液。4.根据权利要求2所述的一种HILIC
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MS/MS同时测定糖和糖醇的方法，其特征在于：所述标准关系曲线的确定方法为：以超纯水为溶剂，将10种糖和7种糖醇组成的混合标准品通过梯度稀释配制成一系列标准工作溶液；对系列标准工作溶液依次进行HILIC
‑
MS/MS分析，然后以各糖或糖醇的色谱峰面积为纵坐标、以各糖或糖醇的浓度为横坐标，绘制每一种糖及糖醇的标准关系曲线。5.根据权利要求1或4所述的一种HILIC
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MS/MS同时测定糖和糖醇的方法，其特征在于，所述UPLC
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁勇，朱晓兰，贺增洋，徐志强，邵宁，李玉秀，
申请(专利权)人：安徽中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：