S-2-Boc-3-(4,4-制造技术

本发明专利技术公开了

【技术实现步骤摘要】
S
‑2‑
Boc
‑3‑
(4,4
‑
二氟呱啶
‑
1基)丙氨酸手性检测方法


[0001]本专利技术涉及2
‑
Boc
‑3‑
(4,4
‑
二氟呱啶
‑
1基)丙氨酸手性检测方法，特别涉及一种R
‑2‑
Boc
‑
3(4,4
‑
二氟呱啶
‑
1基)丙氨酸手性检测方法。

技术介绍

[0002]常规S
‑2‑
Boc
‑3‑
(4,4
‑
二氟呱啶
‑
1基)丙氨酸手性测定，需要用到高效液相色谱方法，常规采用大赛璐正相手性柱，流动性用到正己烷，还需要用添加0.1%乙酸
‑
乙醇流动相，环节复杂，对样品的要求比较高，样品中残留溶剂总和低于10ppm，水分要求低于0.5%，特别是该样品的紫外吸收很弱，在检测中消耗样品量大，对整个检测出报告周期较长，样品消耗多，且峰对称度差。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种S
‑2‑
Boc
‑3‑
(4,4
‑
二氟呱啶
‑
1基)丙氨酸手性检测方法，主要解决现有正相手性方法存在的样品需要前处理，环节复杂、紫外吸收弱、样品消耗多且最终峰型对称度差等技术问题。
[0004]本专利技术采用了以下技术方案：S
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Boc
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(4,4
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸手性检测方法，它包括以下步骤：步骤一，准备测量的试剂：测量的试剂包括乙腈
‑
色谱纯，超纯水，化学试剂三氟乙酸，化学纯三氟乙酸。
[0005]步骤二：样品溶液的配制：称取试样置于容量瓶中，加入乙腈，室温条件下采用超声波溶解，再用水定容，最后试样用聚丙烯有机滤膜过滤后进行HPLC分析。
[0006] 步骤三，进行高效液相色谱测定;色谱测定的过程为：色谱条件为样品室温度为40℃，自动进样器进样体积为1
ꢀµ
L，手性色谱柱为：美国ASTEC CHIROBIOTIC T柱(4.6mm
ꢀ×
250mm, 5.0μm)，柱温：40 ℃，流速：0.8 mL/min，流动相为质量百分浓度0.1%TFA.水溶液（A)和质量百分浓度100%乙腈溶液（B)；采用梯度洗脱程序，0～15min，V(B)为10%到50%， 15.1～25 min，V(B)从10% 平衡系统；即保留时间为R型：11.6min、S型：12.06min。
[0007]所述的液相色谱测定时采用的色谱仪为安捷伦 1260色谱仪，该色谱仪采用ELSD检测器。
[0008]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术测定S
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Boc
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(4,4
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸手性检测方法，该方法操作简便、快速、准确，稳定性好，样品消耗少、峰对称度好；本专利技术采用了高效液相色谱仪的自动进样器的精准定量，利用ELSD蒸发光散射检测器的灵敏度可以对S
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Boc
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(4,4
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸有很好的响应值，申请人研究中发现美国ASTEC CHIROBIOTIC T柱对于多种类型的分子具有独特选择性，尤其是未衍生化的 α、β、γ 和环状氨基酸、N
‑
衍生化的氨基酸、羟基
‑
羧酸、包括羧酸和酚类等的酸性化合物、小分子多肽、中性芳香族化合物以及环状芳香族和脂肪族胺类能有效分离同分异构体，使S
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Boc
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(4,4
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸同分异构体对称度分离。但在手性开发过程中同时碰到因样品
紫外吸收弱，采用加大样品浓度、加大进样量，导致样品分离度下降，还出现峰拖尾；所以，后来改用安捷伦1290型ELSD检测器，在使用美国ASTEC CHIROBIOTIC T柱的同时结合ELSD检测器，达到了同分异构体的分离，且峰拖尾现象也得到了解决。达到了低浓度，高响应、基线级分离的技术效果。
附图说明
[0009]图1 用安捷伦1290型 ELSD 检测器检测的混合样品图谱。
[0010]图2 用安捷伦1290型 ELSD 检测器检测的S
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Boc
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸单样手性图谱。
[0011]图3用安捷伦1290型 ELSD 检测器检测的S
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Boc
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸的对应异构体单样手性图谱。
具体实施方式
[0012]主要仪器：安捷伦1260型高效液相色谱仪，配有1290型号的ELSD检测器，美国ASTEC CHIROBIOTIC T手性柱，美国ASTEC CHIROBIOTIC T柱(4.6mm
ꢀ×
250mm, 5.0μm)；超声波提取仪(KQ5200E，郑州科泰实验设备有限公司)，0.22 μm聚丙烯有机滤膜（上海安谱科学仪器有限公司)，电子分析天平（CPA225D，赛多利斯科学仪器（上海)有限公司)。
[0013]主要试剂：测量的试剂包括乙腈
‑
色谱纯，试剂级三氟乙酸，电阻率为18.2 MΩ.cm的超纯水；乙腈（色谱纯，德国Merck公司)， 三氟乙酸(化学纯，上海国药公司)；超纯水( 电阻率18.2 MΩ.cm，美国 屈层氏)。
[0014]样品的前处理：称取S
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Boc
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸及对应异构体试样各约2mg，置于5 mL容量瓶中，加入3 mL乙腈，室温条件下超声波溶解3 min，再用水定容至5 mL，最后试样用0.22
ꢀµ
m聚丙烯有机滤膜过滤后进行手性分析。
[0015]色谱条件：样品室温度为30 ℃，自动进样器进样体积为10
ꢀµ
L，色谱柱为：美国ASTEC CHIROBIOTIC T柱(4.6mm
ꢀ×
250mm, 5.0μm)，柱温：40 ℃，流速：0.8mL/min，流动相为质量百分浓度0.1%TFA水（A)和质量百分浓度100%TFA乙腈（B)；采用梯度洗脱程序，0～15min， V(B)从10%到50%，15.1～25 min，V(B)从10% 平衡系统。
[0016]样品前处理方法的选择与优化：目前在市场上S
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Boc
‑3‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.S
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Boc
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二氟呱啶
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1基)丙氨酸手性检测方法；其特征是：包括以下步骤：步骤一，准备测量的试剂：乙腈
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色谱纯，超纯水，化学试剂三氟乙酸，化学纯三氟乙酸；步骤二、样品溶液的配制：称取试样置于容量瓶中，加入乙腈，室温条件下采用超声波溶解，再加超纯水定容 ，最后试样用聚丙烯有机滤膜过滤后进行手性检测；步骤三，进行高效液相色谱测定：色谱测定的过程为：色谱条件为样品室温度为常温，自动进样器，色谱柱为：美国ASTEC系列手性柱，柱温：40 ℃，流速：0.8 mL/min，流动相A为质量百分浓度0.1%三氟乙酸水溶液；流动相B相为质量百分浓度100%乙腈溶液，采用梯度洗脱程序。2.根据权利要求1所述的S
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Boc
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二氟呱啶<...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，夏伟冬，葛燕春，彭丽勤，
申请(专利权)人：上海吉奉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：