一种基于制造技术

本发明专利技术公开了一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于UPLC
‑
MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法及其应用


[0001]本专利技术属于药品测试
，具体涉及一种基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法及其应用以及一种
BUFFERIN
的仿制药研发中用于制备标准曲线样品和质控样品及其它未做特殊说明的方法学验证样品的健康人空白血浆采集方法和一种
BUFFERIN
的仿制药研发中受试者含药血浆采集方法
。

技术介绍

[0002]铝镁匹林片
(Ⅱ)
为抗血栓药，是复方制剂，成分包括阿司匹林
、
重质碳酸镁和甘羟铝
。
小剂量的阿司匹林能抑制血栓素
A2
的形成，从而不可逆地抑制正常血小板聚集过程，防止血栓形成，与制酸药甘羟铝和重质碳酸镁合用能保护胃肠粘膜
。
适用于需使用阿司匹林抑制血小板粘附和聚集，但患者不能耐受阿司匹林的胃肠道反应时：不稳定心绞痛
、
急性心肌梗塞
、
局部缺血性脑血管障碍等
。
[0003]铝镁匹林片
(Ⅱ)
最早于
2001
年在日本由
LION
公司研发上市，商品名为
BUFFERIN。
根据
NMPA
发布的关于仿制药生物等效性试验工作开展的相关要求以及
《
药物注册管理办法
>》
，研制该药品需进行临床生物等效性试验
。
因此，亟需一种快速
、
准确的定量分析方法用于检测临床试验受试者服用铝镁匹林片
(Ⅱ)
后血浆中目标待测物阿司匹林和水杨酸的浓度，助力我国仿制药研发生产
。
[0004]目前文献报道多为服用铝镁匹林片
(Ⅱ)
后仅检测血浆中水杨酸的浓度，阿司匹林作为主成分具有药物活性，因此也有文献报道检测血浆中目标待测物阿司匹林和水杨酸，多采用液质联用色谱法进行检测
。
这些方法存在前处理使用血浆量大
、
待测物阿司匹林不稳定
、
两种待测物分别测定使得检测效率低下
、
定量灵敏度较低等问题
。
[0005]CN112540138A
公开了一种血浆中丹酚酸
B、
阿司匹林
、
水杨酸的联合定量测定方法，通过采用
UPLC
‑
MS/MS
分析测定待测血浆中丹酚酸
B、
阿司匹林
、
水杨酸，助力阿司匹林与含有丹酚酸
B
成分的中药制剂联合研发，但该测定方法存在以下缺陷：阿司匹林又名乙酰水杨酸，因结构中含有酰胺键极易被水解为水杨酸，极不稳定，该方法为常规血样检测方法，并未加入稳定剂或提供低温环境以达到稳定阿司匹林的目的，未见待测物相互干扰试验结果；该方法使用乙酸乙酯作为提取溶剂，极性适中，提取物质较多，干扰较大；该方法丹酚酸
B、
阿司匹林
、
水杨酸的线性范围均为5‑
6000ng/mL
，并未按照药物在人体内吸收代谢程度分别规定合适的线性范围，会导致阿司匹林实际血药浓度集中在标准曲线的一端或大量样品中水杨酸血药浓度超出标准曲线范围，均不利于实际生物样品中阿司匹林和水杨酸的准确检测；该方法检测样品为含药
Beagle
犬血浆，未见明确可用于人血浆样品检测的描述
。

技术实现思路

[0006]基于上述问题，本专利技术提供一种基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，该方法血浆用量仅为
100
μ
L
，并解决了血浆中待测物阿司匹林不稳定问题
。
本
专利技术的检测方法，样品仅需一次前处理即可同时测得两个待测物的血药浓度，前处理方法简单
、
快速
、
便捷，检测方法选择性好
、
灵敏度和准确度高，可实现高通量检测，适用于临床样品中阿司匹林和水杨酸的浓度测定
。
[0007]一种基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，包括如下步骤：
[0008]S1,
绘制标准曲线：
[0009]S01,
配制阿司匹林及水杨酸的储备液和标准曲线工作溶液；
[0010]S02,
配制阿司匹林
‑
氘4及水杨酸
‑
氘4的内标储备液和内标工作液；
[0011]S03,
配制标准曲线血浆样品；
[0012]S04,
分别取
S03
制备的标准曲线样品经液液萃取后，进样
UPLC
‑
MS/MS
进行分析，记录标准曲线样品中阿司匹林
、
水杨酸
、
内标阿司匹林
‑
氘
4、
内标水杨酸
‑
氘4的色谱图
、
色谱峰面积；然后分别以标准曲线样品溶液中阿司匹林
、
水杨酸浓度为横坐标，阿司匹林与内标阿司匹林
‑
氘
4、
水杨酸与内标水杨酸
‑
氘4的色谱峰面积比为纵坐标，采用最小二乘法进行回归运算，分别绘制得到阿司匹林
、
水杨酸标准曲线方程；
[0013]S2,
取待测含药血浆样品经液液萃取后，进样
UPLC
‑
MS/MS
进行分析，记录待测含药血浆样品中阿司匹林
、
水杨酸
、
内标阿司匹林
‑
氘
4、
内标水杨酸
‑
氘4的色谱图
、
色谱峰面积；接着分别将待测含药血浆样品中阿司匹林与内标阿司匹林
‑
氘
4、
水杨酸与内标水杨酸
‑
氘4的色谱峰面积比分别带入绘制的阿司匹林
、
水杨酸的标准曲线方程，计算得到待测血浆样品中阿司匹林
、
水杨酸的浓度；其中待测含药血浆样品通过以下方式制取：采用含
K2EDTA
抗凝剂和氟化钠添加剂的真空采血管采集受试者服药后不同采血时间点的上肢静脉全血，全血离心后，在血浆中加入适量乙酸水溶液
。
全血样品及离心后的血浆样品需在冰浴条件下暂存，直至放入超低温冰箱
。
[0014]本专利技术人血浆中待测物为阿司匹林和水杨酸，其内标分别为阿司匹林
‑
氘4和水杨酸
‑
氘4；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，包括如下步骤：
S1,
绘制标准曲线：
S01,
配制阿司匹林及水杨酸的储备液和标准曲线工作溶液；
S02,
配制阿司匹林
‑
氘4及水杨酸
‑
氘4的内标储备液和内标工作液；
S03,
配制标准曲线血浆样品；
S04,
分别取
S03
制备的标准曲线血浆样品，经液液萃取后，进样
UPLC
‑
MS/MS
进行分析，记录标准曲线血浆样品中阿司匹林
、
水杨酸
、
内标阿司匹林
‑
氘
4、
内标水杨酸
‑
氘4的色谱图
、
色谱峰面积；然后分别以标准曲线血浆样品溶液中阿司匹林
、
水杨酸浓度为横坐标，阿司匹林与内标阿司匹林
‑
氘
4、
水杨酸与内标水杨酸
‑
氘4的色谱峰面积比为纵坐标，采用最小二乘法进行回归运算，分别绘制得到阿司匹林
、
水杨酸标准曲线方程；
S2,
取待测含药血浆样品，经液液萃取后，进样
UPLC
‑
MS/MS
进行分析，记录待测含药血浆样品中阿司匹林
、
水杨酸
、
内标阿司匹林
‑
氘
4、
内标水杨酸
‑
氘4的色谱图
、
色谱峰面积；接着分别将待测含药血浆样品中阿司匹林与内标阿司匹林
‑
氘
4、
水杨酸与内标水杨酸
‑
氘4的色谱峰面积比带入绘制的阿司匹林
、
水杨酸的标准曲线方程，计算得到待测血浆样品中阿司匹林
、
水杨酸的浓度；其中待测含药血浆样品通过以下方式制取：采用含
K2EDTA
抗凝剂和氟化钠添加剂的真空采血管采集受试者服药后不同采血时间点的上肢静脉全血，上肢静脉全血离心后，在离心后的血浆中加入乙酸水溶液
。2.
根据权利要求1所述的基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，该基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法用于检测临床试验受试者服用铝镁匹林片
(Ⅱ)
后血浆中阿司匹林和水杨酸浓度
。3.
根据权利要求1或2任一所述的基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，所述储备液的配制溶剂为1％乙酸乙腈溶液，工作液的配制溶剂为含4％乙酸的
50
％乙腈水溶液；所述血浆中添加的乙酸水溶液为
19.42
％乙酸水溶液，加入体积为血浆体积的1％；和
/
或所述待测含药血浆样品制取前及制取后均在冰浴中暂存；和
/
或上肢静脉全血样品及上肢静脉全血样品离心后的血浆样品需在冰浴条件下暂存，直至放入超低温冰箱
。4.
根据权利要求1‑3任一所述的基于
UPLC
‑
MS/MS
检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，
S03
中，配制标准曲线血浆样品时的空白血浆采用如下方式获取：符合伦理要求的受试者在采集空白全血的前2天不得食用富含水杨酸的食物，禁止吸烟，采集空白血浆置于含
K2EDTA、
氟化钠的采血管中，轻柔颠倒多次混匀后离心，离心条件为
2℃
～
8℃
，以
1700g
的离心力离心
10min
，离心之后取上层空白血浆
(
含
K2EDTA、
氟化钠
)
，即得；优选地，富含水杨酸的食物为食用茶
、
咖啡
、
含咖啡饮料
、
含醇类饮料
、
杏仁果
、
苹果
、
杏果
、
蓝莓
、
黑莓
、
小红莓
、
薄荷
、
樱桃
、
葡萄
、
桃
、
橘子
、
橙
、
胡柚
、
柠檬
、
梅
、
番茄
、
黄瓜
、
火锅
、
西柚
、
葡萄柚
、
芒果
、
葡萄汁
、
中药材
。5.
根据权利要求1‑4任一所述的基于
U...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱恒怡，唐维英，吴强，杨姗姗，魏伯平，赵代国，
申请(专利权)人：四川省药品检验研究院四川省医疗器械检测中心，
类型：发明
国别省市：