用于增加CRISPR/CAS12F1（CAS14A1）系统的效率的经工程化的引导RNA及其用途技术方案

本发明专利技术涉及经工程化的CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统。更具体地，本发明专利技术涉及：用于更有效地执行靶核酸切割、编辑或修饰的经工程化的引导RNA，以及包含所述经工程化的引导RNA的经工程化的CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统。此外，本发明专利技术涉及通过使用经工程化的引导RNA和包含该引导RNA的经工程化的CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统来切割、编辑或修饰靶核酸的方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增加CRISPR/CAS12F1(CAS14A1)系统的效率的经工程化的引导RNA及其用途


[0001]相关申请
[0002]本公开要求2020年10月8日提交的第10
‑
2020
‑
0129937号韩国专利申请、2020年12月29日提交的第10
‑
2020
‑
0185528号韩国专利申请和2021年4月5日提交的第10
‑
2021
‑
0044152号韩国专利申请的优先权，以引用方式将其各自的公开内容整体并入本文。
[0003]本公开涉及经工程化的CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统。更具体地，本公开涉及用于更有效地执行靶核酸切割、编辑或修饰的经工程化的引导RNA，包含该引导RNA的经工程化的CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统及其用途。

技术介绍

[0004]CRISPR/Cas12f1系统是一种被归类为2类V型的CRISPR/Cas系统。之前的研究(Harrington等，Scienc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于CRISPR/Cas12f1(Cas14a1)系统的经工程化的引导RNA，所述经工程化的引导RNA包含经工程化的反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)和CRISPR RNA(crRNA)，其中，所述经工程化的tracrRNA被修饰为不包含5个或更多个连续的尿苷的序列，并按3'至5'的方向顺序包含第一序列、第二序列、第三序列、第四序列和第五序列，所述第一序列为5'
‑
CAAAUUCANNNVNCCUCUCCAAUUCUGCACAA
‑
3'(SEQ ID NO:194)或SEQ ID NO:194的一部分，其中，N各自独立地为A、C、G或U，V为A、C或G，并且其中，所述SEQ ID NO:194的一部分包含5
’‑
CAAAUUCANNNVN
‑3’
(SEQ ID NO:193)，并且不包含SEQ ID NO:194的3
’
端的至少一个核苷酸，所述第二序列为5'
‑
AUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUCGAAA
‑
3'(SEQ ID NO:211)或与SEQ ID NO:211具有至少70％或更高的序列同一性或序列相似性的序列，所述第三序列为5'
‑
GGCUGCUUGCAUCAGCCUA
‑
3'(SEQ ID NO:212)或与SEQ ID NO:212具有至少70％或更高的序列同一性或序列相似性的序列，所述第四序列为5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGU GAAGGUG
‑
3'(SEQ ID NO:213)或SEQ ID NO:213的一部分，其中，所述SEQ ID NO:213的一部分是通过从SEQ ID NO:213中删除至少一对形成互补碱基对的核苷酸和/或至少一个不参与形成互补碱基对的核苷酸而获得的序列，以及所述第五序列为5'
‑
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:248)或SEQ ID NO:248的一部分，其中，所述SEQ ID NO:248的一部分是SEQ ID NO:248的3
’
端的连续部分序列；并且所述crRNA为野生型crRNA或经工程化的crRNA，其中，所述野生型crRNA按5
’
至3
’
的方向顺序包含野生型重复序列和引导序列，以及所述经工程化的crRNA按5
’
至3
’
的方向顺序包含第六序列、第七序列和引导序列，其中，所述第六序列为5'
‑
GUUGCAGAACCCGAAUAGNBNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:373)或SEQ ID NO:373的一部分，其中，N各自独立地为A、C、G或U，B为U、C或G；并且，所述SEQ ID NO:373的一部分为包含5'
‑
NBNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:372)并且不包含SEQ ID NO:373的3
’
端的至少一个核苷酸的序列，所述第七序列为5
’‑
AUGCAAC
‑3’
或与5
’‑
AUGCAAC
‑3’
具有至少70％或更高的序列同一性或序列相似性的序列，并且所述引导序列是能够与靶序列杂交的序列或者与靶序列形成互补结合的序列，具有15至30个核苷酸(nt)。2.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述第一序列为5'
‑
CAAAUUCANNNCNCCUCUCCAAUUCUGCACAA
‑
3'(SEQ ID NO:111)或SEQ ID NO:111的一部分，其中，所述SEQ ID NO:111的一部分为
5
′‑
CAAAUUCANNNCNC
‑3′
(SEQ ID NO:290)或其中，N各自独立地为A、C、G或U。3.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述SEQ ID NO:213的一部分为
5
′‑
CCGCUUAGGGUG
‑3′
(SEQ ID NO:246)，5
′‑
CCGUUAGGUG
‑3′
(SEQ ID NO：247)，5
′‑
CCUUAGGUG
‑3′
，5
′‑
CUUAGUG
‑3′
，5
′‑
CUUAGG
‑3′
或5
′‑
UUAG
‑3′
，其中，包含在所述SEQ ID NO:213的一部分中的5
′‑
UUAG
‑3′
任选地替换为5
′‑
GAAA
‑3′
。4.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述SEQ ID NO:248的一部分为5'
‑
A
‑
3'、5'
‑
AA
‑
3'、5'
‑
GAA
‑
3'、5'
‑
AGAA
‑
3'、5'
‑
GAGAA
‑
3'、5'
‑
GGAGAA
‑
3'、5'
‑
UGGAGAA
‑
3'、5'
‑
GUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AGUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:249)、5'
‑
AAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:250)、5'
‑
UAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:251)、5'
‑
AUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:252)、5'
‑
GAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:253)、
5'
‑
UGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:254)、5'
‑
CUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:255)、5'
‑
ACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:256)、5'
‑
CACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:257)、5'
‑
UCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:258)或5'
‑
UUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:259)。5.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述第六序列为5'
‑
GUUGCAGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:408)或SEQ ID NO:408的一部分，其中，所述SEQ ID NO:408的一部分为5'
‑
UUGCAGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:413)、5'
‑
UGCAGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:414)、5'
‑
GCAGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:415)、5'
‑
CAGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:416)、5'
‑
AGAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:417)、5'
‑
GAACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:418)、5'
‑
AACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:419)、5'
‑
ACCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:420)、5'
‑
CCCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:421)、5'
‑
CCGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:422)、5'
‑
CGAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:423)、5'
‑
GAAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:424)、5'
‑
AAUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:425)、5'
‑
AUAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:426)、5'
‑
UAGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:427)、5'
‑
AGNGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:428)或5'
‑
NGNNNUGAAGGA
‑
3'(SEQ ID NO:412)，其中，N各自独立地为A、C、G或U。6.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述crRNA进一步包含富含U的尾部序列，所述富含U的尾部序列位于所述crRNA的3
’
端。7.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述富含U的尾部序列为5'
‑
(U
a
N)
d
U
e
‑
3'、5'
‑
U
a
VU
a
VU
e
‑
3'或5'
‑
U
a
VU
a
VU
a
VU
e
‑
3'；其中，N为A、C、G或U；V各自独立地为A、C或G；a为0
‑
4的整数；d为0
‑
3的整数；e为0
‑
10的整数。8.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的引导RNA为双引导RNA或单引导RNA，其中，当所述工程化的引导RNA为单引导RNA时，所述经工程化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：金龙三，金掉妍，李姃美，文秀彬，
申请(专利权)人：基恩科雷有限责任公司，
类型：发明
国别省市：