miR-7885-5p及其靶标基因PEPCK在制备白蚁解毒抑制剂及其应用制造技术

一种miR

【技术实现步骤摘要】
miR
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5p及其靶标基因PEPCK在制备白蚁解毒抑制剂及其应用


[0001]本专利技术涉及绿色生物防治
，具体涉及白蚁体内miR
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5p及其靶标基因PEPCK在抑制白蚁解毒能力，提高白蚁生物防治效果中的应用。

技术介绍

[0002]白蚁是一种全球性的经济害虫，在农作物、园林树木、房屋建筑和水库堤坝等都造成严重的危害，给人类的生命财产造成巨大威胁。在白蚁的防治中化学防治是最常见的防治手段。然而，化学防治存在很多的缺点，如：容易产生抗药性、会破坏生态平衡和污染环境。并且现在很多高度污染化学药剂已经被禁用。因此，研究和开发无毒、无污染、对环境友好的防治方法成为白蚁防治领域的迫切需求之一。
[0003]生物防治可以作为一种良好的方法替代化学防治。在自然界中，由真菌致死的昆虫约占全部病原微生物致病导致死亡的60%，而在生物防治中生防菌是其中一种得到广泛研究和应用的方法。目前，在绿色防控技术中，绿僵菌（Metarhizium）是最成功、最经济、最广泛、最安全的生防制剂之一。其寄主昆虫包括鳞翅目、膜翅目、双翅目、同翅目、半翅目等有害昆虫。这些昆虫专性致病真菌能够附着于昆虫表皮，在合适的温度下，萌发，产生芽管，并形成侵入钉。随后分泌几丁质酶，溶解昆虫体壁，并进入昆虫体腔，侵入昆虫的脂肪组织和肌肉。最后在昆虫体内繁殖，掠夺营养，产生毒素，从而导致昆虫死亡。然而，在野外利用真菌防治白蚁的效果并不理想，这是由于白蚁属于社会性昆虫，其巢内成员依赖社会免疫体系，进化出抵御真菌侵染和分解真菌毒素的防御反应。因此，如何削弱白蚁的这种防御反应是提高生防菌杀灭白蚁的关键。
[0004]目前，RNAi在鞘翅目、鳞翅目、半翅目、膜翅目、直翅目和缨翅目等农业昆虫及蜚蠊目和双翅目等有害昆虫中受到了广泛的关注。此外，RNAi结合生防菌协同防治有害昆虫（例如鳞翅目、双翅目和同翅目等有害昆虫）的方法得到研究者的广泛应用。这是因为，单纯通过RNAi致死有害昆虫依赖高浓度双链核酸。一些低浓度核酸虽然无法致死昆虫，但是可以显著削弱昆虫环境适应能力，如免疫力、解毒能力和抗氧化能力。在本专利技术中，申请人以白蚁解毒机制为靶标开发的白蚁解毒抑制剂，通过抑制白蚁的解毒机制，来降低白蚁分解绿僵菌毒素的能力，增强绿僵菌对白蚁的毒性，从而提高杀虫效果。使用白蚁解毒抑制剂可延缓白蚁产生抗药性，不仅可增强真菌的杀虫效果，而且能显著降低化学杀虫剂的使用量，避免造成环境污染。本专利技术拟以miR
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5p及其靶标基因PEPCK来制备白蚁解毒抑制剂，从而提高生防菌对白蚁的杀灭效果。通过喂食miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA实验发现，miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA都能够增强金龟子绿僵菌对白蚁的毒性，从而提高生防菌对白蚁的杀灭效果。
[0005]
技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供miR
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5p及其靶标基因PEPCK的序列，和miR
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5p模拟物以及PEPCKsiRNA在抑制白蚁解毒能力，促进金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果中的应用。
[0007]一种增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物及PEPCKsiRNA，其特征在于，miR
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5p模拟物的RNA序列为SEQ ID NO: 1，PEPCKsiRNA来源于PEPCKdsRNA，PEPCKdsRNA的RNA序列为SEQ ID NO: 2。
[0008]所述的增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA在制备白蚁解毒抑制剂上的应用。
[0009]所述的增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA结合纳米载体在制备以miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA为活性成分的白蚁解毒抑制剂上的应用，纳米载体包括壳聚糖、脂质体、水滑石、碳量子点以及其他以保护miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA为目的的材料。
[0010]所述的miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA协同金龟子绿僵菌在制备用于防治白蚁的产品中的应用。
[0011]一种防治白蚁的方法，将miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA分别与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，即可实现抑制白蚁解毒能力。
[0012]一种防治白蚁的方法，将miR
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5p模拟物和PEPCKsiRNA分别与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，使用金龟子绿僵菌孢子悬浮液感染取食miR
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5p模拟物或PEPCKsiRNA的白蚁，实现防治。
[0013]一种增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物的制备方法，包括如下步骤：（1）将黑胸散白蚁体内miR
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5p，序列为SEQ ID NO: 3设计成4条单链DNA，4条单链DNA分别为：正义链1为SEQ ID NO: 4，正义链2为SEQ ID NO: 5，反义链1为SEQ ID NO: 6和反义链2为SEQ ID NO: 7；（2）正义链1与正义链2等量混合后，进行退火PCR得到miR
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5p正义链DNA模板；（3）反义链1与反义链2等量混合后，进行退火PCR得到miR
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5p反义链DNA模板；（4）将miR
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5p正义链DNA模板与反义链DNA模板等量混合，通过T7体外转录系统获得miR
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5p模拟物，miR
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5p模拟物RNA序列为SEQ ID NO: 1（图1A）。
[0014]一种增强生防菌杀灭白蚁效果的PEPCKsiRNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）根据黑胸散白蚁体内PEPCK的DNA序列SEQ ID NO: 8，设计2条扩增引物，分别为上游引物为SEQ ID NO: 9和下游引物为SEQ ID NO: 10，通过PCR扩增获得PEPCK基因片段，片段序列为S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物或PEPCK siRNA，其特征在于，miR
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5p模拟物的RNA序列为SEQ ID NO: 1；PEPCK siRNA来源于PEPCK dsRNA，PEPCK dsRNA的RNA序列为SEQ ID NO: 2。2. 权利要求1所述的增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物或PEPCK siRNA在制备白蚁解毒抑制剂上的应用。3. 权利要求1所述的增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物或PEPCK siRNA结合纳米载体在制备以miR
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5p模拟物和PEPCK siRNA为活性成分的白蚁解毒抑制剂上的应用，纳米载体包括壳聚糖、脂质体、水滑石、碳量子点或其他以保护miR
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5p模拟物和PEPCK siRNA为目的的材料中的任意一种。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述的白蚁解毒抑制剂协同金龟子绿僵菌在制备用于防治白蚁的产品中的应用。5. 一种防治白蚁的方法，其特征在于，将如权利要求1所述的miR
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5p模拟物或PEPCK siRNA分别与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，实现抑制白蚁解毒能力。6. 一种防治白蚁的方法，其特征在于，按照权利要求5所述的方法利用miR
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5p模拟物或PEPCK siRNA分别喂食白蚁后，使用金龟子绿僵菌孢子悬浮液感染喂食后的白蚁，实现防治。7.一种增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR
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5p模拟物的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘龙，王东槐，汤清波，雷彩燕，黄求应，张元臣，张鑫，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：